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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#12259;VSVG
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pMD2.G慢病毒包装质粒
别称: Plasmid#12259;VSVG
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | beta-globin poly(A) |
| 质粒分类: | 病毒系列,慢病毒包装载体 |
| 质粒大小: | 5822bp |
| 质粒标签: | VSV-G |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导,瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途: | 包装辅助 |
| 基因种属: | 病毒 |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5822 bp ds-DNA circular SYN 24-OCT-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 3
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5822)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, October 24, 2016 from SnapGene Viewer 3.2.1
http://www.snapgenemialingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5822
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
polyA_site 1048..1442
/note="beta-globin poly(A)"
/note="human beta-globin polyadenylation signal"
rep_origin complement(1952..2540)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2711..3571)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3572..3676)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
enhancer 3867..4246
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4247..4450
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 4584..5059
/note="beta-globin intron"
/note="internally truncated intron from human beta-globin"
CDS 5134..847
/codon_start=1
/product="vesicular stomatitis virus G glycoprotein"
/note="VSV-G"
/note="Indiana strain"
/translation="MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSD
LNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPS
VEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQ
FINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFR
SNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQT
SVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLK
YFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFP
LYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWF
SSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK"
ORIGIN
1 tggaggcaag gcctgcaaaa tgcaatactg caagcattgg ggagtcagac tcccatcagg
61 tgtctggttc gagatggctg ataaggatct ctttgctgca gccagattcc ctgaatgccc
121 agaagggtca agtatctctg ctccatctca gacctcagtg gatgtaagtc taattcagga
181 cgttgagagg atcttggatt attccctctg ccaagaaacc tggagcaaaa tcagagcggg
241 tcttccaatc tctccagtgg atctcagcta tcttgctcct aaaaacccag gaaccggtcc
301 tgctttcacc ataatcaatg gtaccctaaa atactttgag accagataca tcagagtcga
361 tattgctgct ccaatcctct caagaatggt cggaatgatc agtggaacta ccacagaaag
421 ggaactgtgg gatgactggg caccatatga agacgtggaa attggaccca atggagttct
481 gaggaccagt tcaggatata agtttccttt atacatgatt ggacatggta tgttggactc
541 cgatcttcat cttagctcaa aggctcaggt gttcgaacat cctcacattc aagacgctgc
601 ttcgcaactt cctgatgatg agagtttatt ttttggtgat actgggctat ccaaaaatcc
661 aatcgagctt gtagaaggtt ggttcagtag ttggaaaagc tctattgcct cttttttctt
721 tatcataggg ttaatcattg gactattctt ggttctccga gttggtatcc atctttgcat
781 taaattaaag cacaccaaga aaagacagat ttatacagac atagagatga accgacttgg
841 aaagtaactc aaatcctgca caacagattc ttcatgtttg gaccaaatca acttgtgata
901 ccatgctcaa agaggcctca attatatttg agtttttaat ttttatgaaa aaaaaaaaaa
961 aaaacggaat tcaccccacc agtgcaggct gcctatcaga aagtggtggc tggtgtggct
1021 aatgccctgg cccacaagta tcactaagct cgctttcttg ctgtccaatt tctattaaag
1081 gttcctttgt tccctaagtc caactactaa actgggggat attatgaagg gccttgagca
1141 tctggattct gcctaataaa aaacatttat tttcattgca atgatgtatt taaattattt
1201 ctgaatattt tactaaaaag ggaatgtggg aggtcagtgc atttaaaaca taaagaaatg
1261 aagagctagt tcaaaccttg ggaaaataca ctatatctta aactccatga aagaaggtga
1321 ggctgcaaac agctaatgca cattggcaac agcccctgat gcctatgcct tattcatccc
1381 tcagaaaagg attcaagtag aggcttgatt tggaggttaa agttttgcta tgctgtattt
1441 tacattactt attgttttag ctgtcctcat gaatgtcttt tcactaccca tttgcttatc
1501 ctgcatctct cagccttgac tccactcagt tctcttgctt agagatacca cctttcccct
1561 gaagtgttcc ttccatgttt tacggcgaga tggtttctcc tcgcctggcc actcagcctt
1621 agttgtctct gttgtcttat agaggtctac ttgaagaagg aaaaacaggg ggcatggttt
1681 gactgtcctg tgagcccttc ttccctgcct cccccactca cagtgacccg gaatccctcg
1741 acatggcagt ctagcactag tgcggccgca gatctgcttc ctcgctcact gactcgctgc
1801 gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat
1861 ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca
1921 ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc
1981 atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc
2041 aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg
2101 gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta
2161 ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg
2221 ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac
2281 acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag
2341 gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat
2401 ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat
2461 ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc
2521 gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt
2581 ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct
2641 agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt
2701 ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc
2761 gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac
2821 catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat
2881 cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg
2941 cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata
3001 gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta
3061 tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt
3121 gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag
3181 tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa
3241 gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc
3301 gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt
3361 taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc
3421 tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta
3481 ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa
3541 taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca
3601 tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac
3661 aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgtggat cccctgaggg
3721 ggcccccatg ggctagagga tccggcctcg gcctctgcat aaataaaaaa aattagtcag
3781 ccatgagctt ggcccattgc atacgttgta tccatatcat aatatgtaca tttatattgg
3841 ctcatgtcca acattaccgc catgttgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc
3901 aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt
3961 aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta
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4081 gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga
4141 cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt
4201 tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg
4261 gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc
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4381 taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat
4441 aagcagagct cgtttagtga accgtcagat cgcctggaga cgccatccac gctgttttga
4501 cctccataga agacaccggg accgatccag cctcccctcg aagcttacat gtggtaccga
4561 gctcggatcc tgagaacttc agggtgagtc tatgggaccc ttgatgtttt ctttcccctt
4621 cttttctatg gttaagttca tgtcatagga aggggagaag taacagggta cacatattga
4681 ccaaatcagg gtaattttgc atttgtaatt ttaaaaaatg ctttcttctt ttaatatact
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4861 ggcaatagca atatttctgc atataaatat ttctgcatat aaattgtaac tgatgtaaga
4921 ggtttcatat tgctaatagc agctacaatc cagctaccat tctgctttta ttttatggtt
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5041 tcttatcttc ctcccacagc tcctgggcaa cgtgctggtc tgtgtgctgg cccatcactt
5101 tggcaaagca cgtgagatct gaattctgac actatgaagt gccttttgta cttagccttt
5161 ttattcattg gggtgaattg caagttcacc atagtttttc cacacaacca aaaaggaaac
5221 tggaaaaatg ttccttctaa ttaccattat tgcccgtcaa gctcagattt aaattggcat
5281 aatgacttaa taggcacagc cttacaagtc aaaatgccca agagtcacaa ggctattcaa
5341 gcagacggtt ggatgtgtca tgcttccaaa tgggtcacta cttgtgattt ccgctggtat
5401 ggaccgaagt atataacaca ttccatccga tccttcactc catctgtaga acaatgcaag
5461 gaaagcattg aacaaacgaa acaaggaact tggctgaatc caggcttccc tcctcaaagt
5521 tgtggatatg caactgtgac ggatgccgaa gcagtgattg tccaggtgac tcctcaccat
5581 gtgctggttg atgaatacac aggagaatgg gttgattcac agttcatcaa cggaaaatgc
5641 agcaattaca tatgccccac tgtccataac tctacaacct ggcattctga ctataaggtc
5701 aaagggctat gtgattctaa cctcatttcc atggacatca ccttcttctc agaggacgga
5761 gagctatcat ccctgggaaa ggagggcaca gggttcagaa gtaactactt tgcttatgaa
5821 ac
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P0136/pEGFP-C3哺乳荧光质粒 |
| P0945/pEGFP-N1-FLAG哺乳荧光质粒 |
| P0443/pEGFP-EcoRV哺乳荧光质粒 |
| P1331/pEGFP-N1-Myc-6×His-FLAG哺乳荧光质粒 |
| P0138/pACGFP1-N1哺乳荧光质粒 |
| P0959/pcDNA3 GFP LIC cloning vector (6D)哺乳荧光质粒 |
| P0916/pCMV-EGFP-HA-C哺乳荧光质粒 |
| P1254/pIRES-hrGFP-1a哺乳荧光质粒 |
| P0796/pIRES2-ZsGreen1哺乳荧光质粒 |
| P0149/pIRES2-EGFP哺乳荧光质粒 |
| P1252/pIRES2-AcGFP1哺乳荧光质粒 |
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文献和实验sunyuzhu10 包装质粒是pMD2.G pMDLg/pRRE pRSV-Rev 过表达载体是pLVX-IRES-ZsGreen1 这样的四个质粒能包装出慢病毒么? 请有经验的战友帮忙看下 暴君 可以的 644414915 pMD2.G是VSVG吗 我现在正在包病毒,别人给了我这四个质粒,别的什么都没说,我不知道该怎么包装装染 谁有具体步骤 转染
immunodeficiency virus) 、 SIV (Simian immunodeficiency virus) 。其中研究最多最为透彻的是HIV。 重组 慢病毒的产生:瞬时转染法,即将包装结构和载体结构瞬时共转染法如293T 高表达细胞系而产生重组慢病毒。此法非常成功,大多实验室采用此法。包膜质粒、包装质粒与载体质粒共转(多用磷酸钙共沉淀法)染293T细胞直接产生生产细胞。最后重组慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。 三质粒来包装产生重组 慢病毒
良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 慢病毒转染优点:1.外源基因表达水平较高、表达稳定;2.转染效率高,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;3.慢病毒基因容易操作,易于制备大量病毒且滴度高;4.病毒基因组可整合到细胞基因组,易于构建稳定细胞株。 慢病毒包装技术:慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。将外源基因克隆进入表达载体,同时与包装质粒(表达病毒包装所需辅助蛋白)一起转染











