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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pYES2/NTA
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pYES2/NTA酿酒酵母质粒
别称: pYES2/NTA
质粒属性
质粒简介
pYES2-NTA质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6038 bp ds-DNA circular SYN 10-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
REFERENCE 1 (bases 1 to 6038)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6038
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 2..443
/gene="S. cerevisiae GAL1"
/label=GAL1 promoter
/note="inducible promoter, regulated by Gal4"
protein_bind 2..119
/label=UAS
/bound_moiety="Gal4"
/note="upstream activating sequence mediating
Gal4-dependent induction"
promoter 475..493
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 522..539
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
CDS 543..575
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/label=T7 tag (gene 10 leader)
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
CDS 579..602
/codon_start=1
/product="Xpress(TM) epitope tag, including an enterokinase
recognition and cleavage site"
/label=Xpress(TM) tag
/translation="DLYDDDDK"
CDS 682..723
/codon_start=1
/product="epitope tag from simian virus 5"
/label=V5 tag
/translation="GKPIPNPLLGLDST"
CDS 733..750
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
terminator 784..1031
/gene="S. cerevisiae CYC1"
/label=CYC1 terminator
/note="transcription terminator for CYC1"
rep_origin complement(1279..1867)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2038..2898)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCDTLLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDESDTTMPVAMPTTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKRSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
CDS complement(2994..3797)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/label=URA3
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
promoter complement(3798..4013)
/gene="S. cerevisiae URA3"
/label=URA3 promoter
rep_origin 4617..5497
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
rep_origin complement(5566..6021)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt
61 cctcgtcttc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga
121 acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac
181 ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga
241 ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat
301 taacagatat ataaatgcaa aaactgcata accactttaa ctaatacttt caacattttc
361 ggtttgtatt acttcttatt caaatgtaat aaaagtatca acaaaaaatt gttaatatac
421 ctctatactt taacgtcaag gagaaaaaac cccggatcgg actactagca gctgtaatac
481 gactcactat agggaatatt aagcttacca tggggggttc tcatcatcat catcatcatg
541 gtatggctag catgactggt ggacagcaaa tgggtcggga tctgtacgac gatgacgata
601 aggtacctag gatccagtgt ggtggaattc tgcagatatc cagcacagtg gcggccgctc
661 gagtctagag ggcccttcga aggtaagcct atccctaacc ctctcctcgg tctcgattct
721 acgcgtaccg gtcatcatca ccatcaccat tgagtttaaa cccgctgatc ctagagggcc
781 gcatcatgta attagttatg tcacgcttac attcacgccc tccccccaca tccgctctaa
841 ccgaaaagga aggagttaga caacctgaag tctaggtccc tatttatttt tttatagtta
901 tgttagtatt aagaacgtta tttatatttc aaatttttct tttttttctg tacagacgcg
961 tgtacgcatg taacattata ctgaaaacct tgcttgagaa ggttttggga cgctcgaagg
1021 ctttaatttg caagctgcgg ccctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
1081 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
1141 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
1201 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aagcccagga accgtaaaaa
1261 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
