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- Xybio
- 上海
- P1714
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#53189
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：ph7SK-gRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#53189
质粒属性
质粒简介
ph7SK-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3504 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3504
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
misc_feature 691..933
/label=7SK promoter
misc_RNA 952..1027
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1524..2112)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2189..2983)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(3018..3375)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3032..3167
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(3377..3481)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
541 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg
601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtacctt
661 taattctagt actatgcatc gtctcattgt ctgcagtatt tagcatgccc cacccatctg
721 caaggcattc tggatagtgt caaaacagcc ggaaatcaag tccgtttatc tcaaacttta
781 gcattttggg aataaatgat atttgctatg ctggttaaat tagattttag ttaaatttcc
841 tgctgaagct ctagtacgat aagcaacttg acctaagtgt aaagttgaga cttccttcag
901 gtttatatag cttgtgcgcc gcttgggtac ctcgggtctt cgagaagacc tgttttagag
961 ctagaaatag caagttaaaa taaggctagt ccgttatcaa cttgaaaaag tggcaccgag
1021 tcggtgcttt ttttctcgga ctgatgacct gagacgccgc ggtggagctc cagcttttgt
1081 tccctttagt gagggttaat tgcgcgcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg
1141 tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa
1201 gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc actgcccgct
1261 ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga
1321 ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
1381 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
1441 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
1501 aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa
1561 aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt
1621 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
1681 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc
1741 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
1801 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
1861 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
1921 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
1981 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
2041 caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa
2101 aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa
2161 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgatc agaagaactc gtcaagaagg cgatagaagg
2221 cgatgcgctg cgaatcggga gcggcgatac cgtaaagcac gaggaagcgg tcagcccatt
2281 cgccgccaag ctcttcagca atatcacggg tagccaacgc tatgtcctga tagcggtccg
2341 ccacacccag ccggccacag tcgatgaatc cagaaaagcg gccattttcc accatgatat
2401 tcggcaagca ggcatcgcca tgggtcacga cgagatcctc gccgtcgggc atgctcgcct
2461 tgagcctggc gaacagttcg gctggcgcga gcccctgatg ctcttcgtcc agatcatcct
2521 gatcgacaag accggcttcc atccgagtac gtgctcgctc gatgcgatgt ttcgcttggt
2581 ggtcgaatgg gcaggtagcc ggatcaagcg tatgcagccg ccgcattgca tcagccatga
2641 tggatacttt ctcggcagga gcaaggtgag atgacaggag atcctgcccc ggcacttcgc
2701 ccaatagcag ccagtccctt cccgcttcag tgacaacgtc gagcacagct gcgcaaggaa
2761 cgcccgtcgt ggccagccac gatagccgcg ctgcctcgtc ttgcagttca ttcagggcac
2821 cggacaggtc ggtcttgaca aaaagaaccg ggcgcccctg cgctgacagc cggaacacgg
2881 cggcatcaga gcagccgatt gtctgttgtg cccagtcata gccgaatagc ctctccaccc
2941 aagcggccgg agaacctgcg tgcaatccat cttgttcaat catgcgaaac gatcctcatc
3001 ctgtctcttg atcgatcttt gcaaaagcct aggcctccaa aaaagcctcc tcactacttc
3061 tggaatagct cagaggccga ggcggcctcg gcctctgcat aaataaaaaa aattagtcag
3121 ccatggggcg gagaatgggc ggaactgggc ggagttaggg gcgggatggg cggagttagg
3181 ggcgggacta tggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctggg
3241 gagcctgggg actttccaca cctggttgct gactaattga gatgcatgct ttgcatactt
3301 ctgcctgctg gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagctgg
3361 ttctttccgc ctcaggactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt
3421 gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc
3481 gcacatttcc ccgaaaagtg ccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：ph7SK-gRNA哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#53189
| 启动子: | 7SK |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
ph7SK-gRNA是一个哺乳细胞gRNA表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3504 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3504
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin complement(3..458)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
misc_feature 691..933
/label=7SK promoter
misc_RNA 952..1027
/label=gRNA scaffold
