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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pmCherry-EGFP-LC3b(rat)
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pmCherry-EGFP-LC3b-r哺乳自噬质粒
别称: pmCherry-EGFP-LC3b(rat)
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6136 bp ds-DNA circular SYN 31-MAR-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pmCherry-GFP-LC3b-R
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6136)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 22, 2016 from SnapGene Viewer 3.2.1
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6136
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 604..1278
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed (Campbell et al.,
2002)"
/note="mcherry"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MAFSEDVIKEFMRFKVRMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEGTQTAK
LKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNFEDGGV
VTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERMYPEDGALKGEIKM
RLKLKDGGHYDAEVKTTYMAKKPVQLPGAYKTDIKLDITSHNEDYTIVEQYERAEGRHS
TGA"
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/codon_start=1
/product="enhanced GFP"
/note="EGFP"
/note="mammalian codon-optimized"
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VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
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/note="LC3B-R"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
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/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3534..3638
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 3640..3997
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
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/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
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(Geneticin(R))"
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/direction=RIGHT
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcggcc
601 accatggcct tctccgagga cgttatcaag gagttcatgc gcttcaaggt gcgcatggag
661 ggctccgtga acggccacga gttcgagatc gagggcgagg gcgagggccg cccctacgag
721 ggcacccaga ccgccaagct gaaggtgacc aagggcggcc ccctgccctt cgcctgggac
781 atcctgtccc ctcagttcca gtacggctcc aaggcctacg tgaagcaccc cgccgacatc
841 cccgactact tgaagctgtc cttccccgag ggcttcaagt gggagcgcgt gatgaacttc
901 gaggacggcg gcgtggtgac cgtgacccag gactcctccc tgcaggacgg cgagttcatc
961 tacaaggtga agctgcgcgg caccaacttc ccctccgacg gccccgtaat gcagaagaag
1021 accatgggct gggaggcctc caccgagcgg atgtaccccg aggacggcgc cctgaagggc
1081 gagatcaaga tgaggctgaa gctgaaggac ggcggccact acgacgccga ggtcaagacc
1141 acctacatgg ccaagaagcc cgtgcagctg cccggcgcct acaagaccga catcaagctg
1201 gacatcacct cccacaacga ggactacacc atcgtggaac agtacgagcg cgccgagggc
1261 cgccactcca ccggcgccgg tggaccggtc gccaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg
1321 ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc
1381 agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc
1441 tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc
1501 gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc
1561 atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag
1621 acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc
1681 atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc
1741 cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc
1801 cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc
1861 atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg
1921 agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc
1981 gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtccggac tcagatctag accgtccgag
2041 aagaccttca aacagcgccg gagcttcgaa caaagagtgg aagatgtccg gctcatccgg
2101 gagcagcacc ccaccaagat cccagtgatt atagagcgat acaagggtga gaagcagctg
2161 cccgtcctgg acaagaccaa gttccttgta cctgatcacg tgaatatgag cgaactcatc
2221 aagataatta gaaggcgcct gcagctcaat gctaaccaag ccttcttcct cctggtgaat
2281 gggcacagca tggtgagtgt gtccacaccc atctctgaag tgtacgagag cgagagagat
2341 gaagacggct tcctgtacat ggtctatgcc tcccaggaga cgttcgggac agcactggct
2401 gttacataca tgtcagctct gaaggcaaca gcaacaggaa gagagccatg cttgtgacag
2461 acatacagcc acttccaact aaagcaagcc tctgctccct gctacctgca tggagcccac
2521 tgtgacactc agaccatccc cggtcactca ctcactcgtg tctgagaatc tcagtgagag
2581 ctgcctctgt cacggacgga agccaacaca gccacctctc gacctggctc cccacagcac
2641 ccaccctccc tgcatgcagc tgtccctgct aacccccaat gttatgttac actgtgtaag
2701 tccccactgc tgccgtgtgt gggttgtgta cgtcgtcatg tccctggttt ataactatgg
2761 tgcgaattct gcagtcgacg gtaccgcggg cccgggatcc accggatcta gataactgat
2821 cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc tcccacacct
2881 ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt ttattgcagc
2941 ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc
3001 actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttaacgcg taaattgtaa
3061 gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc
3121 aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga
3181 gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag
3241 ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt
3301 ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta
3361 gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag
3421 cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg
3481 cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa
3541 cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac
3601 cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtcc tgaggcggaa agaaccagct
3661 gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat
