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- Xybio
- 上海
- P0952
- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
KAT5;TIP;ESA1;PLIP;TIP60;cPLA2;HTATI
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1-HA-Tip60人源基因质粒
别称: KAT5;TIP;ESA1;PLIP;TIP60;cPLA2;HTATI
启动子: CMV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库载体；人源哺乳细胞表达质粒
原核抗性: Amp
筛选标记: G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-HA-Tip60是一个人源基因哺乳表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7293 bp ds-DNA circular SYN 27-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7293
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 202..581
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 874..900
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
misc_feature 952..2337
/label=Tip60
polyA_signal 2860..3084
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3130..3558
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3572..3901
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3752..3887
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3968..4762
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATC-PFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4936..5057
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
protein_bind 5130..5146
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(5154..5184)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 5199..5220
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(5508..6093)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6264..7124)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7125..7229)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgcc atgtacccat acgatgttcc agattacgct
901 cggatccaag aattaattcc cgggatatcg tcgacccacg cgtccgggaa gatggcggag
961 gtgggggaga taatcgaggg ctgccgccta cccgtgctgc ggcggaacca ggacaacgaa
1021 gatgagtggc ccctggccga gatcctgagc gtgaaggaca tcagtggccg gaagcttttc
1081 tacgtccatt acattgactt caacaaacgt ctggatgaat gggtgacgca tgagcggctg
1141 gacctaaaga agatccagtt ccccaagaaa gaggccaaga cccccactaa gaacggactt
1201 cctgggtccc gtcctggctc tccagagaga gaggtgaaac ggaaggtgga ggtggtttca
1261 ccagcaactc cagtgcccag cgagacagcc ccggcctcgg tttttcccca gaatggagcc
1321 gcccgtaggg cagtggcagc ccagccagga cggaagcgaa aatcgaattg tttgggcact
1381 gatgaggact cccaggacag ctctgatgga ataccgtcag caccacgcat gactggcagc
1441 ctggtgtctg atcgaagcca cgacgacatc gtcacccgga tgaagaacat tgagtgcatt
1501 gagctgggcc ggcaccgcct caagccgtgg tacttctccc cgtacccaca ggaactcacc
1561 acattgcctg tcctctacct gtgcgagttc tgcctcaagt acggccgtag tctcaagtgt
1621 cttcagcgtc atttgaccaa gtgtgaccta cgacatcctc caggcaatga gatttaccgc
1681 aagggcacca tctccttctt tgagattgat ggacgtaaga acaagagtta ttcccagaac
1741 ctgtgtcttt tggccaagtg tttccttgac cataagacac tgtactatga cacagaccct
1801 ttcctcttct acgtcatgac agagtatgac tgtaagggct tccacatcgt gggctacttc
1861 tccaaggaga aagaatcaac ggaagactac aatgtggcct gcatcctaac cctgcctccc
1921 taccagcgcc ggggctacgg caagctgctg atcgagttca gctatgaact ctccaaagtg
1981 gaagggaaaa cagggacccc tgagaagccc ctctcagacc ttggcctcct atcctatcga
2041 agctactggt cccagaccat cctggagatc ctgatggggc tgaagtcgga gagcggggag
2101 aggccacaga tcaccatcaa tgagattagt gaaatcacca gcatcaagaa ggaggatgtc
2161 atctccactc tgcagtacct caatctcatc aactactaca agggccagta catcctcaca
2221 ctgtcagagg acatcgtgga tggccatgag cgggccatgc tcaagcggct cctgcggatc
2281 gactccaagt gtctgcactt cactcccaag gactggagca agagggggaa gtggtgacca
2341 gacactgccc actgcagtgc caagacggca gcaggactgg ggctgatagc ccaccccgcc
2401 cccactgcag ctcccacaaa gcactctaag ggagatgggg ctgaggacag ctcaaaaagg
2461 agaggacagg cctggcaggg gcccactggt gcccagcacc aaggcgagct ccgggctcag
2521 accaactcca aggtcagctg gccacaggcc caggcctcct ctgaagcagg gaccagaggg
2581 agccaggcag ctgtgtacag tgagaaggga tccggatggg ggagctctgt acagagggct
2641 ggtgattgta aaaatttctt ttgtaaagta gaagttgggg gtggggtggg tgctggctgc
2701 aaaaatttct ggcttctctt acccctattg cccccggcaa taaattgttt ctatatgcca
2761 aaaaaaaaaa aaaaaagggc ggccaattct gcagatatcc agcacagtgg cggccgctcg
2821 agtctagagg gcccgtttaa acccgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc
2881 catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg
2941 tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc
3001 tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg
3061 ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg
3121 ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
3181 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
3241 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
3301 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
3361 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
3421 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
3481 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
3541 aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
3601 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
3661 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
3721 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
3781 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
3841 tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
3901 aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt cggatctgat caagagacag gatgaggatc
3961 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag
4021 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg
4081 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa
4141 tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc
4201 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc
4261 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga
4321 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa
4381 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct
4441 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat
4501 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt
4561 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta
4621 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga
4681 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg
4741 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg
4801 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc
4861 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag
4921 ttcttcgccc accccaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
4981 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
5041 ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa
5101 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
5161 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
5221 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
5281 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg
5341 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
5401 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
5461 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
5521 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
5581 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
5641 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
5701 catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
5761 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
5821 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
5881 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
5941 actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga
6001 gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtttttt tgtttgcaag
6061 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
6121 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
6181 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
6241 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
6301 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
6361 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
6421 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
6481 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
6541 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
6601 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
6661 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
6721 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
6781 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
6841 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
6901 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
6961 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
7021 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
7081 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
7141 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
7201 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
7261 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1-HA-Tip60人源基因质粒
别称: KAT5;TIP;ESA1;PLIP;TIP60;cPLA2;HTATI
启动子: CMV
复制子: pUC
质粒分类: 基因文库载体；人源哺乳细胞表达质粒
原核抗性: Amp
筛选标记: G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pCDNA3.1-HA-Tip60是一个人源基因哺乳表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7293 bp ds-DNA circular SYN 27-FEB-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7293
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/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 582..785
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/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 830..848
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 874..900
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
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/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3572..3901
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 3752..3887
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3968..4762
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/note="SV40 polyadenylation signal"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
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121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
841 actataggga gacccaagct ggctagcgcc atgtacccat acgatgttcc agattacgct
901 cggatccaag aattaattcc cgggatatcg tcgacccacg cgtccgggaa gatggcggag
961 gtgggggaga taatcgaggg ctgccgccta cccgtgctgc ggcggaacca ggacaacgaa
1021 gatgagtggc ccctggccga gatcctgagc gtgaaggaca tcagtggccg gaagcttttc
1081 tacgtccatt acattgactt caacaaacgt ctggatgaat gggtgacgca tgagcggctg
1141 gacctaaaga agatccagtt ccccaagaaa gaggccaaga cccccactaa gaacggactt
1201 cctgggtccc gtcctggctc tccagagaga gaggtgaaac ggaaggtgga ggtggtttca
1261 ccagcaactc cagtgcccag cgagacagcc ccggcctcgg tttttcccca gaatggagcc
1321 gcccgtaggg cagtggcagc ccagccagga cggaagcgaa aatcgaattg tttgggcact
1381 gatgaggact cccaggacag ctctgatgga ataccgtcag caccacgcat gactggcagc
1441 ctggtgtctg atcgaagcca cgacgacatc gtcacccgga tgaagaacat tgagtgcatt
1501 gagctgggcc ggcaccgcct caagccgtgg tacttctccc cgtacccaca ggaactcacc
1561 acattgcctg tcctctacct gtgcgagttc tgcctcaagt acggccgtag tctcaagtgt
1621 cttcagcgtc atttgaccaa gtgtgaccta cgacatcctc caggcaatga gatttaccgc
1681 aagggcacca tctccttctt tgagattgat ggacgtaaga acaagagtta ttcccagaac
1741 ctgtgtcttt tggccaagtg tttccttgac cataagacac tgtactatga cacagaccct
1801 ttcctcttct acgtcatgac agagtatgac tgtaagggct tccacatcgt gggctacttc
1861 tccaaggaga aagaatcaac ggaagactac aatgtggcct gcatcctaac cctgcctccc
1921 taccagcgcc ggggctacgg caagctgctg atcgagttca gctatgaact ctccaaagtg
1981 gaagggaaaa cagggacccc tgagaagccc ctctcagacc ttggcctcct atcctatcga
2041 agctactggt cccagaccat cctggagatc ctgatggggc tgaagtcgga gagcggggag
2101 aggccacaga tcaccatcaa tgagattagt gaaatcacca gcatcaagaa ggaggatgtc
2161 atctccactc tgcagtacct caatctcatc aactactaca agggccagta catcctcaca
2221 ctgtcagagg acatcgtgga tggccatgag cgggccatgc tcaagcggct cctgcggatc
2281 gactccaagt gtctgcactt cactcccaag gactggagca agagggggaa gtggtgacca
2341 gacactgccc actgcagtgc caagacggca gcaggactgg ggctgatagc ccaccccgcc
2401 cccactgcag ctcccacaaa gcactctaag ggagatgggg ctgaggacag ctcaaaaagg
