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- Xybio
- 上海
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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pLVX-IRES-mCherry
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pLVX-IRES-mCherry慢病毒表达质粒
别称: pLVX-IRES-mCherry
质粒属性
质粒简介
pLVX IRES mCherry是HIV-1，慢病毒表达载体，让你在几乎任何哺乳动物细胞类型的兴趣和mCherry蛋白同时表达，包括原代细胞。将是一个突变的荧光蛋白来自四Discosoma sp.红色荧光蛋白，红色荧光蛋白。向量表示的两种蛋白质从细 胞mRNA的转录，从而能够作为转导效率的指标，用流式细胞仪选择标记。
pLVX IRES mCherry包含所有用于生产的必要的复制能力的慢病毒病毒处理的元素，以及元素来提高病毒滴度，外源基因的表达水平，和整体的向量函数。土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件（WPRE）促进RNA处理事件和增强病毒RNA核出口，导致增加病毒滴度包装细胞。此外，载体包括Rev应答元件（RRE），从而进一步增加病毒滴度提高拼接的病毒RNA转运出细胞核。最后，pLVX IRES mCherry还包含一个中央聚嘌呤道/中央终止序列（CPPT / CTS）。在靶细胞感染过程中，该元素创建一个中央的DNA瓣，增加了病毒基因组的核导入，从而在改进的矢量集成和更有效的转导。载体还包含一个复制市局起源和大肠杆菌氨苄青霉素抗性基因（Ampr）在细菌繁殖和选择
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8172 bp ds-DNA circular SYN 07-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pLVX-IRES-mCherry
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8172)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, September 7, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
COMMENT Created by Clontech Laboratories Inc. http://www.clontech.com
Cat. No. 631237
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8172
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..635
/note="5' LTR"
misc_feature 636..653
/note="PBS"
misc_feature 685..822
/note="Packaging Signal"
misc_binding 1303..1536
/note="RRE"
misc_feature 2028..2151
/note="cPPT/CTS (DNA flap)"
promoter 2185..2787
/note="CMV IE Promoter"
misc_feature 2803..2840
/note="MCS"
misc_feature 2842..3416
/note="IRES"
CDS 3417..4127
/codon_start=1
/note="mCherry"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
misc_feature 4141..4732
/note="WPRE"
LTR 4935..5571
/note="3' LTR"
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/direction=LEFT
/note="pUC ori"
CDS complement(6858..7854)
/codon_start=1
/note="Amp(R)"
/translation="DVRWHFSGKCARNPYLFIFLNTFKYVSAHETITLINASIILKKEE
YEYSTFPCRPYSLFCGILPSCFCSPRNAGESKRC*RSVGCTSGLHRTGSQQR*DP*EFS
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RIMQCCHNHE**HCGQLTSDNDRRTEGANRFFAQHGGSCNSP*SLGTGAE*SHTKRRA*
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*AWVSRYHCSTGARW*ALPYRSYLHDGESGNYG*TK*TDR*DRCLTD*ALV"
ORIGIN
1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tctatttccg gtgaattcct cgagactagt
2821 tctagagcgg ccgcggatcc cgcccctctc cctccccccc ccctaacgtt actggccgaa
2881 gccgcttgga ataaggccgg tgtgcgtttg tctatatgtt attttccacc atattgccgt
2941 cttttggcaa tgtgagggcc cggaaacctg gccctgtctt cttgacgagc attcctaggg
3001 gtctttcccc tctcgccaaa ggaatgcaag gtctgttgaa tgtcgtgaag gaagcagttc
3061 ctctggaagc ttcttgaaga caaacaacgt ctgtagcgac cctttgcagg cagcggaacc
3121 ccccacctgg cgacaggtgc ctctgcggcc aaaagccacg tgtataagat acacctgcaa
3181 aggcggcaca accccagtgc cacgttgtga gttggatagt tgtggaaaga gtcaaatggc
3241 tcacctcaag cgtattcaac aaggggctga aggatgccca gaaggtaccc cattgtatgg
3301 gatctgatct ggggcctcgg tgcacatgct ttacatgtgt ttagtcgagg ttaaaaaacg
3361 tctaggcccc ccgaaccacg gggacgtggt tttcctttga aaaacacgat gataatatgg
3421 tgagcaaggg cgaggaggat aacatggcca tcatcaagga gttcatgcgc ttcaaggtgc
3481 acatggaggg ctccgtgaac ggccacgagt tcgagatcga gggcgagggc gagggccgcc
3541 cctacgaggg cacccagacc gccaagctga aggtgaccaa gggtggcccc ctgcccttcg
3601 cctgggacat cctgtcccct cagttcatgt acggctccaa ggcctacgtg aagcaccccg
3661 ccgacatccc cgactacttg aagctgtcct tccccgaggg cttcaagtgg gagcgcgtga
3721 tgaacttcga ggacggcggc gtggtgaccg tgacccagga ctcctccctg caggacggcg
3781 agttcatcta caaggtgaag ctgcgcggca ccaacttccc ctccgacggc cccgtaatgc
3841 agaagaagac catgggctgg gaggcctcct ccgagcggat gtaccccgag gacggcgccc
3901 tgaagggcga gatcaagcag aggctgaagc tgaaggacgg cggccactac gacgctgagg
3961 tcaagaccac ctacaaggcc aagaagcccg tgcagctgcc cggcgcctac aacgtcaaca
4021 tcaagttgga catcacctcc cacaacgagg actacaccat cgtggaacag tacgaacgcg
