YEPlac112酿酒酵母质粒

基本信息
名称：YEPlac112酿酒酵母质粒
别称: YEPlac112

复制子:	2U
原核抗性:	Amp
筛选标记:	TRP1
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	酵母菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
筛选标记：	TRP1
荧光蛋白：

质粒简介
 YEPlac112酿酒酵母质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4989 bp ds-DNA     circular SYN 01-MAR-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    YEplac112
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4989)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4989
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     protein_bind    106..127
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     promoter        142..172
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    180..196
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     primer_bind     204..220
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     CDS             216..530
                     /codon_start=1
                     /gene="lacZ fragment"
                     /product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
                     /note="lacZ-alpha"
                     /translation="MTMITPSLHACRSTLEDPRVPSSNSLAVVLQRRDWENPGVTQLNR
                     LAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRIYRIVLVTHH
                     "
     misc_feature    233..289
                     /note="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     primer_bind     complement(290..306)
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     rep_origin      743..2089
                     /note="2u ori"
                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"
     CDS             complement(2201..2875)
                     /codon_start=1
                     /gene="S. cerevisiae TRP1"
                     /product="phosphoribosylanthranilate isomerase, required 
                     for tryptophan biosynthesis"
                     /note="TRP1"
                     /note="yeast auxotrophic marker"
                     /translation="MSVINFTGSSGPLVKVCGLQSTEAAECALDSDADLLGIICVPNRK
                     RTIDPVIARKISSLVKAYKNSSGTPKYLVGVFRNQPKEDVLALVNDYGIDIVQLHGDES
                     WQEYQEFLGLPVIKRLVFPKDCNILLSAASQKPHSFIPLFDSEAGGTGELLDWNSISDW
                     VGRQESPESLHFMLAGGLTPENVGDALRLNGVIGVDVSGGVETNGVKDSNKIANFVKNA
                     KK"
     promoter        complement(2876..2977)
                     /gene="S. cerevisiae TRP1"
                     /note="TRP1 promoter"
     promoter        3083..3187
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             3188..4048
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      4219..4807
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca
       61 cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct
      121 cactcattag gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat
      181 tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagcttgc
      241 atgcctgcag gtcgactcta gaggatcccc gggtaccgag ctcgaattca ctggccgtcg
      301 ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca acttaatcgc cttgcagcac
      361 atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg caccgatcgc ccttcccaac
      421 agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt
      481 gcggtatttc acaccgcata tatcggatcg tacttgttac ccatcattga attttgaaca
      541 tccgaacctg ggagttttcc ctgaaacaga tagtatattt gaacctgtat aataatatat
      601 agtctagcgc tttacggaag acaatgtatg tatttcggtt cctggagaaa ctattgcatc
      661 tattgcatag gtaatcttgc acgtcgcatc cccggttcat tttctgcgtt tccatcttgc
      721 acttcaatag catatctttg ttaacgaagc atctgtgctt cattttgtag aacaaaaatg
      781 caacgcgaga gcgctaattt ttcaaacaaa gaatctgagc tgcattttta cagaacagaa
      841 atgcaacgcg aaagcgctat tttaccaacg aagaatctgt gcttcatttt tgtaaaacaa
      901 aaatgcaacg cgagagcgct aatttttcaa acaaagaatc tgagctgcat ttttacagaa
      961 cagaaatgca acgcgagagc gctattttac caacaaagaa tctatacttc ttttttgttc
     1021 tacaaaaatg catcccgaga gcgctatttt tctaacaaag catcttagat tacttttttt
     1081 ctcctttgtg cgctctataa tgcagtctct tgataacttt ttgcactgta ggtccgttaa
     1141 ggttagaaga aggctacttt ggtgtctatt ttctcttcca taaaaaaagc ctgactccac
     1201 ttcccgcgtt tactgattac tagcgaagct gcgggtgcat tttttcaaga taaaggcatc
     1261 cccgattata ttctataccg atgtggattg cgcatacttt gtgaacagaa agtgatagcg
     1321 ttgatgattc ttcattggtc agaaaattat gaacggtttc ttctattttg tctctatata
     1381 ctacgtatag gaaatgttta cattttcgta ttgttttcga ttcactctat gaatagttct
     1441 tactacaatt tttttgtcta aagagtaata ctagagataa acataaaaaa tgtagaggtc
