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- 上海
- P0173
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pTet-On-Advanced
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pTet-On-Advanced哺乳调控质粒
别称: pTet-On-Advanced
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7139 bp ds-DNA circular SYN 28-1-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTet-On-Advanced
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7139)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-1-28 from SnapGene 2.0.1
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7139
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 89..468
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 469..672
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 775..1521
/codon_start=1
/product="improved tetracycline-controlled transactivator"
/note="rtTA-Advanced"
/note="In the Tet-On(R) system, rtTA-Advanced binds to the
Tet-responsive element and stimulates transcription only in
the presence of tetracycline or doxycycline."
/translation="MSRLDKSKVINGALELLNGVGIEGLTTRKLAQKLGVEQPTLYWHV
KNKRALLDALPIEMLDRHHTHFCPLEGESWQDFLRNNAKSFRCALLSHRDGAKVHLGTR
PTEKQYETLENQLAFLCQQGFSLENALYALSAVGHFTLGCVLEEQEHQVAKEERETPTT
DSMPPLLRQAIELFDRQGAEPAFLFGLELIICGLEKQLKCESGGPADALDDFDLDMLPA
DALDDFDLDMLPADALDDFDLDMLPG"
polyA_signal 1531..1665
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2385..2973)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3144..4004)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4005..4109)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
polyA_signal 4222..4356
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS complement(4781..4801)
/codon_start=1
/locus_tag="
"
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/note="SV40 NLS"
/note="
"
/protein_id="
"
/translation="PKKKRKV"
intron 4931..4996
/note="small t intron"
/note="simian virus 40 (SV40) small t antigen intron"
CDS complement(5416..6210)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(6571..6900)
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 6585..6720
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
ORIGIN
1 ctcgaggagc ttggcccatt gcatacgttg tatccatatc ataatatgta catttatatt
61 ggctcatgtc caacattacc gccatgttga cattgattat tgactagtta ttaatagtaa
121 tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt tccgcgttac ataacttacg
181 gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc cattgacgtc aataatgacg
241 tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac gtcaatgggt ggagtattta
301 cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata tgccaagtac gccccctatt
361 gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc agtacatgac cttatgggac
421 tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt
481 tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac
541 cccattgacg tcaatgggag tttgttttgg caccaaaatc aacgggactt tccaaaatgt
601 cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg ggaggtctat
661 ataagcagag ctcgtttagt gaaccgtcag atcgcctgga gacgccatcc acgctgtttt
721 gacctccata gaagacaccg ggaccgatcc agcctccgcg gccccgaatt caccatgtct
781 agactggaca agagcaaagt cataaacggc gctctggaat tactcaatgg agtcggtatc
841 gaaggcctga cgacaaggaa actcgctcaa aagctgggag ttgagcagcc taccctgtac
901 tggcacgtga agaacaagcg ggccctgctc gatgccctgc caatcgagat gctggacagg
961 catcataccc acttctgccc cctggaaggc gagtcatggc aagactttct gcggaacaac
1021 gccaagtcat tccgctgtgc tctcctctca catcgcgacg gggctaaagt gcatctcggc
1081 acccgcccaa cagagaaaca gtacgaaacc ctggaaaatc agctcgcgtt cctgtgtcag
1141 caaggcttct ccctggagaa cgcactgtac gctctgtccg ccgtgggcca ctttacactg
1201 ggctgcgtat tggaggaaca ggagcatcaa gtagcaaaag aggaaagaga gacacctacc
1261 accgattcta tgcccccact tctgagacaa gcaattgagc tgttcgaccg gcagggagcc
1321 gaacctgcct tccttttcgg cctggaacta atcatatgtg gcctggagaa acagctaaag
1381 tgcgaaagcg gcgggccggc cgacgccctt gacgattttg acttagacat gctcccagcc
1441 gatgcccttg acgactttga ccttgatatg ctgcctgctg acgctcttga cgattttgac
1501 cttgacatgc tccccgggta actaagtaag gatccagaca tgataagata cattgatgag
1561 tttggacaaa ccacaactag aatgcagtga aaaaaatgct ttatttgtga aatttgtgat
1621 gctattgctt tatttgtaac cattataagc tgcaataaac aagttaacaa caacaattgc
