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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
KF876796.1pYBA1132
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pYBA-1132植物表达质粒
别称: KF876796.1pYBA1132
质粒属性
质粒简介
pYBA-1132是一个植物表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6566 bp ds-DNA circular SYN 14-MAY-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6566
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 267..1061
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Kan"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
misc_feature 1248..1272
/note="LB T-DNA repeat"
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
promoter 1375..1554
/note="NOS promoter"
/note="nopaline synthase promoter"
CDS 1599..2393
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
terminator 2394..2646
/note="NOS terminator"
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
promoter 2748..3093
/note="CaMV 35S promoter"
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
misc_feature 3098..3205
/note="MCS"
/note="pBluescript multiple cloning site"
CDS 3206..3922
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 4151..4175
/note="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS complement(4394..5056)
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/note="pBBR1 Rep"
/translation="MATQSREIGIQAKNKPGHWVQTERKAHEAWAGLIARKPTAAMLLH
HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
rep_origin 5057..5826
/note="pBBR1 oriV"
/note="replication origin of the broad-host-range plasmid
pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
rep_origin 5978..6566
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 ctgggatgaa tgtcagctac tgggctatct ggacaaggga aaacgcaagc gcaaagagaa
61 agcaggtagc ttgcagtggg cttacatggc gatagctaga ctgggcggtt ttatggacag
121 caagcgaacc ggaattgcca gctggggcgc cctctggtaa ggttgggaag ccctgcaaag
181 taaactggat ggctttcttg ccgccaagga tctgatggcg caggggatca agatctgatc
241 aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc
301 cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct
361 ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg
421 acctgtccgg tgccctgaat gaacttcagg acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca
481 cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc
541 tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga
601 aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc
661 cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc
721 ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg
781 ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct
841 gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc
901 tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc
961 ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc
1021 agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga
1081 aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt
1141 ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg
1201 cggggatctc atgctggagt tcttcgccca cccccatggg caaatcgtgg caggatatat
1261 tgtggtgtaa acacgcgtca cgtggcgcgc cgatcatgag cggagaatta agggagtcac
1321 gttatgaccc ccgccgatga cgcgggacaa gccgttttac gtttggaact gacagaaccg
1381 caacgttgaa ggagccactc agccgcgggt ttctggagtt taatgagcta agcacatacg
1441 tcagaaacca ttattgcgcg ttcaaaagtc gcctaaggtc actatcagct agcaaatatt
1501 tcttgtcaaa aatgctccac tgacgttcca taaattcccc tcggtatcca attagagtct
1561 catattcact ctcaatccaa ataatctgca ccggatctat gattgaacaa gatggattgc
1621 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga
1681 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt
1741 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaacttca ggacgaggca gcgcggctat
1801 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg
1861 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg
1921 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc
1981 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga
2041 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag
2101 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc
2161 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg
2221 actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata
2281 ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg
2341 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagatcgtt
2401 caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt gcgatgatta
2461 tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa tgcatgacgt
2521 tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa tacgcgatag
2581 aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca tctatgttac
2641 tagatcggga ttaataggcc tcgtacgacc ggtaacatgg tggagcacga cactctggtc