4081 ccgagggccg ccactccacc ggcggcatgg acgagctgta caagtgaacg cgtctggaac
4141 aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct
4201 ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt
4261 atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg
4321 tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact
4381 ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct
4441 attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg
4501 ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga cgtcctttcc atggctgctc
4561 gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc
4621 aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt
4681 cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tggaattaat
4741 tctgcagtcg agacctagaa aaacatggag caatcacaag tagcaataca gcagctacca
4801 atgctgattg tgcctggcta gaagcacaag aggaggagga ggtgggtttt ccagtcacac
4861 ctcaggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa
4921 aagaaaagag gggactggaa gggctaattc actcccaacg aagacaagat atccttgatc
4981 tgtggatcta ccacacacaa ggctacttcc ctgattagca gaactacaca ccagggccag
5041 gggtcagata tccactgacc tttggatggt gctacaagct agtaccagtt gagccagata
5101 aggtagaaga ggccaataaa ggagagaaca ccagcttgtt acaccctgtg agcctgcatg
5161 ggatggatga cccggagaga gaagtgttag agtggaggtt tgacagccgc ctagcatttc
5221 atcacgtggc ccgagagctg catccggagt acttcaagaa ctgctgatat cgagcttgct
5281 acaagggact ttccgctggg gactttccag ggaggcgtgg cctgggcggg actggggagt
5341 ggcgagccct cagatcctgc atataagcag ctgctttttg cctgtactgg gtctctctgg
5401 ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct
5461 caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt
5521 aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag tagtagttca
5581 tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat gaatatcaga gagtgagagg
5641 ccttgacatt gctagcgttt accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca
5701 tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga
5761 agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg
5821 cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc
5881 caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac
5941 tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata
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6061 aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct
6121 gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa
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6901 ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag
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7081 ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca
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7201 tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc
7261 atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg
7321 gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca
7381 tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt
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8101 ctgtgattcc tctgaattat tttcatttta aagaaattgt atttgttaaa tatgtactac
8161 aaacttagta gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pLVX-IRES-mCherry慢病毒表达质粒
别称: pLVX-IRES-mCherry
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒克隆载体 |
| 质粒大小: | 8172bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | 红色 |
质粒简介
pLVX IRES mCherry是HIV-1，慢病毒表达载体，让你在几乎任何哺乳动物细胞类型的兴趣和mCherry蛋白同时表达，包括原代细胞。将是一个突变的荧光蛋白来自四Discosoma sp.红色荧光蛋白，红色荧光蛋白。向量表示的两种蛋白质从细 胞mRNA的转录，从而能够作为转导效率的指标，用流式细胞仪选择标记。
pLVX IRES mCherry包含所有用于生产的必要的复制能力的慢病毒病毒处理的元素，以及元素来提高病毒滴度，外源基因的表达水平，和整体的向量函数。土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件（WPRE）促进RNA处理事件和增强病毒RNA核出口，导致增加病毒滴度包装细胞。此外，载体包括Rev应答元件（RRE），从而进一步增加病毒滴度提高拼接的病毒RNA转运出细胞核。最后，pLVX IRES mCherry还包含一个中央聚嘌呤道/中央终止序列（CPPT / CTS）。在靶细胞感染过程中，该元素创建一个中央的DNA瓣，增加了病毒基因组的核导入，从而在改进的矢量集成和更有效的转导。载体还包含一个复制市局起源和大肠杆菌氨苄青霉素抗性基因（Ampr）在细菌繁殖和选择
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8172 bp ds-DNA circular SYN 07-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pLVX-IRES-mCherry