/note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
CRISPR/Cas9 system"
rep_origin complement(1524..2112)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2189..2983)
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter complement(3018..3375)
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3032..3167
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
promoter complement(3377..3481)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc
61 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga
121 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc
181 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc
241 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag
301 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa
361 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac
421 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg
481 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg
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601 taaaacgacg gccagtgagc gcgcgtaata cgactcacta tagggcgaat tgggtacctt
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721 caaggcattc tggatagtgt caaaacagcc ggaaatcaag tccgtttatc tcaaacttta
781 gcattttggg aataaatgat atttgctatg ctggttaaat tagattttag ttaaatttcc
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1021 tcggtgcttt ttttctcgga ctgatgacct gagacgccgc ggtggagctc cagcttttgt
1081 tccctttagt gagggttaat tgcgcgcttg gcgtaatcat ggtcatagct gtttcctgtg
1141 tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa
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1621 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
1681 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc
1741 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
1801 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
1861 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
1921 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
1981 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
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2161 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgatc agaagaactc gtcaagaagg cgatagaagg
2221 cgatgcgctg cgaatcggga gcggcgatac cgtaaagcac gaggaagcgg tcagcccatt
2281 cgccgccaag ctcttcagca atatcacggg tagccaacgc tatgtcctga tagcggtccg
2341 ccacacccag ccggccacag tcgatgaatc cagaaaagcg gccattttcc accatgatat
2401 tcggcaagca ggcatcgcca tgggtcacga cgagatcctc gccgtcgggc atgctcgcct
2461 tgagcctggc gaacagttcg gctggcgcga gcccctgatg ctcttcgtcc agatcatcct
2521 gatcgacaag accggcttcc atccgagtac gtgctcgctc gatgcgatgt ttcgcttggt
2581 ggtcgaatgg gcaggtagcc ggatcaagcg tatgcagccg ccgcattgca tcagccatga
2641 tggatacttt ctcggcagga gcaaggtgag atgacaggag atcctgcccc ggcacttcgc
2701 ccaatagcag ccagtccctt cccgcttcag tgacaacgtc gagcacagct gcgcaaggaa
2761 cgcccgtcgt ggccagccac gatagccgcg ctgcctcgtc ttgcagttca ttcagggcac
2821 cggacaggtc ggtcttgaca aaaagaaccg ggcgcccctg cgctgacagc cggaacacgg
2881 cggcatcaga gcagccgatt gtctgttgtg cccagtcata gccgaatagc ctctccaccc
2941 aagcggccgg agaacctgcg tgcaatccat cttgttcaat catgcgaaac gatcctcatc
3001 ctgtctcttg atcgatcttt gcaaaagcct aggcctccaa aaaagcctcc tcactacttc
3061 tggaatagct cagaggccga ggcggcctcg gcctctgcat aaataaaaaa aattagtcag
3121 ccatggggcg gagaatgggc ggaactgggc ggagttaggg gcgggatggg cggagttagg
3181 ggcgggacta tggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctggg
3241 gagcctgggg actttccaca cctggttgct gactaattga gatgcatgct ttgcatactt
3301 ctgcctgctg gggagcctgg ggactttcca caccctaact gacacacatt ccacagctgg
3361 ttctttccgc ctcaggactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt
3421 gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc
3481 gcacatttcc ccgaaaagtg ccac
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2348/pENTR223-ERP27人源基因质粒 |
| P2349/pENTR223-ZDHHC16人源基因质粒 |
| P2350/pENTR223-DFNA5人源基因质粒 |
| P2351/pENTR223-MPPED2人源基因质粒 |
| P2352/pENTR223-NIFK人源基因质粒 |
| P2353/pENTR223-KCTD17人源基因质粒 |
| P2354/pENTR223-CEP170P1人源基因质粒 |
| P2355/pENTR223-SCML4人源基因质粒 |
| P2356/pENTR223-CLEC18C人源基因质粒 |
| P2357/pENTR223-HSD17B11人源基因质粒 |
| P2358/pENTR223-UBXN1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Cell Rep：上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
。同时，研究人员发现 SpaCas12f1 的 tracrRNA 具有独特的 head-to-toe 的发夹结构，这是限制 SpaCas12f1 在哺乳动物细胞有效编辑的主要因素。通过对 RNA 二级结构预测及小 RNA 测序结果分析，研究人员设计了五种策略，系统地工程化向导 RNA，成功地获得了高效的引导 RNA，gRNA_MS13，从而实现 CRISPR-SpaCas12f1 高效哺乳动物细胞编辑。 这项研究扩展了微型 CRISPR 核酸酶工具库，并为基因治疗和工程化微型 CRISPR 系统提供
CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具，可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA（guide RNA， gRNA）和 Cas9 蛋白的参与下，待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA，被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct，如需直接复制网址，可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点：基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对
ph7SK-gRNA哺乳编辑质粒
￥100 - 1000