2701 tactccaaaa atgtcaaaga tacagtctca gaagaccaaa gggctattga gacttttcaa
2761 caaaggataa tttcgggaaa cctcctcgga ttccattgcc cagctatctg tcacttcatc
2821 gaaaggacag tagaaaagga aggtggctcc tacaaatgcc atcattgcga taaaggaaag
2881 gctatcattc aagatctctc tgccgacagt ggtcccaaag atggaccccc acccacgagg
2941 agcatcgtgg aaaaagaaga cgttccaacc acgtcttcaa agcaagtgga ttgatgtgac
3001 atctccactg acgtaaggga tgacgcacaa tcccactatc cttcgcaaga cccttcctct
3061 atataaggaa gttcatttca tttggagagg acaattggag ctccaccgcg gtggcggccg
3121 ctctagaact agtggatccc ccgggctgca ggaattcgat atcaagctta tcgataccgt
3181 cgacctcgag ggggggcccg gtaccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt
3241 ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg
3301 cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg
3361 caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt
3421 cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg
3481 ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga
3541 ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa
3601 ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta
3661 tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat
3721 cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg
3781 ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc
3841 caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct
3901 cggcatggac gagctgtaca agtcgcgatg actaactagc aaatcaccag tctctctcta
3961 caaatctatc tctctctatt tttctccaga ataatgtgtg agtagttccc agataaggga
4021 attagggttc ttatagggtt tcgctcatgt gttgagcata taagaaaccc ttagtatgta
4081 tttgtatttg taaaatactt ctatcaataa aatttctaat tcctaaaacc aaaatccagt
4141 ttaaacgcgt tgacaggata tattggcggg taaactaagt cgctgtatgt gtttgtttgt
4201 attctgcctc ccagagcctg ataaaaacgg tgaatccgtt agcgaggtgc cgccggcttc
4261 cattcaggtc gaggtggccc ggctccatgc accgcgacgc aacgcgggga ggcagacaag
4321 gtatagggcg gcgaggcggc tacagccgat agtctggaac agcgcactta cgggttgctg
4381 cgcaacccaa gtgctaccgg cgcggcagcg tgacccgtgt cggcggctcc aacggctcgc
4441 catcgtccag aaaacacggc tcatcgggca tcggcaggcg ctgctgcccg cgccgttccc
4501 attcctccgt ttcggtcaag gctggcaggt ctggttccat gcccggaatg ccgggctggc
4561 tgggcggctc ctcgccgggg ccggtcggta gttgctgctc gcccggatac agggtcggga
4621 tgcggcgcag gtcgccatgc cccaacagcg attcgtcctg gtcgtcgtga tcaaccacca
4681 cggcggcact gaacaccgac aggcgcaact ggtcgcgggg ctggccccac gccacgcggt
4741 cattgaccac gtaggccgac acggtgccgg ggccgttgag cttcacgacg gagatccagc
4801 gctcggccac caagtccttg actgcgtatt ggaccgtccg caaagaacgt ccgatgagct
4861 tggaaagtgt cttctggctg accaccacgg cgttctggtg gcccatctgc gccacgaggt
4921 gatgcagcag cattgccgcc gtgggtttcc tcgcaataag cccggcccac gcctcatgcg
4981 ctttgcgttc cgtttgcacc cagtgaccgg gcttgttctt ggcttgaatg ccgatttctc
5041 tggactgcgt ggccatgctt atctccatgc ggtagggtgc cgcacggttg cggcaccatg
5101 cgcaatcagc tgcaactttt cggcagcgcg acaacaatta tgcgttgcgt aaaagtggca
5161 gtcaattaca gattttcttt aacctacgca atgagctatt gcggggggtg ccgcaatgag
5221 ctgttgcgta cccccctttt ttaagttgtt gatttttaag tctttcgcat ttcgccctat
5281 atctagttct ttggtgccca aagaagggca cccctgcggg gttcccccac gccttcggcg
5341 cggctccccc tccggcaaaa agtggcccct ccggggcttg ttgatcgact gcgcggcctt
5401 cggccttgcc caaggtggcg ctgccccctt ggaacccccg cactcgccgc cgtgaggctc
5461 ggggggcagg cgggcgggct tcgccttcga ctgcccccac tcgcataggc ttgggtcgtt
5521 ccaggcgcgt caaggccaag ccgctgcgcg gtcgctgcgc gagccttgac ccgccttcca
5581 cttggtgtcc aaccggcaag cgaagcgcgc aggccgcagg ccggaggctt ttccccagag
5641 aaaattaaaa aaattgatgg ggcaaggccg caggccgcgc agttggagcc ggtgggtatg
5701 tggtcgaagg ctgggtagcc ggtgggcaat ccctgtggtc aagctcgtgg gcaggcgcag
5761 cctgtccatc agcttgtcca gcagggttgt ccacgggccg agcgaagcga gccagccggt
5821 ggccgctcgc ggccatcgtc cacatatcca cgggctggca agggagcgca gcgaccgcgc
5881 agggcgaagc ccggagagca agcccgtagg gcgccgcagc cgccgtaggc ggtcacgact
5941 ttgcgaagca aagtctagtg agtatactca agctagcttg agatcctttt tttctgcgcg
6001 taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc
6061 aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata
6121 ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta
6181 catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc
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6421 taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt
6481 atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct
6541 cgtcaggggg gcggagccta tggaaa
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pYBA-1132植物表达质粒
别称: KF876796.1pYBA1132
| 启动子: | 35S |
|---|---|
| 复制子: | pBBR1 |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 植物 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 筛选标记： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pYBA-1132是一个植物表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6566 bp ds-DNA circular SYN 14-MAY-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6566
