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- Xybio
- 上海
- P1237
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pDRIVE-hbAct
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pDRIVE-hbAct乳糖苷酶质粒
别称: pDRIVE-hbAct
| 别称: | 乳糖苷酶 |
|---|---|
| 原核抗性: | Zeo |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Zeo |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pDRIVE-hbAct质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3193/pCMV-SPORT6-ARPP19人源基因质粒 |
| P3194/pCMV-SPORT6-RTF2（1点突变）人源基因质粒 |
| P3195/pCMV-SPORT6-ASNSD1（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3196/pCMV-SPORT6-ARFGAP3（1点突变2同义突变）人源基因质粒 |
| P3197/pCMV-SPORT6-POLG2（506-1458bp）人源基因质粒 |
| P3198/pCMV-SPORT6-SRP54（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3199/pCMV-SPORT6-ELMO2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3200/pCMV-SPORT6-SLC12A9（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3201/pCMV-SPORT6-CARHSP1（3同义突变）人源基因质粒 |
| P3202/pCMV-SPORT6-SOX15人源基因质粒 |
| P3204/pCMV-SPORT6-XPO5人源基因质粒 |
| P3205/pCMV-SPORT6-C1orf43人源基因质粒 |
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文献和实验o）以及结构基因（lacZ、lacY、lacA）。转录受阻遏蛋白调控，如果加入 IPTG，阻遏蛋白失活，操纵子开始转录。 看到这里是不是很熟悉，你的基因转入质粒以后，是不是用 IPTG 诱导的？加入一定抗性，优化条件，是不是蛋白表达了？具体怎么会表达的，结合上述大肠杆菌的结构，有没有稍微懂一点呢？ IPTG 诱导表达系统 还不太明白，继续看下面这个图。 看懂了过程中，我们就好理解蓝白斑筛选了，细胞中 β-半乳糖苷酶
E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏
质粒除有抗性基因外，往往还带有其他明显的筛选标记，最常用的是蓝白斑筛选（ -半乳糖苷酶系统）。此类载体携带lacZ’基因，它编码β-半乳糖苷酶的N-末端（α-肽），并且处于可被安慰诱导物IPTG（异丙基硫代半乳糖苷，与乳糖结构类似但不能被β-半乳糖苷酶降解）诱导的启动子调控之下。质粒转化的宿主菌为LacZ△M15 基因型（含有编码N-末端缺陷型的β-半乳糖苷酶多肽的基因）。未重组的质粒转化宿主菌后，在IPTG 的诱导下，质粒与基因组分别表达缺陷但可以相互补偿的两个肽（即α-互补），形成了有功