1321 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
1381 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
1441 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
1501 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
1561 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
1621 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
1681 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
1741 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
1801 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
1861 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
1921 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
1981 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
2041 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
2101 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag cgcttaccat ctggccccag
2161 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
2221 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
2281 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
2341 tgttggcatt gctacaggca tcgtggtgtc actctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
2401 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
2461 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
2521 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
2581 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
2641 ttgcccggcg tcaatacggg ataatagtgt atcacatagc agaactttaa aagtgctcat
2701 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
2761 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
2821 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
2881 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatgggta ataactgata taattaaatt
2941 gaagctctaa tttgtgagtt tagtatacat gcatttactt ataatacagt tttttagttt
3001 tgctggccgc atcttctcaa atatgcttcc cagcctgctt ttctgtaacg ttcaccctct
3061 accttagcat cccttccctt tgcaaatagt cctcttccaa caataataat gtcagatcct
3121 gtagagacca catcatccac ggttctatac tgttgaccca atgcgtctcc cttgtcatct
3181 aaacccacac cgggtgtcat aatcaaccaa tcgtaacctt catctcttcc acccatgtct
3241 ctttgagcaa taaagccgat aacaaaatct ttgtcgctct tcgcaatgtc aacagtaccc
3301 ttagtatatt ctccagtaga tagggagccc ttgcatgaca attctgctaa catcaaaagg
3361 cctctaggtt cctttgttac ttcttctgcc gcctgcttca aaccgctaac aatacctggg
3421 cccaccacac cgtgtgcatt cgtaatgtct gcccattctg ctattctgta tacacccgca
3481 gagtactgca atttgactgt attaccaatg tcagcaaatt ttctgtcttc gaagagtaaa
3541 aaattgtact tggcggataa tgcctttagc ggcttaactg tgccctccat ggaaaaatca
3601 gtcaagatat ccacatgtgt ttttagtaaa caaattttgg gacctaatgc ttcaactaac
3661 tccagtaatt ccttggtggt acgaacatcc aatgaagcac acaagtttgt ttgcttttcg
3721 tgcatgatat taaatagctt ggcagcaaca ggactaggat gagtagcagc acgttcctta
3781 tatgtagctt tcgacatgat ttatcttcgt ttcctgcagg tttttgttct gtgcagttgg
3841 gttaagaata ctgggcaatt tcatgtttct tcaacactac atatgcgtat atataccaat
3901 ctaagtctgt gctccttcct tcgttcttcc ttctgttcgg agattaccga atcaaaaaaa
3961 tttcaaagaa accgaaatca aaaaaaagaa taaaaaaaaa atgatgaatt gaattgaaaa
4021 gctagcttat cgatgataag ctgtcaaaga tgagaattaa ttccacggac tatagactat
4081 actagatact ccgtctactg tacgatacac ttccgctcag gtccttgtcc tttaacgagg
4141 ccttaccact cttttgttac tctattgatc cagctcagca aaggcagtgt gatctaagat
4201 tctatcttcg cgatgtagta aaactagcta gaccgagaaa gagactagaa atgcaaaagg
4261 cacttctaca atggctgcca tcattattat ccgatgtgac gctgcagctt ctcaatgata
4321 ttcgaatacg ctttgaggag atacagccta atatccgaca aactgtttta cagatttacg
4381 atcgtacttg ttacccatca ttgaattttg aacatccgaa cctgggagtt ttccctgaaa
4441 cagatagtat atttgaacct gtataataat atatagtcta gcgctttacg gaagacaatg
4501 tatgtatttc ggttcctgga gaaactattg catctattgc ataggtaatc ttgcacgtcg
4561 catccccggt tcattttctg cgtttccatc ttgcacttca atagcatatc tttgttaacg