3721 gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc
3781 aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac
3841 tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact
3901 aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta
3961 gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaagat cgatcaagag acaggatgag
4021 gatcgtttcg catgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg
4081 agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt
4141 tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc
4201 tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt
4261 gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag
4321 tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg
4381 ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag
4441 cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg
4501 atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga
4561 gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca
4621 tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc
4681 gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg
4741 ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct
4801 atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc
4861 gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg
4921 cttcggaatc gttttccggg acgccggctg gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct
4981 ggagttcttc gcccacccta gggggaggct aactgaaaca cggaaggaga caataccgga
5041 aggaacccgc gctatgacgg caataaaaag acagaataaa acgcacggtg ttgggtcgtt
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5221 tgaaggccca gggctcgcag ccaacgtcgg ggcggcaggc cctgccatag cctcaggtta
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6061 ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg
6121 tattaccgcc atgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pmCherry-EGFP-LC3b-r哺乳自噬质粒
别称: pmCherry-EGFP-LC3b(rat)
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，自噬表达载体 |
| 质粒大小: | 6136bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | pEGFP-C-5:CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,自噬 |
| 基因种属： | 大鼠 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 绿色,红色 |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6136 bp ds-DNA circular SYN 31-MAR-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pmCherry-GFP-LC3b-R
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6136)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 22, 2016 from SnapGene Viewer 3.2.1
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6136
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="CMV enhancer"
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promoter"
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2002)"
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GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
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indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3534..3638
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promoter 3640..3997
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
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/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 4032..4826
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SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
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polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 5434..6022
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
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481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
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601 accatggcct tctccgagga cgttatcaag gagttcatgc gcttcaaggt gcgcatggag
661 ggctccgtga acggccacga gttcgagatc gagggcgagg gcgagggccg cccctacgag
721 ggcacccaga ccgccaagct gaaggtgacc aagggcggcc ccctgccctt cgcctgggac
781 atcctgtccc ctcagttcca gtacggctcc aaggcctacg tgaagcaccc cgccgacatc
841 cccgactact tgaagctgtc cttccccgag ggcttcaagt gggagcgcgt gatgaacttc
901 gaggacggcg gcgtggtgac cgtgacccag gactcctccc tgcaggacgg cgagttcatc
961 tacaaggtga agctgcgcgg caccaacttc ccctccgacg gccccgtaat gcagaagaag
1021 accatgggct gggaggcctc caccgagcgg atgtaccccg aggacggcgc cctgaagggc
1081 gagatcaaga tgaggctgaa gctgaaggac ggcggccact acgacgccga ggtcaagacc
1141 acctacatgg ccaagaagcc cgtgcagctg cccggcgcct acaagaccga catcaagctg
1201 gacatcacct cccacaacga ggactacacc atcgtggaac agtacgagcg cgccgagggc
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1321 ttcaccgggg tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc
1381 agcgtgtccg gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc
1441 tgcaccaccg gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gacctacggc
1501 gtgcagtgct tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc
1561 atgcccgaag gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag
1621 acccgcgccg aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc
1681 atcgacttca aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacaacagc
1741 cacaacgtct atatcatggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggtgaa cttcaagatc
1801 cgccacaaca tcgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc
1861 atcggcgacg gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccgccctg
1921 agcaaagacc ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc
1981 gggatcactc tcggcatgga cgagctgtac aagtccggac tcagatctag accgtccgag
2041 aagaccttca aacagcgccg gagcttcgaa caaagagtgg aagatgtccg gctcatccgg
2101 gagcagcacc ccaccaagat cccagtgatt atagagcgat acaagggtga gaagcagctg
2161 cccgtcctgg acaagaccaa gttccttgta cctgatcacg tgaatatgag cgaactcatc