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8172)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Wednesday, September 7, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
COMMENT Created by Clontech Laboratories Inc. http://www.clontech.com
Cat. No. 631237
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8172
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..635
/note="5' LTR"
misc_feature 636..653
/note="PBS"
misc_feature 685..822
/note="Packaging Signal"
misc_binding 1303..1536
/note="RRE"
misc_feature 2028..2151
/note="cPPT/CTS (DNA flap)"
promoter 2185..2787
/note="CMV IE Promoter"
misc_feature 2803..2840
/note="MCS"
misc_feature 2842..3416
/note="IRES"
CDS 3417..4127
/codon_start=1
/note="mCherry"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
misc_feature 4141..4732
/note="WPRE"
LTR 4935..5571
/note="3' LTR"
rep_origin complement(6040..6713)
/direction=LEFT
/note="pUC ori"
CDS complement(6858..7854)
/codon_start=1
/note="Amp(R)"
/translation="DVRWHFSGKCARNPYLFIFLNTFKYVSAHETITLINASIILKKEE
YEYSTFPCRPYSLFCGILPSCFCSPRNAGESKRC*RSVGCTSGLHRTGSQQR*DP*EFS
PRRTFSNDEHF*SSAMWRGIIPY*RRARATRSPHTLFSE*LG*VLTSHRKASYGWHDSK
RIMQCCHNHE**HCGQLTSDNDRRTEGANRFFAQHGGSCNSP*SLGTGAE*SHTKRRA*
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*AWVSRYHCSTGARW*ALPYRSYLHDGESGNYG*TK*TDR*DRCLTD*ALV"
ORIGIN
1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tctatttccg gtgaattcct cgagactagt
2821 tctagagcgg ccgcggatcc cgcccctctc cctccccccc ccctaacgtt actggccgaa
2881 gccgcttgga ataaggccgg tgtgcgtttg tctatatgtt attttccacc atattgccgt
2941 cttttggcaa tgtgagggcc cggaaacctg gccctgtctt cttgacgagc attcctaggg
3001 gtctttcccc tctcgccaaa ggaatgcaag gtctgttgaa tgtcgtgaag gaagcagttc
3061 ctctggaagc ttcttgaaga caaacaacgt ctgtagcgac cctttgcagg cagcggaacc
3121 ccccacctgg cgacaggtgc ctctgcggcc aaaagccacg tgtataagat acacctgcaa
3181 aggcggcaca accccagtgc cacgttgtga gttggatagt tgtggaaaga gtcaaatggc
3241 tcacctcaag cgtattcaac aaggggctga aggatgccca gaaggtaccc cattgtatgg
3301 gatctgatct ggggcctcgg tgcacatgct ttacatgtgt ttagtcgagg ttaaaaaacg
3361 tctaggcccc ccgaaccacg gggacgtggt tttcctttga aaaacacgat gataatatgg
3421 tgagcaaggg cgaggaggat aacatggcca tcatcaagga gttcatgcgc ttcaaggtgc
3481 acatggaggg ctccgtgaac ggccacgagt tcgagatcga gggcgagggc gagggccgcc
3541 cctacgaggg cacccagacc gccaagctga aggtgaccaa gggtggcccc ctgcccttcg
3601 cctgggacat cctgtcccct cagttcatgt acggctccaa ggcctacgtg aagcaccccg
3661 ccgacatccc cgactacttg aagctgtcct tccccgaggg cttcaagtgg gagcgcgtga
3721 tgaacttcga ggacggcggc gtggtgaccg tgacccagga ctcctccctg caggacggcg
3781 agttcatcta caaggtgaag ctgcgcggca ccaacttccc ctccgacggc cccgtaatgc
3841 agaagaagac catgggctgg gaggcctcct ccgagcggat gtaccccgag gacggcgccc
3901 tgaagggcga gatcaagcag aggctgaagc tgaaggacgg cggccactac gacgctgagg
3961 tcaagaccac ctacaaggcc aagaagcccg tgcagctgcc cggcgcctac aacgtcaaca
4021 tcaagttgga catcacctcc cacaacgagg actacaccat cgtggaacag tacgaacgcg
4081 ccgagggccg ccactccacc ggcggcatgg acgagctgta caagtgaacg cgtctggaac
4141 aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct
4201 ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt
4261 atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg
4321 tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact
4381 ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct
4441 attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg
4501 ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga cgtcctttcc atggctgctc
4561 gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc
4621 aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt
4681 cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tggaattaat
4741 tctgcagtcg agacctagaa aaacatggag caatcacaag tagcaataca gcagctacca
4801 atgctgattg tgcctggcta gaagcacaag aggaggagga ggtgggtttt ccagtcacac
4861 ctcaggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa
4921 aagaaaagag gggactggaa gggctaattc actcccaacg aagacaagat atccttgatc