1681 attcatttta tgtttcaggt tcagggggag gtgtgggagg ttttttaaag caagtaaaac
1741 ctctacaaat gtggtatggc tgattatgat cctgcaagcc tcgtcgtcct ggccggacca
1801 cgctatctgt gcaaggtccc cggccccgga cgcgcgctcc atgagcagag cgcccgccgc
1861 cgaggcgaag actcgggcgg cgccctgccc gtcccaccag gtcaacaggc ggtaaccggc
1921 ctcttcatcg ggaatgcgcg cgaccttcag catcgccggc atgtccccct ggcggacggg
1981 aagtatccag ctcgaccaag cttggcgaga ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag
2041 aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt
2101 gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga ccgttcagct gcattaatga
2161 atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc
2221 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
2281 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
2341 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
2401 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
2461 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
2521 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
2581 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
2641 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
2701 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
2761 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
2821 agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
2881 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
2941 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
3001 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
3061 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
3121 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
3181 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
3241 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
3301 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
3361 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
3421 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
3481 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
3541 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
3601 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
3661 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
3721 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca
3781 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
3841 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
3901 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
3961 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
4021 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
4081 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
4141 taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt
4201 cgtcttcact cgaggtcgag ggatccagac atgataagat acattgatga gtttggacaa
4261 accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct
4321 ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt
4381 atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa gcaagtaaaa cctctacaaa
4441 tgtggtatgg ctgattatga tctctagtca aggcactata catcaaatat tccttattaa
4501 cccctttaca aattaaaaag ctaaaggtac acaatttttg agcatagtta ttaatagcag
4561 acactctatg cctgtgtgga gtaagaaaaa acagtatgtt atgattataa ctgttatgcc
4621 tacttataaa ggttacagaa tatttttcca taattttctt gtatagcagt gcagcttttt
4681 cctttgtggt gtaaatagca aagcaagcaa gagttctatt actaaacaca gcatgactca
4741 aaaaacttag caattctgaa ggaaagtcct tggggtcttc tacctttctc ttcttttttg
4801 gaggagtaga atgttgagag tcagcagtag cctcatcatc actagatggc atttcttctg
4861 agcaaaacag gttttcctca ttaaaggcat tccaccactg ctcccattca tcagttccat
4921 aggttggaat ctaaaataca caaacaatta gaatcagtag tttaacacat tatacactta
4981 aaaattttat atttacctta gagctttaaa tctctgtagg tagtttgtcc aattatgtca
5041 caccacagaa gtaaggttcc ttcacaaaga tccggaccaa agcggccatc gtgcctcccc
5101 actcctgcag ttcgggggca tggatgcgcg gatagccgct gctggtttcc tggatgccga
5161 cggatttgca ctgccggtag aactccgcga ggtcgtccag cctcaggcag cagctgaacc
5221 aactcgcgag gggatcgagc ccggggtggg cgaagaactc cagcatgaga tccccgcgct
5281 ggaggatcat ccagccggcg tcccggaaaa cgattccgaa gcccaacctt tcatagaagg
5341 cggcggtgga atcgaaatct cgtgatggca ggttgggcgt cgcttggtcg gtcatttcga
5401 accccagagt cccgctcaga agaactcgtc aagaaggcga tagaaggcga tgcgctgcga
5461 atcgggagcg gcgataccgt aaagcacgag gaagcggtca gcccattcgc cgccaagctc
