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- Xybio
- 上海
- P1507
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
KM71 Strain
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：KM71毕赤酵母菌
别称: KM71 Strain
培养基：YPDA
菌株类别：酵母菌
培养条件：28℃，有氧，YPDA
质粒转化：电激
保存方式：30%甘油，-20℃
基本应用：用于蛋白表达
备注：
质粒简介
KM71是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。KM71毕赤酵母自身表型为MutS，所以KM71转化株只能产生出His+MutS菌株。毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，一般可以设置在30度培养，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。
KM71毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。
KM71毕赤酵母可以在YPD培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。用30%的甘油与培养物混合保藏菌种，质粒转化的方法：电转化。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1846/pGWB4植物表达质粒 |
| P1847/pGWB11植物表达质粒 |
| P1848/pGWB12植物表达质粒 |
| P1849/pGWB17植物表达质粒 |
| P1850/pGWB18植物表达质粒 |
| P2334/pGWB21植物表达质粒 |
| P3142/pGWB406植物表达质粒 |
| P1753/pGWB454植物表达质粒 |
| P1754/pGWB455植物表达质粒 |
| P0290/pGWB504植物表达质粒 |
| P1280/pB7WG2植物表达质粒 |
| P1801/pKGWFS7.1植物表达质粒 |
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文献和实验质粒转化人巴斯德毕赤酵母菌株(如GS1 15，KM71)一将转化物接种HIS4缺陷平板进行第一轮筛选一用不同浓度的G418平板进行第二轮筛选一挑选10~20个克隆进行小规模诱导培养，鉴定外源基因的表达量一挑选高水平表达菌株进行大规模诱导培养以制备外源基因的表达蛋白质。 4、在酵母表达载体中高效表达外源基因的策略 （1）增加整合在酵母染色体上的目的基因剂量 适当增加目的基因整合到酵母染色体上的拷贝数(即基因剂量)是有效提高外源基因表达量的基本策略。Clare等在利用毕赤酵母表达破伤风毒素片段时发现
。 Xiang Yang：EasySelect试剂盒准备了三种菌株：X33，GS115和KM71H。我倾向于选择X33，因为这个菌株转化率和表达量相对而言较高，如果你有电转仪（electroporator），可以尝试一下。如果没有的话，EasySelect也准备了化学转化试剂――EasyComp Transformation，但是由于转化率的缘故，我建议使用电转仪。 leslie：在得到了正确的序列之后就可以准备转化毕赤酵母了，试剂盒携带有的是X-33，GS115和KM71H这三种毕赤酵母（另外常用
了正确的序列之后就可以准备转化毕赤酵母了，试剂盒携带有的是X-33，GS115和KM71H这三种毕赤酵母(另外常用的还有SMD1168)，每种酵母的特点有些不尽相同(Manual上写的很清楚)，其中X-33由于是野生型，因此耐受性比较好，如果担心转化率的话可以考虑这种酵母菌，而GS115与X33一样都是属于MUT+表现型，也就是说可以在含甲醇的培养基中快速生长，但是据说会对外源基因表达有影响，KM71是MUT-型酵母，在甲醇培养基中生长缓慢，但是也有利于翻译后加工，比如形成二硫键，糖