4981 tgtggatcta ccacacacaa ggctacttcc ctgattagca gaactacaca ccagggccag
5041 gggtcagata tccactgacc tttggatggt gctacaagct agtaccagtt gagccagata
5101 aggtagaaga ggccaataaa ggagagaaca ccagcttgtt acaccctgtg agcctgcatg
5161 ggatggatga cccggagaga gaagtgttag agtggaggtt tgacagccgc ctagcatttc
5221 atcacgtggc ccgagagctg catccggagt acttcaagaa ctgctgatat cgagcttgct
5281 acaagggact ttccgctggg gactttccag ggaggcgtgg cctgggcggg actggggagt
5341 ggcgagccct cagatcctgc atataagcag ctgctttttg cctgtactgg gtctctctgg
5401 ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct
5461 caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt
5521 aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag tagtagttca
5581 tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat gaatatcaga gagtgagagg
5641 ccttgacatt gctagcgttt accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca
5701 tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga
5761 agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg
5821 cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc
5881 caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac
5941 tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata
6001 cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa
6061 aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct
6121 gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa
6181 agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg
6241 cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca
6301 cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa
6361 ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg
6421 gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg
6481 tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga
6541 acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc
6601 tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag
6661 attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac
6721 gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc
6781 ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag
6841 taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt
6901 ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag
6961 ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca
7021 gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact
7081 ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca
7141 gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg
7201 tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc
7261 atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg
7321 gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca
7381 tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt
7441 atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc
7501 agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc
7561 ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca
7621 tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa
7681 aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat
7741 tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa
7801 aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtcgacgga
7861 tcgggagatc aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac
7921 aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat
7981 caatgtatct tatcatgtct ggatcaactg gataactcaa gctaaccaaa atcatcccaa
8041 acttcccacc ccatacccta ttaccactgc caattacctg tggtttcatt tactctaaac
8101 ctgtgattcc tctgaattat tttcatttta aagaaattgt atttgttaaa tatgtactac
8161 aaacttagta gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4890/pCMV-SPORT6-FKBP10人源基因质粒 |
| P4891/pCMV-SPORT6-NCAPG2人源基因质粒 |
| P3943/pCMV-SPORT6-MFAP2人源基因质粒 |
| P3944/pCMV-SPORT6-MLST8人源基因质粒 |
| P3945/pCMV-SPORT6-CCNK人源基因质粒 |
| P3946/pCMV-SPORT6-PEPD人源基因质粒 |
| P3947/pCMV-SPORT6-VIPAS39人源基因质粒 |
| P3948/pCMV-SPORT6-GALM人源基因质粒 |
| P3949/pCMV-SPORT6-CD73人源基因质粒 |
| P3950/pCMV-SPORT6-CASP7-T12G人源基因质粒 |
| P3951/pCMV-SPORT6-PDK3人源基因质粒 |
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