pBiFC-VC155双分荧光质粒

基本信息
名称：pBiFC-VC155双分荧光质粒
别称: pBiFC-VC155

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，双分子荧光互补载体
质粒大小:	4088bp
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	双分子荧光
基因种属：	空载体
基因类型：	BIFC
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4088 bp ds-DNA     circular SYN 29-JUN-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pBiFC-VC155
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4088)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sunday, September 4, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
            http://www.maiolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4088
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     CDS             4..30
                     /codon_start=1
                     /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                     /note="HA"
                     /translation="YPYDVPDYA"
     misc_feature    82..384
                     /note="VC155"
     polyA_signal    399..533
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     primer_bind     complement(644..660)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     protein_bind    668..684
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(692..722)
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    737..758
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(1046..1634)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(1805..2665)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2666..2770)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     primer_bind     3244..3260
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     enhancer        3287..3590
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        3591..3794
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     intron          3932..4028
                     /note="SV40 intron"
                     /note="modified SV40 intron with splice donor and acceptor 
                     sites"
ORIGIN
        1 atgtacccat acgatgttcc agattacgct cttatggcca tggaggcccg aattcggtcg
       61 accgagatct ctcgaggtac ccgtccggcg tgcaaaatcc cgaacgacct gaaacagaaa
      121 gtcatgaacc acgacaagca gaagaacggc atcaaggcca acttcaagat ccgccacaac
      181 atcgaggacg gcggcgtgca gctcgccgac cactaccagc agaacacccc catcggcgac
      241 ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac ctgagctacc agtccaaact gagcaaagac
      301 cccaacgaga agcgcgatca catggtcctg ctggagttcg tgaccgccgc cgggatcact
      361 ctcggcatgg acgagctgta caagtaagcg gccgcgggga tccagacatg ataagataca
      421 ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa
      481 tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg caataaacaa gttaacaaca
      541 acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt gtgggaggtt ttttcggatc
      601 ctctagagtc gatctgcagg catgctagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg
      661 tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta
      721 aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
      781 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
      841 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
      901 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
      961 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
     1021 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
     1081 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
     1141 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
     1201 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc
     1261 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
     1321 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
     1381 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
     1441 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta
     1501 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
     1561 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
     1621 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
     1681 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
     1741 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
     1801 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
     1861 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
     1921 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
     1981 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
     2041 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
     2101 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
     2161 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
     2221 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
     2281 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
     2341 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
     2401 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
     2461 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
     2521 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
     2581 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
     2641 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
     2701 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
     2761 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca
     2821 tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg cgtttcggtg
     2881 atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag
     2941 cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg
     3001 gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg
     3061 aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgccattcg ccattcaggc
     3121 tgcgcaactg ttgggaaggg cgatcggtgc gggcctcttc gctattacgc cagctggcga
     3181 aagggggatg tgctgcaagg cgattaagtt gggtaacgcc agggttttcc cagtcacgac
     3241 gttgtaaaac gacggccagt gagttcgagc ttgcatgcct gcaggtcgtt acataactta
     3301 cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg cccattgacg tcaataatga
     3361 cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt
     3421 tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta
     3481 ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc ccagtacatg accttatggg
     3541 actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc tattaccatg gtgatgcggt
     3601 tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc acggggattt ccaagtctcc
     3661 accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa tcaacgggac tttccaaaat
     3721 gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag gcgtgtacgg tgggaggtct
     3781 atataagcag agctcgttta gtgaaccgtc agatcgcctg gagacgccat ccacgctgtt
     3841 ttgacctcca tagaagacac cgggaccgat ccagcctccg gactctagag gatccggtac
     3901 tagaggaact gaaaaaccag aaagttaact ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc
     3961 aggtcccgga tccggtggtg gtgcaaatca aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt
     4021 acttctaggc ctgtacggaa gtgttacttc tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgcg
     4081 ggcccacc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4001/pCMV-SPORT6-VAT1人源基因质粒

P4002/pCMV-SPORT6-NR4A1人源基因质粒

P4003/pCMV-SPORT6-KIAA0020人源基因质粒

P4004/pCMV-SPORT6-KRCC1人源基因质粒

P4005/pCMV-SPORT6-RPS2人源基因质粒

P4006/pCMV-SPORT6-LCMT2人源基因质粒

P4007/pCMV-SPORT6-LRRC40人源基因质粒

P4008/pCMV-SPORT6-RPSA人源基因质粒

P4009/pCMV-SPORT6-MKRN2（1同义突变）人源基因质粒

P4010/pCMV-SPORT6-UCN2人源基因质粒

P4011/pCMV-SPORT6-MOB3A人源基因质粒

P4012/pCMV-SPORT6-MAP7D1（827-2523bp）人源基因质粒