4621 aagcatctgt gcttcatttt gtagaacaaa aatgcaacgc gagagcgcta atttttcaaa
4681 caaagaatct gagctgcatt tttacagaac agaaatgcaa cgcgaaagcg ctattttacc
4741 aacgaagaat ctgtgcttca tttttgtaaa acaaaaatgc aacgcgacga gagcgctaat
4801 ttttcaaaca aagaatctga gctgcatttt tacagaacag aaatgcaacg cgagagcgct
4861 attttaccaa caaagaatct atacttcttt tttgttctac aaaaatgcat cccgagagcg
4921 ctatttttct aacaaagcat cttagattac tttttttctc ctttgtgcgc tctataatgc
4981 agtctcttga taactttttg cactgtaggt ccgttaaggt tagaagaagg ctactttggt
5041 gtctattttc tcttccataa aaaaagcctg actccacttc ccgcgtttac tgattactag
5101 cgaagctgcg ggtgcatttt ttcaagataa aggcatcccc gattatattc tataccgatg
5161 tggattgcgc atactttgtg aacagaaagt gatagcgttg atgattcttc attggtcaga
5221 aaattatgaa cggtttcttc tattttgtct ctatatacta cgtataggaa atgtttacat
5281 tttcgtattg ttttcgattc actctatgaa tagttcttac tacaattttt ttgtctaaag
5341 agtaatacta gagataaaca taaaaaatgt agaggtcgag tttagatgca agttcaagga
5401 gcgaaaggtg gatgggtagg ttatataggg atatagcaca gagatatata gcaaagagat
5461 acttttgagc aatgtttgtg gaagcggtat tcgcaatggg aagctccacc ccggttgata
5521 atcagaaaag ccccaaaaac aggaagattg tataagcaaa tatttaaatt gtaaacgtta
5581 atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aacgaatagc
5641 ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg
5701 ttccagtttc caacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa
5761 aaagggtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg
5821 ggtcgaggtg ccgtaaagca gtaaatcgga agggtaaacg gatgccccca tttagagctt
5881 gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcggggg
5941 ctagggcggt gggaagtgta ggggtcacgc tgggcgtaac caccacaccc gccgcgctta
6001 atggggcgct acagggcgcg tggggatgat ccactagt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pYES2/NTA酿酒酵母质粒
别称: pYES2/NTA
| 启动子: | GAL1 |
|---|---|
| 复制子: | pUC,2U |
| 质粒分类: | 酿酒酵母表达质粒 |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | URA3 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | URA3 |
| 荧光蛋白： |
pYES2-NTA质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6038 bp ds-DNA circular SYN 10-NOV-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
REFERENCE 1 (bases 1 to 6038)
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6038
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/translation="HHHHHH"
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/gene="S. cerevisiae CYC1"
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replication"
CDS complement(2038..2898)
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EPELNEAIPNDESDTTMPVAMPTTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKRSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
CDS complement(2994..3797)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae URA3"
/product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required
for uracil biosynthesis"
/label=URA3
/note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with
5-fluoroorotic acid (5-FOA)"
/translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL
ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ
YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE
YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD
VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"
promoter complement(3798..4013)
/gene="S. cerevisiae URA3"
/label=URA3 promoter
rep_origin 4617..5497
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
rep_origin complement(5566..6021)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 acggattaga agccgccgag cgggtgacag ccctccgaag gaagactctc ctccgtgcgt
61 cctcgtcttc accggtcgcg ttcctgaaac gcagatgtgc ctcgcgccgc actgctccga
121 acaataaaga ttctacaata ctagctttta tggttatgaa gaggaaaaat tggcagtaac
