胰蛋白酶消化液；N

流式细胞术样本制备技术

的 PBS)离心洗涤 1~2 次； 若悬液中有明显的沉淀块，需用 200~300 目的滤网过滤后再用细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS)洗涤 1~2 次； 用细胞染色 buffer(或含 1%BSA 的 PBS)调整浓度至 1x107/mL 备用。 六、贴壁细胞的制备 吸除培养基上清液，用含无钙、镁离子的PBS漂洗一次； 以 25 mL 培养基为例，加入 1 mL 消化液（0.1%胰蛋白酶），置室温（25℃）或 37℃ 消化 2~5 min；或者加入 1 mL 的 EDTA

家兔椎间盘(intervertebral disc )细胞的体外培养方法

后，加入消化液，移入到10ml 离心管，培养箱内消化。每隔20分钟，用吸管吹打一次，观察液体有否变浑浊，并取少量液体，在相差倒置显微镜下观察。0.4%台盼兰染色计算活细胞数目。接种密度在105数量级。置于5%CO2孵箱中培养，每隔3天换液。待细胞95%融合时，0.25胰蛋白酶传代分瓶Result:　IVD细胞为类软骨细胞，描述：单层细胞形状不规则，可呈三角形、多角形，梭形及不规则形。不同于成纤维细胞。附图： 组织块法      

写给细胞小白的实用手册

培养箱中。或者在消化时看到细胞有脱落的迹象即可去除消化液，加入适量的培养基轻轻吹打瓶壁，根据细胞密度按照比例接种到细胞培养瓶。经长期对比发现，此方法比离心传代对细胞的损害较小。冻存1. 选择处于对数生长期的细胞。在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用 0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液，然后将细胞收集于离心管中离心 （800 r/min，20 S）。2. 配制冷冻保存溶液 （使用前配制