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 267..1061
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Kan"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
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promoter 1375..1554
/note="NOS promoter"
/note="nopaline synthase promoter"
CDS 1599..2393
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="Neo"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
terminator 2394..2646
/note="NOS terminator"
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promoter 2748..3093
/note="CaMV 35S promoter"
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
misc_feature 3098..3205
/note="MCS"
/note="pBluescript multiple cloning site"
CDS 3206..3922
/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
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/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 4151..4175
/note="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS complement(4394..5056)
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/note="pBBR1 Rep"
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HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
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pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
rep_origin 5978..6566
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 ctgggatgaa tgtcagctac tgggctatct ggacaaggga aaacgcaagc gcaaagagaa
61 agcaggtagc ttgcagtggg cttacatggc gatagctaga ctgggcggtt ttatggacag
121 caagcgaacc ggaattgcca gctggggcgc cctctggtaa ggttgggaag ccctgcaaag
181 taaactggat ggctttcttg ccgccaagga tctgatggcg caggggatca agatctgatc
241 aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc
301 cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct
361 ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg
421 acctgtccgg tgccctgaat gaacttcagg acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca
481 cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc
541 tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga
601 aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc
661 cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc
721 ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg
781 ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct
841 gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc
901 tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc
961 ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc
1021 agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga
1081 aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt
1141 ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg
1201 cggggatctc atgctggagt tcttcgccca cccccatggg caaatcgtgg caggatatat
1261 tgtggtgtaa acacgcgtca cgtggcgcgc cgatcatgag cggagaatta agggagtcac
1321 gttatgaccc ccgccgatga cgcgggacaa gccgttttac gtttggaact gacagaaccg
1381 caacgttgaa ggagccactc agccgcgggt ttctggagtt taatgagcta agcacatacg
1441 tcagaaacca ttattgcgcg ttcaaaagtc gcctaaggtc actatcagct agcaaatatt
1501 tcttgtcaaa aatgctccac tgacgttcca taaattcccc tcggtatcca attagagtct
1561 catattcact ctcaatccaa ataatctgca ccggatctat gattgaacaa gatggattgc
1621 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga
1681 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt
1741 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaacttca ggacgaggca gcgcggctat
1801 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg
1861 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg
1921 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc
1981 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga
2041 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag
2101 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc
2161 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg
2221 actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata
2281 ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg
2341 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagatcgtt
2401 caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt gcgatgatta
2461 tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa tgcatgacgt
2521 tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa tacgcgatag
2581 aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca tctatgttac
2641 tagatcggga ttaataggcc tcgtacgacc ggtaacatgg tggagcacga cactctggtc
2701 tactccaaaa atgtcaaaga tacagtctca gaagaccaaa gggctattga gacttttcaa
2761 caaaggataa tttcgggaaa cctcctcgga ttccattgcc cagctatctg tcacttcatc
2821 gaaaggacag tagaaaagga aggtggctcc tacaaatgcc atcattgcga taaaggaaag