     1501 gagtttagat gcaagttcaa ggagcgaaag gtggatgggt aggttatata gggatatagc
     1561 acagagatat atagcaaaga gatacttttg agcaatgttt gtggaagcgg tattcgcaat
     1621 attttagtag ctcgttacag tccggtgcgt ttttggtttt ttgaaagtgc gtcttcagag
     1681 cgcttttggt tttcaaaagc gctctgaagt tcctatactt tctagctaga gaataggaac
     1741 ttcggaatag gaacttcaaa gcgtttccga aaacgagcgc ttccgaaaat gcaacgcgag
     1801 ctgcgcacat acagctcact gttcacgtcg cacctatatc tgcgtgttgc ctgtatatat
     1861 atatacatga gaagaacggc atagtgcgtg tttatgctta aatgcgtact tatatgcgtc
     1921 tatttatgta ggatgaaagg tagtctagta cctcctgtga tattatccca ttccatgcgg
     1981 ggtatcgtat gcttccttca gcactaccct ttagctgttc tatatgctgc cactcctcaa
     2041 ttggattagt ctcatccttc aatgctatca tttcctttga tattggatcg atccgatgat
     2101 aagctgtcaa acatgagaat tgatctttta tgcttgcttt tcaaaaggct tgcaggcaag
     2161 tgcacaaaca atacttaaat aaatactact cagtaataac ctatttctta gcatttttga
     2221 cgaaatttgc tattttgtta gagtctttta caccatttgt ctccacacct ccgcttacat
     2281 caacaccaat aacgccattt aatctaagcg catcaccaac attttctggc gtcagtccac
     2341 cagctaacat aaaatgtaag ctctcggggc tctcttgcct tccaacccag tcagaaatcg
     2401 agttccaatc caaaagttca cctgtcccac ctgcttctga atcaaacaag ggaataaacg
     2461 aatgaggttt ctgtgaagct gcactgagta gtatgttgca gtcttttgga aatacgagtc
     2521 ttttaataac tggcaaaccg aggaactctt ggtattcttg ccacgactca tctccatgca
     2581 gttggacgat atcaatgccg taatcattga ccagagccaa aacatcctcc ttaggttgat
     2641 tacgaaacac gccaaccaag tatttcggag tgcctgaact atttttatat gcttttacaa
     2701 gacttgaaat tttccttgca ataaccgggt caattgttct ctttctattg ggcacacata
     2761 taatacccag caagtcagca tcggaatcta gtgcacattc tgcggcctct gtgctctgca
     2821 agccgcaaac tttcaccaat ggaccagaac tacctgtgaa attaataaca gacatactcc
     2881 aagctgcctt tgtgtgctta atcacgtata ctcacgtgct caatagtcac caatgccctc
     2941 cctcttggcc ctctcctttt cttttttcga ccgaattaat tcttgaagac gaaagggcct
     3001 cgtgatacgc ctatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg
     3061 tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc
     3121 aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag
     3181 gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg
     3241 ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt
     3301 gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt
     3361 tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt
     3421 attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa
     3481 tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag
     3541 agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac
     3601 aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac
     3661 tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac
     3721 cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac
     3781 tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact
     3841 tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg
     3901 tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt
     3961 tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat
     4021 aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta
     4081 gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa
     4141 tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
     4201 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
     4261 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
     4321 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc
     4381 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
     4441 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
     4501 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
     4561 cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag
     4621 cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac
     4681 aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg
     4741 gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct
     4801 atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc
     4861 tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga
     4921 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
     4981 agcggaaga
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1844/pENTR223-MAPK15人源基因质粒

P1845/pENTR223-HMGN3人源基因质粒

P1860/pENTR223-IMAGE3462332人源基因质粒

P1880/pENTR223-ICMT人源基因质粒

P1895/pENTR223-PIP4K2B人源基因质粒

P1896/pENTR223-LOC142937人源基因质粒

P1897/pENTR223-INIP人源基因质粒

P1898/pENTR223-SPCS1人源基因质粒

P1899/pENTR223-ANAPC16人源基因质粒

P1900/pENTR223-BLOC1S2人源基因质粒

P1901/pENTR223-MGST1人源基因质粒