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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pmCherry-LC3a
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pmCherry-LC3a哺乳自噬质粒
别称: pmCherry-LC3a
质粒属性
质粒简介
pmCherry-LC3a是一个哺乳细胞人源基因自噬表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5080 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5080
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
regulatory 607..616
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 613..1320
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/label=mCherry
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
CDS 1342..1704
/codon_start=1
/gene="MAP1LC3A"
/product="human LC3 protein"
/label=LC3a
/note="Atg8 family member found on autophagosomes"
/translation="MPSDRPFKQRRSFADRCKEVQQIRDQHPSKIPVIIERYKGEKQLP
VLDKTKFLVPDHVNMSELVKIIRRRLQLNPTQAFFLLVNQHSMVSVS-TPIADIYEQEKD
EDGFLYMVYASQETFGF"
polyA_signal 1868..1989
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1996..2451)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2478..2582
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2584..2941
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2792..2927
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2976..3770
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4002..4049
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4378..4966
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gaggataaca tggccatcat caaggagttc
661 atgcgcttca aggtgcacat ggagggctcc gtgaacggcc acgagttcga gatcgagggc
721 gagggcgagg gccgccccta cgagggcacc cagaccgcca agctgaaggt gaccaagggt
781 ggccccctgc ccttcgcctg ggacatcctg tcccctcagt tcatgtacgg ctccaaggcc
841 tacgtgaagc accccgccga catccccgac tacttgaagc tgtccttccc cgagggcttc
901 aagtgggagc gcgtgatgaa cttcgaggac ggcggcgtgg tgaccgtgac ccaggactcc
961 tccctgcagg acggcgagtt catctacaag gtgaagctgc gcggcaccaa cttcccctcc
1021 gacggccccg taatgcagaa gaagaccatg ggctgggagg cctcctccga gcggatgtac
1081 cccgaggacg gcgccctgaa gggcgagatc aagcagaggc tgaagctgaa ggacggcggc
1141 cactacgacg ctgaggtcaa gaccacctac aaggccaaga agcccgtgca gctgcccggc
1201 gcctacaacg tcaacatcaa gttggacatc acctcccaca acgaggacta caccatcgtg
1261 gaacagtacg aacgcgccga gggccgccac tccaccggcg gcatggacga gctgtacaag
1321 tccggactca gatctcgagc tatgccctca gaccggcctt tcaagcagcg gcggagcttc
1381 gccgaccgct gtaaggaggt acagcagatc cgcgaccagc accccagcaa aatcccggtg
1441 atcatcgagc gctacaaggg tgagaagcag ctgcccgtcc tggacaagac caagtttttg
1501 gtcccggacc atgtcaacat gagcgagttg gtcaagatca tccggcgccg cctgcagctg
1561 aaccccacgc aggccttctt cctgctggtg aaccagcaca gcatggtgag tgtgtccacg
1621 cccatcgcgg acatctacga gcaggagaaa gacgaggacg gcttcctcta tatggtctac
1681 gcctcccagg aaaccttcgg cttctgagaa ttctgcagtc gacggtaccg cgggcccggg
1741 atccaccgga tctagataac tgatcataat cagccatacc acatttgtag aggttttact
1801 tgctttaaaa aacctcccac acctccccct gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt
1861 tgttgttaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa
1921 tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa
1981 tgtatcttaa cgcgtaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt
2041 gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa
2101 aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa
2161 agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac
2221 gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga
2281 accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa
2341 aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc
2401 tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcaggtggca
2461 cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata
2521 tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga
2581 gtcctgaggc ggaaagaacc agctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
2641 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
2701 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
2761 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
2821 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
2881 ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
2941 agatcgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg
3001 caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa
3061 tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg
3121 tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt
3181 ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa
3241 gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc
3301 ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg
3361 ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg
3421 aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg
3481 aactgttcgc caggctcaag gcgagcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg
3541 gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact
3601 gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg
3661 ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc
3721 ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct
3781 ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac
3841 cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat
3901 cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cctaggggga ggctaactga
3961 aacacggaag gagacaatac cggaaggaac ccgcgctatg acggcaataa aaagacagaa
4021 taaaacgcac ggtgttgggt cgtttgttca taaacgcggg gttcggtccc agggctggca
4081 ctctgtcgat accccaccga gaccccattg gggccaatac gcccgcgttt cttccttttc
4141 cccaccccac cccccaagtt cgggtgaagg cccagggctc gcagccaacg tcggggcggc
4201 aggccctgcc atagcctcag gttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt
4261 ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta
4321 acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg
4381 agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc
4441 ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag
4501 cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa
4561 gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc
4621 cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc
4681 gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta
4741 caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag
4801 aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct
4861 tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga
4921 gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc
4981 ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt
5041 atcccctgat tctgtggata accgtattac cgccatgcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pmCherry-LC3a哺乳自噬质粒
别称: pmCherry-LC3a
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,自噬 |
| 基因种属： | 人 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 红色 |
质粒简介
pmCherry-LC3a是一个哺乳细胞人源基因自噬表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5080 bp ds-DNA circular SYN 20-DEC-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5080
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
regulatory 607..616
/regulatory_class="other"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 613..1320
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(Shaner et al., 2004)"
/label=mCherry
/note="mammalian codon-optimized"
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TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
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GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
CDS 1342..1704
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/gene="MAP1LC3A"
/product="human LC3 protein"
/label=LC3a
/note="Atg8 family member found on autophagosomes"
/translation="MPSDRPFKQRRSFADRCKEVQQIRDQHPSKIPVIIERYKGEKQLP
VLDKTKFLVPDHVNMSELVKIIRRRLQLNPTQAFFLLVNQHSMVSVS-TPIADIYEQEKD
EDGFLYMVYASQETFGF"
polyA_signal 1868..1989
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1996..2451)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2478..2582
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
promoter 2584..2941
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2792..2927
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2976..3770
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
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/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
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GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4002..4049
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4378..4966
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replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
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601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gaggataaca tggccatcat caaggagttc
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721 gagggcgagg gccgccccta cgagggcacc cagaccgcca agctgaaggt gaccaagggt
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901 aagtgggagc gcgtgatgaa cttcgaggac ggcggcgtgg tgaccgtgac ccaggactcc
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1741 atccaccgga tctagataac tgatcataat cagccatacc acatttgtag aggttttact
1801 tgctttaaaa aacctcccac acctccccct gaacctgaaa cataaaatga atgcaattgt
1861 tgttgttaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa
1921 tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa
1981 tgtatcttaa cgcgtaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt
2041 gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa
2101 aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt ccactattaa
2161 agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat ggcccactac
2221 gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca ctaaatcgga
2281 accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac gtggcgagaa
2341 aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta gcggtcacgc
2401 tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg tcaggtggca
2461 cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata
2521 tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga
2581 gtcctgaggc ggaaagaacc agctgtggaa tgtgtgtcag ttagggtgtg gaaagtcccc
2641 aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccaggtg
2701 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
2761 agcaaccata gtcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc ccagttccgc
2821 ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg aggccgcctc
2881 ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag gcttttgcaa
2941 agatcgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg
3001 caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa
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3121 tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcaaga cgaggcagcg cggctatcgt
3181 ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa
3241 gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc
3301 ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg
3361 ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg
3421 aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg
3481 aactgttcgc caggctcaag gcgagcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg
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3721 ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct
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3901 cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cctaggggga ggctaactga
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5041 atcccctgat tctgtggata accgtattac cgccatgcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3228/pENTR223-RNF5人源基因质粒 |
| P3229/pENTR223-AIF1L人源基因质粒 |
| P3230/pENTR223-S100A4人源基因质粒 |
| P3231/pENTR223-LSM3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3232/pENTR223-ALG8-A1507G人源基因质粒 |
| P3233/pENTR223-IL32（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3234/pENTR223-MRTO4（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3235/pENTR223-STK32C（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3236/pENTR223-S1PR1人源基因质粒 |
| P3237/pENTR223-ELAVL3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3238/pENTR223-PEX11G人源基因质粒 |
| P3239/pENTR223-GKAP1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
水平的高低。LC3 这一转变过程可被 Western Blot 和荧光显微镜检测到，现已成为监测自噬体形成的推荐方法。在哺乳动物中，LC3 包含 3 种亚型：LC3A、LC3B、LC3C，分布在不同的组织中，因此需要用不同的抗体去鉴定这3种亚型。 和元生物能够提供成熟的细胞自噬相关的技术服务 GFP-LC3 单荧光自噬指示体系： 利用 LC3 在自噬形成过程中发生聚集的现象构建了 GFP-LC3 指示体系，无自噬时，GFP-LC3 融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，GFP-LC3 融合
CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来质粒或噬菌体等遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研究及药物研发等方面发挥重要的功能。 CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选流程
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