pBiFC-bFOSDelataZip-VC155双分荧光质

基本信息
名称：pBiFC-bFOSDelataZip-VC155双分荧光质粒
别称: pBiFC-bFOSDelataZip-VC155

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，双分子荧光互补载体
质粒大小:	4307bp
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	双分子荧光
基因种属：	空载体
基因类型：	BIFC
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4307 bp ds-DNA     circular SYN 21-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled 2
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4307)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Wednesday, September 21, 2016 from SnapGene Viewer 3.2.1
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4307
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        27..330
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        331..534
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     intron          672..768
                     /note="SV40 intron"
                     /note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor 
                     sites"
     CDS             832..858
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /note="HA"
                     /translation="YPYDVPDYA"
     polyA_signal    1446..1580
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     primer_bind     complement(1691..1707)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     protein_bind    1715..1731
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(1739..1769)
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    1784..1805
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(2093..2681)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2852..3712)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(3713..3817)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     primer_bind     4291..4307
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
ORIGIN
        1 gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc
       61 tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg
      121 ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg
      181 gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa
      241 tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac
      301 atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg
      361 cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg
      421 agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca
      481 ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctcgttta
      541 gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt ttgacctcca tagaagacac
      601 cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac tagaggaact gaaaaaccag
      661 aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg
      721 gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa
      781 gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg ggcccaccat gtacccatac
      841 gatgttccag attacgctct tatggccatg gaggcccgaa ttcggggtcg tgcgcagtcc
      901 atcggtcgtc gcggtaaagt tgaacaactg tccccggaag aggaagagaa acgtcgcatc
      961 cgccgtgaac gtaacaaaat ggcggcagcg aaatgccgta accgccgtcg tgaactgacc
     1021 gacaccctgc aggcggaaac cgaccagctg gaagacgaaa aatccgcgga gttcatcctg
     1081 gcggcacacc gtccggcgtg caaaatcccg aacgacctgg gtggtacccg tccggcgtgc
     1141 aaaatcccga acgacctgaa acagaaagtc atgaaccacg acaagcagaa gaacggcatc
     1201 aaggccaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggcg gcgtgcagct cgccgaccac
     1261 taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc tgcccgacaa ccactacctg
     1321 agctaccagt ccaaactgag caaagacccc aacgagaagc gcgatcacat ggtcctgctg
     1381 gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg agctgtacaa gtaagcggcc
     1441 gcggggatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca actagaatgc
     1501 agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt gtaaccatta
     1561 taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg
     1621 gggaggtgtg ggaggttttt tcggatcctc tagagtcgat ctgcaggcat gctagcttgg
     1681 cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca attccacaca
     1741 acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca
     1801 cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc
     1861 attaatgaat cggccaacgc gcggggagag gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt
     1921 cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact
     1981 caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag
     2041 caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata
     2101 ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc
     2161 cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg
     2221 ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc
     2281 tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg
     2341 gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc
     2401 ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact ggtaacagga
     2461 ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg
     2521 gctacactag aaggacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa
     2581 aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg
     2641 tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct ttgatctttt
     2701 ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg gtcatgagat
     2761 tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct
     2821 aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta
     2881 tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa
     2941 ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac
     3001 gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa
     3061 gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag
     3121 taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg
     3181 tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag
     3241 ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg
     3301 tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg cataattctc
     3361 ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat
     3421 tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata
     3481 ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa
     3541 aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca
     3601 actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc
     3661 aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc
     3721 tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg
     3781 aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac
     3841 ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga
     3901 ggccctttcg tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc
     3961 cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg
     4021 cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg
     4081 tactgagagt gcaccatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc
     4141 gcatcaggcg ccattcgcca ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcga tcggtgcggg
     4201 cctcttcgct attacgccag ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg
     4261 taacgccagg gttttcccag tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagt
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2723/pENTR223-STX18-T985C人源基因质粒

P2724/pENTR223-GIMAP2人源基因质粒

P2725/pENTR223-BTN2A1人源基因质粒

P2726/pENTR223-PROCA1人源基因质粒

P2727/pENTR223-CNMD人源基因质粒

P2728/pENTR223-RNF2人源基因质粒

P2729/pENTR223-MRPL38-A1130C（103-1143bp点突变）人源基因质粒

P2730/pENTR223-LRRC39（3点突变）人源基因质粒

P2731/pENTR223-C11orf49人源基因质粒

P2732/pENTR223-ANTXR1人源基因质粒