181 ctggccccac aaaccttcaa atgaacgaat caaattaaca accataggat gataatgcga
241 ttagtttttt agccttattt ctggggtaat taatcagcga agcgatgatt tttgatctat
301 taacagatat ataaatgcaa aaactgcata accactttaa ctaatacttt caacattttc
361 ggtttgtatt acttcttatt caaatgtaat aaaagtatca acaaaaaatt gttaatatac
421 ctctatactt taacgtcaag gagaaaaaac cccggatcgg actactagca gctgtaatac
481 gactcactat agggaatatt aagcttacca tggggggttc tcatcatcat catcatcatg
541 gtatggctag catgactggt ggacagcaaa tgggtcggga tctgtacgac gatgacgata
601 aggtacctag gatccagtgt ggtggaattc tgcagatatc cagcacagtg gcggccgctc
661 gagtctagag ggcccttcga aggtaagcct atccctaacc ctctcctcgg tctcgattct
721 acgcgtaccg gtcatcatca ccatcaccat tgagtttaaa cccgctgatc ctagagggcc
781 gcatcatgta attagttatg tcacgcttac attcacgccc tccccccaca tccgctctaa
841 ccgaaaagga aggagttaga caacctgaag tctaggtccc tatttatttt tttatagtta
901 tgttagtatt aagaacgtta tttatatttc aaatttttct tttttttctg tacagacgcg
961 tgtacgcatg taacattata ctgaaaacct tgcttgagaa ggttttggga cgctcgaagg
1021 ctttaatttg caagctgcgg ccctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
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1261 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
1321 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
1381 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
1441 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
1501 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
1561 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
1621 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
1681 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
1741 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
1801 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
1861 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
1921 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
1981 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
2041 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
2101 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag cgcttaccat ctggccccag
2161 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
2221 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
2281 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
2341 tgttggcatt gctacaggca tcgtggtgtc actctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
2401 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
2461 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
2521 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
2581 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
2641 ttgcccggcg tcaatacggg ataatagtgt atcacatagc agaactttaa aagtgctcat
2701 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
2761 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
2821 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
2881 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatgggta ataactgata taattaaatt
2941 gaagctctaa tttgtgagtt tagtatacat gcatttactt ataatacagt tttttagttt
3001 tgctggccgc atcttctcaa atatgcttcc cagcctgctt ttctgtaacg ttcaccctct
3061 accttagcat cccttccctt tgcaaatagt cctcttccaa caataataat gtcagatcct
3121 gtagagacca catcatccac ggttctatac tgttgaccca atgcgtctcc cttgtcatct
3181 aaacccacac cgggtgtcat aatcaaccaa tcgtaacctt catctcttcc acccatgtct
3241 ctttgagcaa taaagccgat aacaaaatct ttgtcgctct tcgcaatgtc aacagtaccc
3301 ttagtatatt ctccagtaga tagggagccc ttgcatgaca attctgctaa catcaaaagg
3361 cctctaggtt cctttgttac ttcttctgcc gcctgcttca aaccgctaac aatacctggg
3421 cccaccacac cgtgtgcatt cgtaatgtct gcccattctg ctattctgta tacacccgca
3481 gagtactgca atttgactgt attaccaatg tcagcaaatt ttctgtcttc gaagagtaaa
3541 aaattgtact tggcggataa tgcctttagc ggcttaactg tgccctccat ggaaaaatca