2881 gctatcattc aagatctctc tgccgacagt ggtcccaaag atggaccccc acccacgagg
2941 agcatcgtgg aaaaagaaga cgttccaacc acgtcttcaa agcaagtgga ttgatgtgac
3001 atctccactg acgtaaggga tgacgcacaa tcccactatc cttcgcaaga cccttcctct
3061 atataaggaa gttcatttca tttggagagg acaattggag ctccaccgcg gtggcggccg
3121 ctctagaact agtggatccc ccgggctgca ggaattcgat atcaagctta tcgataccgt
3181 cgacctcgag ggggggcccg gtaccatggt gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt
3241 ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg
3301 cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg
3361 caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt
3421 cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg
3481 ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga
3541 ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa
3601 ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta
3661 tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat
3721 cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg
3781 ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc
3841 caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct
3901 cggcatggac gagctgtaca agtcgcgatg actaactagc aaatcaccag tctctctcta
3961 caaatctatc tctctctatt tttctccaga ataatgtgtg agtagttccc agataaggga
4021 attagggttc ttatagggtt tcgctcatgt gttgagcata taagaaaccc ttagtatgta
4081 tttgtatttg taaaatactt ctatcaataa aatttctaat tcctaaaacc aaaatccagt
4141 ttaaacgcgt tgacaggata tattggcggg taaactaagt cgctgtatgt gtttgtttgt
4201 attctgcctc ccagagcctg ataaaaacgg tgaatccgtt agcgaggtgc cgccggcttc
4261 cattcaggtc gaggtggccc ggctccatgc accgcgacgc aacgcgggga ggcagacaag
4321 gtatagggcg gcgaggcggc tacagccgat agtctggaac agcgcactta cgggttgctg
4381 cgcaacccaa gtgctaccgg cgcggcagcg tgacccgtgt cggcggctcc aacggctcgc
4441 catcgtccag aaaacacggc tcatcgggca tcggcaggcg ctgctgcccg cgccgttccc
4501 attcctccgt ttcggtcaag gctggcaggt ctggttccat gcccggaatg ccgggctggc
4561 tgggcggctc ctcgccgggg ccggtcggta gttgctgctc gcccggatac agggtcggga
4621 tgcggcgcag gtcgccatgc cccaacagcg attcgtcctg gtcgtcgtga tcaaccacca
4681 cggcggcact gaacaccgac aggcgcaact ggtcgcgggg ctggccccac gccacgcggt
4741 cattgaccac gtaggccgac acggtgccgg ggccgttgag cttcacgacg gagatccagc
4801 gctcggccac caagtccttg actgcgtatt ggaccgtccg caaagaacgt ccgatgagct
4861 tggaaagtgt cttctggctg accaccacgg cgttctggtg gcccatctgc gccacgaggt
4921 gatgcagcag cattgccgcc gtgggtttcc tcgcaataag cccggcccac gcctcatgcg
4981 ctttgcgttc cgtttgcacc cagtgaccgg gcttgttctt ggcttgaatg ccgatttctc
5041 tggactgcgt ggccatgctt atctccatgc ggtagggtgc cgcacggttg cggcaccatg
5101 cgcaatcagc tgcaactttt cggcagcgcg acaacaatta tgcgttgcgt aaaagtggca
5161 gtcaattaca gattttcttt aacctacgca atgagctatt gcggggggtg ccgcaatgag
5221 ctgttgcgta cccccctttt ttaagttgtt gatttttaag tctttcgcat ttcgccctat
5281 atctagttct ttggtgccca aagaagggca cccctgcggg gttcccccac gccttcggcg
5341 cggctccccc tccggcaaaa agtggcccct ccggggcttg ttgatcgact gcgcggcctt
5401 cggccttgcc caaggtggcg ctgccccctt ggaacccccg cactcgccgc cgtgaggctc
5461 ggggggcagg cgggcgggct tcgccttcga ctgcccccac tcgcataggc ttgggtcgtt
5521 ccaggcgcgt caaggccaag ccgctgcgcg gtcgctgcgc gagccttgac ccgccttcca
5581 cttggtgtcc aaccggcaag cgaagcgcgc aggccgcagg ccggaggctt ttccccagag
5641 aaaattaaaa aaattgatgg ggcaaggccg caggccgcgc agttggagcc ggtgggtatg
5701 tggtcgaagg ctgggtagcc ggtgggcaat ccctgtggtc aagctcgtgg gcaggcgcag
5761 cctgtccatc agcttgtcca gcagggttgt ccacgggccg agcgaagcga gccagccggt
5821 ggccgctcgc ggccatcgtc cacatatcca cgggctggca agggagcgca gcgaccgcgc
5881 agggcgaagc ccggagagca agcccgtagg gcgccgcagc cgccgtaggc ggtcacgact
5941 ttgcgaagca aagtctagtg agtatactca agctagcttg agatcctttt tttctgcgcg
6001 taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc
6061 aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata
6121 ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta
6181 catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc
6241 ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg
6301 ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac
6361 agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg
6421 taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt
6481 atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct
6541 cgtcaggggg gcggagccta tggaaa
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0063/pMal-c2X大肠表达质粒 |
| P0064/pMal-p2X大肠表达质粒 |
| P1362/pMal-c4X大肠表达质粒 |
| P0347/pMal-c5X大肠表达质粒 |
| P0065/pMal-p5X大肠表达质粒 |
| P0811/pMal-c5E大肠表达质粒 |
| P3012/pMal-T-Avi-His/BirA大肠表达质粒 |
| P0067/pQE-30大肠表达质粒 |
| P0068/pQE-30Xa大肠表达质粒 |
| P4200/pQE-30 UA大肠表达质粒 |
| P0069/pQE-31大肠表达质粒 |
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pYBA-1132植物表达质粒
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