2221 aagataatta gaaggcgcct gcagctcaat gctaaccaag ccttcttcct cctggtgaat
2281 gggcacagca tggtgagtgt gtccacaccc atctctgaag tgtacgagag cgagagagat
2341 gaagacggct tcctgtacat ggtctatgcc tcccaggaga cgttcgggac agcactggct
2401 gttacataca tgtcagctct gaaggcaaca gcaacaggaa gagagccatg cttgtgacag
2461 acatacagcc acttccaact aaagcaagcc tctgctccct gctacctgca tggagcccac
2521 tgtgacactc agaccatccc cggtcactca ctcactcgtg tctgagaatc tcagtgagag
2581 ctgcctctgt cacggacgga agccaacaca gccacctctc gacctggctc cccacagcac
2641 ccaccctccc tgcatgcagc tgtccctgct aacccccaat gttatgttac actgtgtaag
2701 tccccactgc tgccgtgtgt gggttgtgta cgtcgtcatg tccctggttt ataactatgg
2761 tgcgaattct gcagtcgacg gtaccgcggg cccgggatcc accggatcta gataactgat
2821 cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc tcccacacct
2881 ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt ttattgcagc
2941 ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc
3001 actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttaacgcg taaattgtaa
3061 gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc
3121 aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga
3181 gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag
3241 ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt
3301 ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta
3361 gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag
3421 cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg
3481 cgcttaatgc gccgctacag ggcgcgtcag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa
3541 cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac
3601 cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtcc tgaggcggaa agaaccagct
3661 gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat
3721 gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc
3781 aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac
3841 tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact
3901 aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctcggcc tctgagctat tccagaagta
3961 gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaagat cgatcaagag acaggatgag
4021 gatcgtttcg catgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg
4081 agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt
4141 tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc
4201 tgaatgaact gcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt
4261 gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag
4321 tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg
4381 ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag
4441 cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg
4501 atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcga
4561 gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca
4621 tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc
4681 gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg
4741 ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct
4801 atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc
4861 gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg
4921 cttcggaatc gttttccggg acgccggctg gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct
4981 ggagttcttc gcccacccta gggggaggct aactgaaaca cggaaggaga caataccgga
5041 aggaacccgc gctatgacgg caataaaaag acagaataaa acgcacggtg ttgggtcgtt
5101 tgttcataaa cgcggggttc ggtcccaggg ctggcactct gtcgataccc caccgagacc
5161 ccattggggc caatacgccc gcgtttcttc cttttcccca ccccaccccc caagttcggg
5221 tgaaggccca gggctcgcag ccaacgtcgg ggcggcaggc cctgccatag cctcaggtta
5281 ctcatatata ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa
5341 gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc
5401 gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat
5461 ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga
5521 gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt
5581 ccttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata
5641 cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac
5701 cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg
5761 ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg
5821 tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag
5881 cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct
5941 ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc
6001 aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt
6061 ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg
6121 tattaccgcc atgcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3262/pENTR223-PRKAG1(1点突变）人源基因质粒 |
| P3263/pENTR223-COPE(2同义突变）人源基因质粒 |
| P3264/pENTR223-RIMS3(1点突变）人源基因质粒 |
| P3265/pENTR223-GPN3(1点突变）人源基因质粒 |
| P3266/pENTR223-DDRGK1人源基因质粒 |
| P3267/pENTR223-FSTL1人源基因质粒 |
| P3268/pENTR223-POLA2人源基因质粒 |
| P3269/pENTR223-DYNC1I1（1同义突变3点突变）人源基因质粒 |
| P3439/pENTR223-RHBDD1人源基因质粒 |
| P3440/pENTR223-PYCR1人源基因质粒 |
| P3441/pENTR223-VAPA人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
水平的高低。LC3 这一转变过程可被 Western Blot 和荧光显微镜检测到，现已成为监测自噬体形成的推荐方法。在哺乳动物中，LC3 包含 3 种亚型：LC3A、LC3B、LC3C，分布在不同的组织中，因此需要用不同的抗体去鉴定这3种亚型。 和元生物能够提供成熟的细胞自噬相关的技术服务 GFP-LC3 单荧光自噬指示体系： 利用 LC3 在自噬形成过程中发生聚集的现象构建了 GFP-LC3 指示体系，无自噬时，GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3 融合
EGFP绿色荧光蛋白 pEGFP-N1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达载体,表达EGFP绿色荧光蛋白 pEGFP-N3 哺乳细胞质粒 Kan pEGFP-C1 哺乳细胞质粒 Kan 真核表达载体,表达EGFP绿色
色质(heterochromatin)，其中从未见有基因转录表达;原本在常染色质中表达的基因如移到异染色质内也会停止表达;哺乳类雌体细胞2条X染色体，到间期一条变成异染色质者，这条X染色体上的基因就全部失活。可见紧密的染色质结构阻止基因表达。 真核细胞表达外源基因技术 1.生化方法 (1)磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞 1)转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～
pmCherry-EGFP-LC3b-r哺乳自噬质粒
￥100 - 1000