3601 gtcaagatat ccacatgtgt ttttagtaaa caaattttgg gacctaatgc ttcaactaac
3661 tccagtaatt ccttggtggt acgaacatcc aatgaagcac acaagtttgt ttgcttttcg
3721 tgcatgatat taaatagctt ggcagcaaca ggactaggat gagtagcagc acgttcctta
3781 tatgtagctt tcgacatgat ttatcttcgt ttcctgcagg tttttgttct gtgcagttgg
3841 gttaagaata ctgggcaatt tcatgtttct tcaacactac atatgcgtat atataccaat
3901 ctaagtctgt gctccttcct tcgttcttcc ttctgttcgg agattaccga atcaaaaaaa
3961 tttcaaagaa accgaaatca aaaaaaagaa taaaaaaaaa atgatgaatt gaattgaaaa
4021 gctagcttat cgatgataag ctgtcaaaga tgagaattaa ttccacggac tatagactat
4081 actagatact ccgtctactg tacgatacac ttccgctcag gtccttgtcc tttaacgagg
4141 ccttaccact cttttgttac tctattgatc cagctcagca aaggcagtgt gatctaagat
4201 tctatcttcg cgatgtagta aaactagcta gaccgagaaa gagactagaa atgcaaaagg
4261 cacttctaca atggctgcca tcattattat ccgatgtgac gctgcagctt ctcaatgata
4321 ttcgaatacg ctttgaggag atacagccta atatccgaca aactgtttta cagatttacg
4381 atcgtacttg ttacccatca ttgaattttg aacatccgaa cctgggagtt ttccctgaaa
4441 cagatagtat atttgaacct gtataataat atatagtcta gcgctttacg gaagacaatg
4501 tatgtatttc ggttcctgga gaaactattg catctattgc ataggtaatc ttgcacgtcg
4561 catccccggt tcattttctg cgtttccatc ttgcacttca atagcatatc tttgttaacg
4621 aagcatctgt gcttcatttt gtagaacaaa aatgcaacgc gagagcgcta atttttcaaa
4681 caaagaatct gagctgcatt tttacagaac agaaatgcaa cgcgaaagcg ctattttacc
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4801 ttttcaaaca aagaatctga gctgcatttt tacagaacag aaatgcaacg cgagagcgct
4861 attttaccaa caaagaatct atacttcttt tttgttctac aaaaatgcat cccgagagcg
4921 ctatttttct aacaaagcat cttagattac tttttttctc ctttgtgcgc tctataatgc
4981 agtctcttga taactttttg cactgtaggt ccgttaaggt tagaagaagg ctactttggt
5041 gtctattttc tcttccataa aaaaagcctg actccacttc ccgcgtttac tgattactag
5101 cgaagctgcg ggtgcatttt ttcaagataa aggcatcccc gattatattc tataccgatg
5161 tggattgcgc atactttgtg aacagaaagt gatagcgttg atgattcttc attggtcaga
5221 aaattatgaa cggtttcttc tattttgtct ctatatacta cgtataggaa atgtttacat
5281 tttcgtattg ttttcgattc actctatgaa tagttcttac tacaattttt ttgtctaaag
5341 agtaatacta gagataaaca taaaaaatgt agaggtcgag tttagatgca agttcaagga
5401 gcgaaaggtg gatgggtagg ttatataggg atatagcaca gagatatata gcaaagagat
5461 acttttgagc aatgtttgtg gaagcggtat tcgcaatggg aagctccacc ccggttgata
5521 atcagaaaag ccccaaaaac aggaagattg tataagcaaa tatttaaatt gtaaacgtta
5581 atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aacgaatagc
5641 ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg
5701 ttccagtttc caacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa
5761 aaagggtcta tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg
5821 ggtcgaggtg ccgtaaagca gtaaatcgga agggtaaacg gatgccccca tttagagctt
5881 gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcggggg
5941 ctagggcggt gggaagtgta ggggtcacgc tgggcgtaac caccacaccc gccgcgctta
6001 atggggcgct acagggcgcg tggggatgat ccactagt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0481/pRS425酿酒酵母质粒 |
| P0459/pRS426酿酒酵母质粒 |
| P0226/p426gal酿酒酵母质粒 |
| P0824/pYX212酿酒酵母质粒 |
| P1151/pYIplac211酿酒酵母质粒 |
| P0825/pKLAC1乳酸酵母质粒 |
| P0836/YCp50出芽酵母质粒 |
| P1766/pDUAL-HFG1酿酒酵母质粒 |
| P1616/pY26TEF-GPD酵母双框质粒 |
| P1892/pUG34酵母表达质粒 |
| P2128/pCEV-G4-Km酵母表达质粒 |
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文献和实验相关实验
后可以得到多个整合拷贝，在数量上占有优势。 附加型载体则是以其自身来源的2μ质粒作为出发质粒衍生出的多种表达载体。这类载体在酵母细胞内本身拥有独立自主复制的能力，常以30或更多拷贝数存在。AtaGenix的pYES2-NTA就是这种类型的表达载体，可使外源基因得到有效表达。 通常酿酒酵母宿主菌是各式各样的营养缺陷型（如his3-，leu-，trp-，ura3-等）酵母菌，能适用于不同载体的转化筛选。但是在表达外源蛋白时，常会出现载体丢失、蛋白产物不均一、过度糖基化、不易积累以及副
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pYES2.0 酵母质粒 Amp 酿酒酵母载体 pRS403 酵母质粒 pRS423 酵母质粒 pRC426gal 酵母质粒
pYES2/NTA酿酒酵母质粒
￥100 - 1000
