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- 上海
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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#51132;pUC57-sgRNA expression
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pUC57-sgRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#51132;pUC57-sgRNA expression
质粒属性
质粒简介
pUC57-sgRNA质粒是一个用于体外转录sgRNA的载体，gRNA片段可通过BsaI酶切连入，并在T7启动子的驱动下转录出来。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 2792 bp ds-DNA circular SYN 26-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 2792)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..2792
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 442..460
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_RNA 482..557
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1018..1606)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1777..2592)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
promoter complement(2593..2697)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgagctcggt acctcgcgaa
421 tgcatctaga tatcggatcc ctaatacgac tcactatagg tgagaccgag agagggtctc
481 agttttagag ctagaaatag caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag
541 tggcaccgag tcggtgcttt ttttaaaggg cccgtcgact gcagaggcct gcatgcaagc
601 ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca
661 cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg agtgagctaa
721 ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct gtcgtgccag
781 ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg gcgcggccgc
841 cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc
901 tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat
961 gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt
1021 ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg
1081 aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc
1141 tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt
1201 ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa
1261 gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta
1321 tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa
1381 caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa
1441 ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt
1501 cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt
1561 ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat
1621 cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat
1681 gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc
1741 aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttag aaaaactcat cgagcatcaa
1801 atgaaactgc aatttattca tatcaggatt atcaatacca tatttttgaa aaagccgttt
1861 ctgtaatgaa ggagaaaact caccgaggca gttccatagg atggcaagat cctggtatcg
1921 gtctgcgatt ccgactcgtc caacatcaat acaacctatt aatttcccct cgtcaaaaat
1981 aaggttatca agtgagaaat caccatgagt gacgactgaa tccggtgaga atggcaaaag
2041 tttatgcatt tctttccaga cttgttcaac aggccagcca ttacgctcgt catcaaaatc
2101 actcgcatca accaaaccgt tattcattcg tgattgcgcc tgagcgagac gaaatacgcg
2161 atcgctgtta aaaggacaat tacaaacagg aatcgaatgc aaccggcgca ggaacactgc
2221 cagcgcatca acaatatttt cacctgaatc aggatattct tctaatacct ggaatgctgt
2281 tttcccaggg atcgcagtgg tgagtaacca tgcatcatca ggagtacgga taaaatgctt
2341 gatggtcgga agaggcataa attccgtcag ccagtttagt ctgaccatct catctgtaac
2401 atcattggca acgctacctt tgccatgttt cagaaacaac tctggcgcat cgggcttccc
2461 atacaatcga tagattgtcg cacctgattg cccgacatta tcgcgagccc atttataccc
2521 atataaatca gcatccatgt tggaatttaa tcgcggccta gagcaagacg tttcccgttg
2581 aatatggctc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct
2641 catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac
2701 atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta
2761 taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pUC57-sgRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#51132;pUC57-sgRNA expression
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒大小: | 2792bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | CRISPR,sgRNA |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pUC57-sgRNA质粒是一个用于体外转录sgRNA的载体，gRNA片段可通过BsaI酶切连入，并在T7启动子的驱动下转录出来。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 2792 bp ds-DNA circular SYN 26-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 2792)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..2792
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 442..460
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_RNA 482..557
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1018..1606)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1777..2592)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase"
/label=KanR
/note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418
(Geneticin(R)) in eukaryotes"
/translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
KPDAPELFLKHGKGSVANDVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
promoter complement(2593..2697)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
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301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
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421 tgcatctaga tatcggatcc ctaatacgac tcactatagg tgagaccgag agagggtctc
481 agttttagag ctagaaatag caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag
541 tggcaccgag tcggtgcttt ttttaaaggg cccgtcgact gcagaggcct gcatgcaagc
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1201 ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa
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1621 cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat
1681 gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc
1741 aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttag aaaaactcat cgagcatcaa
1801 atgaaactgc aatttattca tatcaggatt atcaatacca tatttttgaa aaagccgttt
1861 ctgtaatgaa ggagaaaact caccgaggca gttccatagg atggcaagat cctggtatcg
1921 gtctgcgatt ccgactcgtc caacatcaat acaacctatt aatttcccct cgtcaaaaat
1981 aaggttatca agtgagaaat caccatgagt gacgactgaa tccggtgaga atggcaaaag
2041 tttatgcatt tctttccaga cttgttcaac aggccagcca ttacgctcgt catcaaaatc
2101 actcgcatca accaaaccgt tattcattcg tgattgcgcc tgagcgagac gaaatacgcg
2161 atcgctgtta aaaggacaat tacaaacagg aatcgaatgc aaccggcgca ggaacactgc
2221 cagcgcatca acaatatttt cacctgaatc aggatattct tctaatacct ggaatgctgt
2281 tttcccaggg atcgcagtgg tgagtaacca tgcatcatca ggagtacgga taaaatgctt
2341 gatggtcgga agaggcataa attccgtcag ccagtttagt ctgaccatct catctgtaac
2401 atcattggca acgctacctt tgccatgttt cagaaacaac tctggcgcat cgggcttccc
2461 atacaatcga tagattgtcg cacctgattg cccgacatta tcgcgagccc atttataccc
2521 atataaatca gcatccatgt tggaatttaa tcgcggccta gagcaagacg tttcccgttg
2581 aatatggctc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct
2641 catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac
2701 atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta
2761 taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1588/mKO2-SLBP(18-126)人源基因质粒 |
| P1590/pEGFP-HRH1人源基因质粒 |
| P1601/pEGFP-HRH3人源基因质粒 |
| P1602/1136- Desmoplakin-GFP人源基因质粒 |
| P1664/pcDNA3-TLR9-YFP人源基因质粒 |
| P1665/FLAG.PKCepsilon人源基因质粒 |
| P1666/pBABE-neo-hTERT人源基因逆病毒质粒 |
| P1667/DsRed-rab7 WT人源基因质粒 |
| P1687/pECMV-3×FLAG-FBXW7人源基因质粒 |
| P1759/pECMV-3×FLAG-SCNN1A人源基因质粒 |
| P1831/pECMV-3×FLAG-CCL2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
的表达质粒。A）PCR 扩增的方法U6：来源于人 U6 小核启动子，常用小 RNA 表达，转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面，利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9（Cas9 表达质粒）中，一起共转。B）sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列（2000 bp）找到的序列如下：将上面复制的序列粘贴到 blast 中
CRISPR/Cas9 系统作为细菌和古细菌的获得性免疫系统， 通过 RNA 介导特异性的切割外源遗传物质， 用以对抗入侵的病毒和质粒。利用 Cas9 来摧毁入侵 DNA 的 Type Ⅱ CRISPR/Cas 系统， 可以在体外进行基因的编辑。为了提高CRISPR/Cas9 的特异性，使用 Cas9 切口酶和一对 sgRNA，两个相近的切口造成 DNA 双链断裂， 诱导细胞发生非同源末端连接修复， 造成目的基因的突变。利用 CRISPR/Cas9 进行基因的编辑，首先要构建有效的 sgRNA
pUC57-sgRNA哺乳编辑质粒
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