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- Xybio
- 上海
- P2499
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#83961
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pPB-US-ECasE哺乳转座质粒
别称: Plasmid#83961
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,转座 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
请根据质粒名称查找相关文献获知具体的使用方法。
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4454/pCMV-SPORT6-CLDND1人源基因质粒 |
| P4455/pCMV-SPORT6-PAX6人源基因质粒 |
| P4456/pCMV-SPORT6-HGSNAT人源基因质粒 |
| P4457/pCMV-SPORT6-HDGFL3人源基因质粒 |
| P4458/pCMV-SPORT6-GIN1人源基因质粒 |
| P4459/pCMV-SPORT6-NDST1（点突变）人源基因质粒 |
| P4460/pCMV-SPORT6-MCUR1人源基因质粒 |
| P4461/pCMV-SPORT6-S100A3人源基因质粒 |
| P4462/pCMV-SPORT6-MRRF人源基因质粒 |
| P4463/pCMV-SPORT6-VTI1A人源基因质粒 |
| P4464/pCMV-SPORT6-FNDC3B人源基因质粒 |
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文献和实验体克隆DNA大片段±*++-构建基因组文库-++-构建cDNA文库+---常规的亚克隆化+---构建新型的DNA结构+---序列分析+--+单链探针+**--+外源基因在大肠杆菌中的表达+--- *外源DNA如超过10kb，则重组质粒的转化率和DNA得率都非常低 **已有个别质料可用于此目的 四、其他载体 现在提到的分子载体有的不是用于克隆 某基因，而是作为外源基因进入受体细胞的运载工具。 （一）转座子载体 这里主要提一下有关果蝇转座因子（P因子）作为基因载体。因为这是很有希望的真核
。 Silent mutations (沉默突变)：不改变基因产物的突变。 Silent sites (沉默位点)：指突变不影响基因产物的位点。 Simple-sequence DNA (简单序列DNA)：等同于卫星DNA。 SINES：短散布序列，是一类反转座子，以短的散布重复在哺乳动物基因组中出现，来自 RNA 聚合酶III介导的转录。 Single-copy plasmid (单拷贝质粒)：在细菌中以每个宿主染色体一个质粒的比率
。 Simple-sequence DNA (简单序列DNA)：等同于卫星DNA。 SINES：短散布序列，是一类反转座子，以短的散布重复在哺乳动物基因组中出现，来自 RNA 聚合酶III介导的转录。 Single-copy plasmid (单拷贝质粒)：在细菌中以每个宿主染色体一个质粒的比率存在。 Single-strand assimilation (单链同化)：指RecA 蛋白质引起DNA单链替换双螺旋中其同源 链的能力，即能使单链同化进双链。 Single