5521 ttcagcaata tcacgggtag ccaacgctat gtcctgatag cggtccgcca cacccagccg
5581 gccacagtcg atgaatccag aaaagcggcc attttccacc atgatattcg gcaagcaggc
5641 atcgccatgg gtcacgacga gatcctcgcc gtcgggcatg cgcgccttga gcctggcgaa
5701 cagttcggct ggcgcgagcc cctgatgctc ttcgtccaga tcatcctgat cgacaagacc
5761 ggcttccatc cgagtacgtg ctcgctcgat gcgatgtttc gcttggtggt cgaatgggca
5821 ggtagccgga tcaagcgtat gcagccgccg cattgcatca gccatgatgg atactttctc
5881 ggcaggagca aggtgagatg acaggagatc ctgccccggc acttcgccca atagcagcca
5941 gtcccttccc gcttcagtga caacgtcgag cacagctgcg caaggaacgc ccgtcgtggc
6001 cagccacgat agccgcgctg cctcgtcctg cagttcattc agggcaccgg acaggtcggt
6061 cttgacaaaa agaaccgggc gcccctgcgc tgacagccgg aacacggcgg catcagagca
6121 gccgattgtc tgttgtgccc agtcatagcc gaatagcctc tccacccaag cggccggaga
6181 acctgcgtgc aatccatctt gttcaatcat gcgaaacgat cctcatcctg tctcttgatc
6241 agatcttgat cccctgcgcc atcagatcct tggcggcaag aaagccatcc agtttacttt
6301 gcagggcttc ccaaccttac cagagggcgc cccagctggc aattccggtt cgcttgctgt
6361 ccataaaacc gcccagtcta gctatcgcca tgtaagccca ctgcaagcta cctgctttct
6421 ctttgcgctt gcgttttccc ttgtccagat agcccagtag ctgacattca tccggggtca
6481 gcaccgtttc tgcggactgg ctttctacgt gttccgcttc ctttagcagc ccttgcgccc
6541 tgagtgcttg cggcagcgtg aagctagctt tttgcaaaag cctaggcctc caaaaaagcc
6601 tcctcactac ttctggaata gctcagaggc cgaggcggcc tcggcctctg cataaataaa
6661 aaaaattagt cagccatggg gcggagaatg ggcggaactg ggcggagtta ggggcgggat
6721 gggcggagtt aggggcggga ctatggttgc tgactaattg agatgcatgc tttgcatact
6781 tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acacctggtt gctgactaat tgagatgcat
6841 gctttgcata cttctgcctg ctggggagcc tggggacttt ccacacccta actgacacac
6901 attccacagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
6961 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
7021 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag
7081 cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcacct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pTet-On-Advanced哺乳调控质粒
别称: pTet-On-Advanced
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal，beta-globin polyA signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，四环素调控系统载体 |
| 质粒大小: | 7139bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 四环素诱导 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7139 bp ds-DNA circular SYN 28-1-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTet-On-Advanced
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7139)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-1-28 from SnapGene 2.0.1
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7139
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 89..468
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 469..672
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 775..1521
/codon_start=1
/product="improved tetracycline-controlled transactivator"
/note="rtTA-Advanced"
/note="In the Tet-On(R) system, rtTA-Advanced binds to the
Tet-responsive element and stimulates transcription only in
the presence of tetracycline or doxycycline."
/translation="MSRLDKSKVINGALELLNGVGIEGLTTRKLAQKLGVEQPTLYWHV
KNKRALLDALPIEMLDRHHTHFCPLEGESWQDFLRNNAKSFRCALLSHRDGAKVHLGTR
PTEKQYETLENQLAFLCQQGFSLENALYALSAVGHFTLGCVLEEQEHQVAKEERETPTT
DSMPPLLRQAIELFDRQGAEPAFLFGLELIICGLEKQLKCESGGPADALDDFDLDMLPA
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replication"
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LIKHW"
promoter complement(4005..4109)
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"
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(Geneticin(R))"
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ORIGIN
1 ctcgaggagc ttggcccatt gcatacgttg tatccatatc ataatatgta catttatatt
61 ggctcatgtc caacattacc gccatgttga cattgattat tgactagtta ttaatagtaa
121 tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt tccgcgttac ataacttacg
181 gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc cattgacgtc aataatgacg
241 tatgttccca tagtaacgcc aatagggact ttccattgac gtcaatgggt ggagtattta
301 cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata tgccaagtac gccccctatt
361 gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc agtacatgac cttatgggac
421 tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt
481 tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac
541 cccattgacg tcaatgggag tttgttttgg caccaaaatc aacgggactt tccaaaatgt
601 cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg ggaggtctat
661 ataagcagag ctcgtttagt gaaccgtcag atcgcctgga gacgccatcc acgctgtttt
721 gacctccata gaagacaccg ggaccgatcc agcctccgcg gccccgaatt caccatgtct
781 agactggaca agagcaaagt cataaacggc gctctggaat tactcaatgg agtcggtatc
841 gaaggcctga cgacaaggaa actcgctcaa aagctgggag ttgagcagcc taccctgtac
901 tggcacgtga agaacaagcg ggccctgctc gatgccctgc caatcgagat gctggacagg
961 catcataccc acttctgccc cctggaaggc gagtcatggc aagactttct gcggaacaac
1021 gccaagtcat tccgctgtgc tctcctctca catcgcgacg gggctaaagt gcatctcggc
1081 acccgcccaa cagagaaaca gtacgaaacc ctggaaaatc agctcgcgtt cctgtgtcag
1141 caaggcttct ccctggagaa cgcactgtac gctctgtccg ccgtgggcca ctttacactg
1201 ggctgcgtat tggaggaaca ggagcatcaa gtagcaaaag aggaaagaga gacacctacc
1261 accgattcta tgcccccact tctgagacaa gcaattgagc tgttcgaccg gcagggagcc
1321 gaacctgcct tccttttcgg cctggaacta atcatatgtg gcctggagaa acagctaaag
1381 tgcgaaagcg gcgggccggc cgacgccctt gacgattttg acttagacat gctcccagcc
1441 gatgcccttg acgactttga ccttgatatg ctgcctgctg acgctcttga cgattttgac
1501 cttgacatgc tccccgggta actaagtaag gatccagaca tgataagata cattgatgag
1561 tttggacaaa ccacaactag aatgcagtga aaaaaatgct ttatttgtga aatttgtgat
1621 gctattgctt tatttgtaac cattataagc tgcaataaac aagttaacaa caacaattgc
1681 attcatttta tgtttcaggt tcagggggag gtgtgggagg ttttttaaag caagtaaaac
1741 ctctacaaat gtggtatggc tgattatgat cctgcaagcc tcgtcgtcct ggccggacca
1801 cgctatctgt gcaaggtccc cggccccgga cgcgcgctcc atgagcagag cgcccgccgc
1861 cgaggcgaag actcgggcgg cgccctgccc gtcccaccag gtcaacaggc ggtaaccggc
1921 ctcttcatcg ggaatgcgcg cgaccttcag catcgccggc atgtccccct ggcggacggg
1981 aagtatccag ctcgaccaag cttggcgaga ttttcaggag ctaaggaagc taaaatggag
2041 aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat ggcatcgtaa agaacatttt
2101 gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga ccgttcagct gcattaatga
2161 atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc
2221 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
2281 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
2341 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
2401 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
2461 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
2521 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
2581 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
2641 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
2701 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
2761 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
2821 agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
2881 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
2941 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
3001 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
3061 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
3121 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
3181 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
3241 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
3301 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
3361 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
3421 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
3481 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
3541 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
3601 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
3661 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
3721 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca
3781 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
3841 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
3901 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
3961 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
4021 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
4081 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
4141 taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt
4201 cgtcttcact cgaggtcgag ggatccagac atgataagat acattgatga gtttggacaa
4261 accacaacta gaatgcagtg aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct
4321 ttatttgtaa ccattataag ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt
4381 atgtttcagg ttcaggggga ggtgtgggag gttttttaaa gcaagtaaaa cctctacaaa
4441 tgtggtatgg ctgattatga tctctagtca aggcactata catcaaatat tccttattaa
4501 cccctttaca aattaaaaag ctaaaggtac acaatttttg agcatagtta ttaatagcag
4561 acactctatg cctgtgtgga gtaagaaaaa acagtatgtt atgattataa ctgttatgcc
4621 tacttataaa ggttacagaa tatttttcca taattttctt gtatagcagt gcagcttttt
4681 cctttgtggt gtaaatagca aagcaagcaa gagttctatt actaaacaca gcatgactca
4741 aaaaacttag caattctgaa ggaaagtcct tggggtcttc tacctttctc ttcttttttg
4801 gaggagtaga atgttgagag tcagcagtag cctcatcatc actagatggc atttcttctg
4861 agcaaaacag gttttcctca ttaaaggcat tccaccactg ctcccattca tcagttccat
4921 aggttggaat ctaaaataca caaacaatta gaatcagtag tttaacacat tatacactta
4981 aaaattttat atttacctta gagctttaaa tctctgtagg tagtttgtcc aattatgtca
5041 caccacagaa gtaaggttcc ttcacaaaga tccggaccaa agcggccatc gtgcctcccc
5101 actcctgcag ttcgggggca tggatgcgcg gatagccgct gctggtttcc tggatgccga
5161 cggatttgca ctgccggtag aactccgcga ggtcgtccag cctcaggcag cagctgaacc
5221 aactcgcgag gggatcgagc ccggggtggg cgaagaactc cagcatgaga tccccgcgct
5281 ggaggatcat ccagccggcg tcccggaaaa cgattccgaa gcccaacctt tcatagaagg
5341 cggcggtgga atcgaaatct cgtgatggca ggttgggcgt cgcttggtcg gtcatttcga
5401 accccagagt cccgctcaga agaactcgtc aagaaggcga tagaaggcga tgcgctgcga
5461 atcgggagcg gcgataccgt aaagcacgag gaagcggtca gcccattcgc cgccaagctc
5521 ttcagcaata tcacgggtag ccaacgctat gtcctgatag cggtccgcca cacccagccg
5581 gccacagtcg atgaatccag aaaagcggcc attttccacc atgatattcg gcaagcaggc
5641 atcgccatgg gtcacgacga gatcctcgcc gtcgggcatg cgcgccttga gcctggcgaa
5701 cagttcggct ggcgcgagcc cctgatgctc ttcgtccaga tcatcctgat cgacaagacc
5761 ggcttccatc cgagtacgtg ctcgctcgat gcgatgtttc gcttggtggt cgaatgggca
5821 ggtagccgga tcaagcgtat gcagccgccg cattgcatca gccatgatgg atactttctc
5881 ggcaggagca aggtgagatg acaggagatc ctgccccggc acttcgccca atagcagcca
5941 gtcccttccc gcttcagtga caacgtcgag cacagctgcg caaggaacgc ccgtcgtggc
6001 cagccacgat agccgcgctg cctcgtcctg cagttcattc agggcaccgg acaggtcggt
6061 cttgacaaaa agaaccgggc gcccctgcgc tgacagccgg aacacggcgg catcagagca
6121 gccgattgtc tgttgtgccc agtcatagcc gaatagcctc tccacccaag cggccggaga
6181 acctgcgtgc aatccatctt gttcaatcat gcgaaacgat cctcatcctg tctcttgatc
6241 agatcttgat cccctgcgcc atcagatcct tggcggcaag aaagccatcc agtttacttt
6301 gcagggcttc ccaaccttac cagagggcgc cccagctggc aattccggtt cgcttgctgt
6361 ccataaaacc gcccagtcta gctatcgcca tgtaagccca ctgcaagcta cctgctttct
6421 ctttgcgctt gcgttttccc ttgtccagat agcccagtag ctgacattca tccggggtca
6481 gcaccgtttc tgcggactgg ctttctacgt gttccgcttc ctttagcagc ccttgcgccc
6541 tgagtgcttg cggcagcgtg aagctagctt tttgcaaaag cctaggcctc caaaaaagcc
6601 tcctcactac ttctggaata gctcagaggc cgaggcggcc tcggcctctg cataaataaa
6661 aaaaattagt cagccatggg gcggagaatg ggcggaactg ggcggagtta ggggcgggat
6721 gggcggagtt aggggcggga ctatggttgc tgactaattg agatgcatgc tttgcatact
6781 tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acacctggtt gctgactaat tgagatgcat
6841 gctttgcata cttctgcctg ctggggagcc tggggacttt ccacacccta actgacacac
6901 attccacagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct
6961 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg
7021 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag
7081 cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcacct
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
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| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2734/pENTR223-DNAJB4人源基因质粒 |
| P2746/pENTR223-MT1M人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
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Adv Sci：林戈/薛愿超合作阐明 eIF4E1B 在哺乳动物卵母细胞向胚胎转换过程中母源 mRNA 选择性翻译的作用机制
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三句话读懂一篇 CNS：高糖饮食引起线粒体损伤；长期熬夜真的
了基因隐秘转录是多种哺乳动物干细胞衰老过程中共有特征，同时发现染色质状态改变是诱导基因隐秘转录的因素之一。图 8：来源 Nature Aging9.Nature Neuroscience：大脑皮层决定睡熟程度大脑皮层约占 80% 的大脑体积，负责调控多种复杂生理现象。2021 年 8 月 2 日，牛津大学 Zoltán Molnár 和 Vladyslav V. Vyazovskiy 教授团队在 Nature Neuroscience 杂志上发表研究论文 A role for the cortex
pTet-On-Advanced哺乳调控质粒
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