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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSET4S
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSET4S自杀敲除质粒
别称: pSET4S
质粒属性
质粒简介
pSET4S是一个链霉菌敲除质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4506 bp ds-DNA circular SYN 06-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4506
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(133..144)
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/note="Factor Xa site"
/translation="IEGR"
CDS 756..1454
/codon_start=1
/note="RepA"
/translation="MAIKNTKARNFGFLLYPDSIPNDWKEKLESLGVSMAVSPLHDMDE
KKDKDTWNNSNIIQNGKHYKKPHYHVIYIARNPVTIESVRNKIKRKLGNSSVAHVEILD
YIKGSYEYLTHESKDAIAKNKHIYDKKDILNINDFDIDRYITLDESQKRELKNLLLDIV
DDYNLVNTKDLMAFIRLRGAEFGILNTNDVKDIVSTNSSAFRLWFEGNYQCGYRASYAK
VLDAETGEIK"
CDS complement(1803..2126)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSLHACRSTLEDPRVPSSNSLAVVLQRRDWENPGVTQLNR
LAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRIWCTLSTICS
DAA"
primer_bind 2036..2052
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
misc_feature 2053..2109
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
primer_bind complement(2122..2138)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 2146..2162
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2170..2200)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 2215..2236
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(2524..3112)
/direction=LEFT
/note="ColE1 ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 3730..4404
/codon_start=1
/note="Spe"
/translation="MFGSGVESGLKPNSDLDFLVVVSEPLTDQSKEILIQKIRPISKKI
GDKSNLRYIELTIIIQQEMVPWNHPPKQEFIYGEWLQELYEQGYIPQKELNSDLTIMLY
QAKRKNKRIYGNYDLEELLPDIPFSDVRRAIMDSSEELIDNYQDDETNSILTLCRMILT
MDTGKIIPKDIAGNAVAESSPLEHRERILLAVRSYLGENIEWTNENVNLTINYLNNRLK
KL"
ORIGIN
1 actagttatc ggcataatcg ttaaaacagg cgttatcgta gcgtaaaagc ccttgagcgt
61 agcgtggctt tgcagcgaag atgttgtctg ttagattatg aaagccgatg actgaatgaa
121 ataataagcg cagcgccctt ctatttcggt tggaggaggc tcaagggagt atgagggaat
181 gaaattccct catgggtttg attttaaaaa ttgcttgcaa ttttgccgag cggtagcgct
241 ggaaaatttt tgaaaaaaat ttggaatttg gaaaaaaatg gggggaaagg aagcgaattt
301 tgcttccgta ctacgacccc ccattaagtg ccgagtgcca atttttgtgc caaaaacgct
361 ctatcccaac tggctcaagg gtttaagggg tttttcaatc gccaacgaat cgccaacgtt
421 ttcgccaacg ttttttataa atctatattt aagtagcttt attgttgttt ttatgattac
481 aaagtgatac actaacttta taaaattatt tgattggagt tttttaaatg gtgatttcag
541 aatcgaaaaa aagagttatg atttctctga caaaagagca agataaaaaa ttaacagata
601 tggcgaaaca aaaaggtttt tcaaaatctg cggttgcggc gttagctata gaagaatatg
661 caagaaagga atcagaacaa aaaaaataag cgaaagctcg cgtttttaga aggatacgag
721 ttttcgctac ttgtttttga taaggtaatt atatcatggc tattaaaaat actaaagcta
781 gaaattttgg atttttatta tatcctgact caattcctaa tgattggaaa gaaaaattag
841 agagtttggg cgtatctatg gctgtcagtc ctttacacga tatggacgaa aaaaaagata
901 aagatacatg gaataatagt aatattatac aaaatggaaa gcactataaa aaaccacact
961 atcacgttat atatattgca cgaaatcctg taacaataga aagcgttagg aacaagatta
1021 agcgaaaatt ggggaatagt tcagttgctc atgttgagat acttgattat atcaaaggtt
1081 catatgaata tttgactcat gaatcaaagg acgctattgc taagaataaa catatatacg
1141 acaaaaaaga tattttgaac attaatgatt ttgatattga ccgctatata acacttgatg
1201 aaagccaaaa aagagaattg aagaatttac ttttagatat agtggatgac tataatttgg
1261 taaatacaaa agatttaatg gcttttattc gccttagggg agcggagttt ggaattttaa
1321 atacgaatga tgtaaaagat attgtttcaa caaactctag cgcctttaga ttatggtttg
1381 agggcaatta tcagtgtgga tatagagcaa gttatgcaaa ggttcttgat gctgaaacgg
1441 gggaaataaa atgacaaaca aagaaaaaga gttatttgct gaaaatgagg aattaaaaaa
1501 agaaattaag gacttaaaag agcgtattga aagatacaga gaaatggaag ttgaattaag
1561 tacaacaata gatttattga gaggagggat tattgaataa ataaaagccc cctgacgaaa
1621 gtcgaagggg gtttttattt tggtttgatg ttgcgattaa tagatctcgg tgatgacggt
1681 gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc
1741 gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg gggctggctt
1801 aactatgcgg catcagagca gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg
1861 cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgccatt cgccattcag gctgcgcaac
1921 tgttgggaag ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac gccagctggc gaaaggggga
1981 tgtgctgcaa ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt cccagtcacg acgttgtaaa
2041 acgacggcca gtgaattcga gctcggtacc cggggatcct ctagagtcga cctgcaggca
2101 tgcaagcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac
2161 aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt
2221 gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc
2281 gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg
2341 ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt
2401 atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa
2461 gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc
2521 gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag
2581 gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt
2641 gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg
2701 aagcgtggcg ctttctcaat gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg
2761 ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg
2821 taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac
2881 tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg
2941 gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt
3001 taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg
3061 tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc
3121 tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt
3181 ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt
3241 taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag
3301 tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt
3361 cgtgtagata actagtgttc gtgaatacat gttataataa ctataactaa taacgtaacg
3421 tgactggcaa gagatatttt taaaacaatg aataggttta cacttacttt agttttatgg
3481 aaatgaaaga tcatatcata tataatctag aataaaatta actaaaataa ttattatcta
3541 gataaaaaat ttagaagcca atgaaatcta taaataaact aaattaagtt tatttaatta
3601 acaactatgg atataaaata ggtactaatc aaaatagtga ggaggatata tttgaataca
3661 tacgaacaaa ttaataaagt gaaaaaaata cttcggaaac atttaaaaaa taaccttatt
3721 ggtacttaca tgtttggatc aggagttgag agtggactaa aaccaaatag tgatcttgac
3781 tttttagtcg tcgtatctga accattgaca gatcaaagta aagaaatact tatacaaaaa
3841 attagaccta tttcaaaaaa aataggagat aaaagcaact tacgatatat tgaattaaca
3901 attattattc agcaagaaat ggtaccgtgg aatcatcctc ccaaacaaga atttatttat
3961 ggagaatggt tacaagagct ttatgaacaa ggatacattc ctcagaagga attaaattca
4021 gatttaacca taatgcttta ccaagcaaaa cgaaaaaata aaagaatata cggaaattat
4081 gacttagagg aattactacc tgatattcca ttttctgatg tgagaagagc cattatggat
4141 tcgtcagagg aattaataga taattatcag gatgatgaaa ccaactctat attaacttta
4201 tgccgtatga ttttaactat ggacacgggt aaaatcatac caaaagatat tgcgggaaat
4261 gcagtggctg aatcttctcc attagaacat agggagagaa ttttgttagc agttcgtagt
4321 tatcttggag agaatattga atggactaat gaaaatgtaa atttaactat aaactattta
4381 aataacagat taaaaaaatt ataaaaaaat tgaaaaaatg gtggaaacac ttttttcaat
4441 ttttttgttt tattatttaa tatttgggaa atattcattc taattggtaa tcagatttta
4501 gaaaac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSET4S自杀敲除质粒
别称: pSET4S
| 复制子: | pBR322 |
|---|---|
| 原核抗性: | Spe(100ug,ml) |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 广宿主 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pSET4S是一个链霉菌敲除质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4506 bp ds-DNA circular SYN 06-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4506
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variants"
protein_bind 2146..2162
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(2170..2200)
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protein_bind 2215..2236
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/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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replication"
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ORIGIN
1 actagttatc ggcataatcg ttaaaacagg cgttatcgta gcgtaaaagc ccttgagcgt
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3721 ggtacttaca tgtttggatc aggagttgag agtggactaa aaccaaatag tgatcttgac
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4381 aataacagat taaaaaaatt ataaaaaaat tgaaaaaatg gtggaaacac ttttttcaat
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2083/pSV40-Ube2ql1-m小鼠基因质粒 |
| P2117/pSV40-Lbhd2-m小鼠基因质粒 |
| P2118/pSV40-Apoe-m小鼠基因质粒 |
| P2119/pSV40-Aldoc-m小鼠基因质粒 |
| P2120/pSV40-Atpase6-m小鼠基因质粒 |
| P2121/pSV40-Rpl27a-m小鼠基因质粒 |
| P2173/pSV40-Gnb2-m小鼠基因质粒 |
| P2174/pSV40-Hars-m小鼠基因质粒 |
| P2175/pSV40-Nolc1-m(有突变)小鼠基因质粒 |
| P2176/pSV40-Dapk3-m(31-1398bp)小鼠基因质粒 |
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文献和实验相关实验
三句话读懂一篇 CNS，剪接体靶向疗法诱导癌细胞「自杀」，皮炎瘙痒突然加重的机制，免疫调节因子 STING 感知疼痛机制...
retroviruses。该工作通过对小鼠胚胎干细胞 CRISPR 筛选以及关键酶敲除验证，发现细胞内源逆转录病毒表达的 RNA 能够发生 m6A 甲基化修饰，进而快速被降解。 该研究创新性地阐释了一种新型细胞抑制内源逆转录病毒元件表达机制，对人类揭开逆转录病毒神秘面纱具有重大意义。 图 5：来源 Nature 6. Nature: 揭示小鼠祖 B 细胞抗体重链的基因位点收缩等机制 2021 年 1 月 13 日，哈佛大学医学院 / 波士顿儿童医院的 Frederick W. Alt 团队在 Nature 杂志
，用于删除操作中所利用的抗性基因，图谱：http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167701208002376 pK18mob 基因敲除质粒 Kan 自杀质粒 pK18mobSacB 基因敲除质粒 Kan
进行标准化，预估扩增靶点的相对表达水平[1,2]。如今，终点 PCR 已基本被实时 PCR 或 qPCR 取代了，因为它们可获得更可靠和更准确的基因表达定量结果。 图 2：起始 cDNA 连续稀释液的 PCR 得率，通过在琼脂糖凝胶上对 PCR 产物染色进行可视化观察。 2.基因分型 PCR 可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如，基因敲除和敲入小鼠等转基因生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼，可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异（图 3）。 图 3.PCR 用于
pSET4S自杀敲除质粒
￥100 - 1000