2461 agaggacagg cctggcaggg gcccactggt gcccagcacc aaggcgagct ccgggctcag
2521 accaactcca aggtcagctg gccacaggcc caggcctcct ctgaagcagg gaccagaggg
2581 agccaggcag ctgtgtacag tgagaaggga tccggatggg ggagctctgt acagagggct
2641 ggtgattgta aaaatttctt ttgtaaagta gaagttgggg gtggggtggg tgctggctgc
2701 aaaaatttct ggcttctctt acccctattg cccccggcaa taaattgttt ctatatgcca
2761 aaaaaaaaaa aaaaaagggc ggccaattct gcagatatcc agcacagtgg cggccgctcg
2821 agtctagagg gcccgtttaa acccgctgat cagcctcgac tgtgccttct agttgccagc
2881 catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg
2941 tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc
3001 tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg
3061 ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag aaccagctgg ggctctaggg
3121 ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca
3181 gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct
3241 ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt
3301 tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac
3361 gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct
3421 ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt
3481 ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac
3541 aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
3601 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
3661 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
3721 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
3781 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
3841 tgcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
3901 aaagctcccg ggagcttgta tatccatttt cggatctgat caagagacag gatgaggatc
3961 gtttcgcatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag
4021 gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg
4081 gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa
4141 tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc
4201 agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc
4261 ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga
4321 tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa
4381 acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct
4441 ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat
4501 gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt
4561 ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta
4621 tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga
4681 ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg
4741 ccttcttgac gagttcttct gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg
4801 cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc
4861 ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag
4921 ttcttcgccc accccaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata aagcaatagc
4981 atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtccaaa
5041 ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag cttggcgtaa
5101 tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata
5161 cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta
5221 attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa
5281 tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg
5341 ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag
5401 gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa
5461 ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc
5521 cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca
5581 ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg
5641 accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct
5701 catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt
5761 gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag
5821 tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc
5881 agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac
5941 actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga
6001 gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtttttt tgtttgcaag
6061 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
6121 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
6181 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
6241 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
6301 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
6361 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
6421 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
6481 gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt
6541 tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc
6601 tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga
6661 tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt
6721 aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc
6781 atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa
6841 tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca
6901 catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca
6961 aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct
7021 tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc
7081 gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa
7141 tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt
7201 tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc
7261 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4895/pCMV-SPORT6-EIF4G2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4896/pCMV-SPORT6-FGFR1人源基因质粒 |
| P4897/pCMV-SPORT6-KIAA0408人源基因质粒 |
| P4898/pCMV-SPORT6-AFAP1L2人源基因质粒 |
| P4899/pCMV-SPORT6-SLC38A2人源基因质粒 |
| P4900/pCMV-SPORT6-INTS7人源基因质粒 |
| P4901/pCMV-SPORT6-GHDC人源基因质粒 |
| P4902/pCMV-SPORT6-TET3人源基因质粒 |
| P4903/pCMV-SPORT6-ZNF212人源基因质粒 |
| P4904/pCMV-SPORT6-RNF213人源基因质粒 |
| P4905/pCMV-SPORT6-ERCC5人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图，它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入
表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 （4） P/E 启动子/增强
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
pCDNA3.1-HA-Tip60人源基因质粒
￥100 - 1000
