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- Xybio
- 上海
- P1633
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pacAd5-miR-GFP-Puro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pacAd5-miR-GFP-puro腺病毒miRNA质粒
别称: pacAd5-miR-GFP-Puro
| 原核抗性: | Amp |
|---|---|
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,腺病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pacAd5-miR-GFP-puro是一个腺病毒miRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2091/pENTR223-CLDN12人源基因质粒 |
| P2092/pENTR223-C1QC人源基因质粒 |
| P2093/pENTR223-FAM108A1人源基因质粒 |
| P2094/pENTR223-ZNF174人源基因质粒 |
| P2095/pENTR223-EXOC7人源基因质粒 |
| P2096/pENTR223-UBE2U人源基因质粒 |
| P2097/pENTR223-SCAMP4-G7A人源基因质粒 |
| P2098/pENTR223-UBTD1人源基因质粒 |
| P2099/pENTR223-ING5人源基因质粒 |
| P2100/pENTR223-CHMP4B人源基因质粒 |
| P2101/pENTR223-RNF125-A694G人源基因质粒 |
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文献和实验RNA前体，具有表达GFP标签可以方便地进行表达追踪和可以同时表达多个miRNA的优点。在转染 效率大于80%的前提下，英茂盛业对单个基因设计3条RNA干扰序列，可以保证至少1条可以达到干扰效率70%以上。 2)pRI-H1 shRNA干扰载体——H1启动子启动的shRNA干扰载体系列。包括带或者不带GFP荧光标签、Neomycin或Hygromycin抗性基因以及可诱导的TetOn载体可供选择。 2、RNAi转染优化 ——包括siRNA导入优化和质粒 转染
的mir155 flank，制备的microRNA功能不及天然原始microRNA，故也逐渐较少使用。 3.原始天然pri-miRNA克隆自天然文库的microRNA由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是近来被首选方法。 4.pre-miRNA或pri-miRNA腺病毒：可以转染大多数绝细胞，产品质量可靠。缺点是腺病毒有一定的毒性，以往实验腺病毒毒性并未引起重视，但我们发现在microRNA实验中显得比较突出。另外，制备周期长，费用高也是不容
有弊。制备某个家族缺陷的转基因小鼠变得相当容易。但如果你想要了解某个miRNA的特定功能，那就得将与之接近的miRNA全部去除。 miRNA海绵的应用潜力无穷。它可用于靶点预测的验证，也能分析miRNA的功能丧失表型。由于miRNA海绵是由表达质粒编码的，那么它也很容易推广到其它形式，譬如慢病毒、腺病毒或转基因，适合各种不同的细胞类型。Sharp还在研究中证实，在UTR上多加几个miRNA结合位点，能增加反义序列的量，从而提高海绵的效力。从原理上来说，miRNA海绵的CMV启动子也可以换成其它组织
