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- 上海
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMIR-Report β-gal Control
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pMIR-REPORT β-gal Control哺乳报告质粒
别称: pMIR-Report β-gal Control
质粒属性
质粒简介
pMIR-REPORT β-gal Control质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7891 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7891
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 12..328
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 425..1024
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/label=PuroR
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_signal 1254..1335
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
promoter 1423..1527
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 1528..2388
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2559..3147
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
enhancer 3739..4042
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4043..4246
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 4369..7416
/codon_start=1
/gene="lacZ"
/product="beta-galactosidase"
/label=-beta-gal
/translation="VVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRS
LNGEWRFAWFPAPEAVPESWLECDLPEADTVVVPSNWQMHGYDAPIYTNVTYPITVNPP
FVPTENPTGCYSLTFNVDESWLQEGQTRIIFDGVNSAFHLWCNGRWVGYGQDSRLPSEF
DLSAFLRAGENRLAVMVLRWSDGSYLEDQDMWRMSGIFRDVSLLHKPTTQISDFHVATR
FNDDFSRAVLEAEVQMCGELRDYLRVTVSLWQGETQVASGTAPFGGEIIDERGGYADRV
TLRLNVENPKLWSAEIPNLYRAVVELHTADGTLIEAEACDVGFREVRIENGLLLLNGKP
LLIRGVNRHEHHPLHGQVMDEQTMVQDILLMKQNNFNAVRCSHYPNHPLWYTLCDRYGL
YVVDEANIETHGMVPMNRLTDDPRWLPAMSERVTRMVQRDRNHPSVIIWSLGNESGHGA
NHDALYRWIKSVDPSRPVQYEGGGADTTATDIICPMYARVDEDQPFPAVPKWSIKKWLS
LPGETRPLILCEYAHAMGNSLGGFAKYWQAFRQYPRLQGGFVWDWVDQSLIKYDENGNP
WSAYGGDFGDTPNDRQFCMNGLVFADRTPH-PALTEAKHQQQFFQFRLSGQTIEVTSEYL
FRHSDNELLHWMVALDGKPLASGEVPLDVAPQGKQLIELPELPQPESAGQLWLTVRVVQ
PNATAWSEAGHISAWQQWRLAENLSVTLPAASHAIPHLTTSEMDFCIELGNKRWQFNRQ
SGFLSQMWIGDKKQLLTPLRDQFTRAPLDNDIGVSEATRIDPNAWVERWKAAGHYQAEA
ALLQCTADTLADAVLITTAHAWQHQGKTLFISRKTYRIDGSGQMAITVDVEVASDTP-HP
ARIGLNCQLAQVAERVNWLGLGPQENYPDRLTAACFDRWDLPL-SDMYTPYVFPSENGLR
CGTRELNYGPHQWRGDFQFNISRYSQQQLMETSHRHLLHAEEGTWLNIDGFHMGIGGDD
SWSPSVSAELQLSAGRYHYQLVWCQK"
ORIGIN
1 gacgaaagat tggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
61 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
121 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
181 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
241 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
301 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctagcttgc atgcctgcag gtcggccgcc
361 acgaccggtg ccgccaccat cccctgaccc acgcccctga cccctcacaa ggagacgacc
421 ttccatgacc gagtacaagc ccacggtgcg cctcgccacc cgcgacgacg tcccccgggc
481 cgtacgcacc ctcgccgccg cgttcgccga ctaccccgcc acgcgccaca ccgtcgaccc
541 ggaccgccac atcgagcggg tcaccgagct gcaagaactc ttcctcacgc gcgtcgggct
601 cgacatcggc aaggtgtggg tcgcggacga cggcgccgcg gtggcggtct ggaccacgcc
661 ggagagcgtc gaagcggggg cggtgttcgc cgagatcggc ccgcgcatgg ccgagttgag
721 cggttcccgg ctggccgcgc agcaacagat ggaaggcctc ctggcgccgc accggcccaa
781 ggagcccgcg tggttcctgg ccaccgtcgg cgtctcgccc gaccaccagg gcaagggtct
841 gggcagcgcc gtcgtgctcc ccggagtgga ggcggccgag cgcgccgggg tgcccgcctt
901 cctggagacc tccgcgcccc gcaacctccc cttctacgag cggctcggct tcaccgtcac
961 cgccgacgtc gaggtgcccg aaggaccgcg cacctggtgc atgacccgca agcccggtgc
1021 ctgacgcccg ccccacgacc cgcagcgccc gaccgaaagg agcgcacgac cccatggctc
1081 cgaccgaagc cacccggggc ggccccgccg accccgcacc cgcccccgag gcccaccgac
1141 tctagaggat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc
1201 tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt
1261 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag
1321 catttttttc actgcaatct cgtgatacgc ctatttttat aggttaatgt catgataata
1381 atggtttctt agacgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt
1441 ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg
1501 cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt
1561 cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta
1621 aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc
1681 ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa
1741 gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc
1801 cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt
1861 acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact
1921 gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac
1981 aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata
2041 ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta
2101 ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg
2161 gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat
2221 aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt
2281 aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga
2341 aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa
2401 gtttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag
2461 gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac
2521 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc
2581 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttt tttgccggat
2641 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat
2701 actgttcttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct
2761 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt
2821 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg
2881 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta
2941 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg
3001 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg
3061 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc
3121 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg
3181 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat
3241 aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc
3301 agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg
3361 cgttggccga ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt
3421 gagcgcaacg caattaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt
3481 atgcttccgg ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac
3541 agctatgaca tgattacgaa ttgcaacgat ttaggtgaca ctatagaaga gaaggaatta
3601 atacgactca ctatagggag agagagagaa ttaccctcac taaagggagg agaagcatga
3661 attcaaggta ccagatctta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag
3721 cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc
3781 caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg
3841 gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca
3901 tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc
3961 ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt
4021 attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata
4081 gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt
4141 ttggcaccaa aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca
4201 aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc agagctggtt tagtgaaccg
4261 tggatcctca ccatgtcgtt tactttgacc aacaagaacg tgattttcgt tgccggtctg
4321 ggaggcattg gtctggacac cagcaaggag ctgctcaagc gcgatcccgt cgttttacaa
4381 cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct
4441 ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc
4501 agcctgaatg gcgaatggcg ctttgcctgg tttccggcac cagaagcggt gccggaaagc
4561 tggctggagt gcgatcttcc tgaggccgat actgtcgtcg tcccctcaaa ctggcagatg
4621 cacggttacg atgcgcccat ctacaccaac gtgacctatc ccattacggt caatccgccg
4681 tttgttccca cggagaatcc gacgggttgt tactcgctca catttaatgt tgatgaaagc
4741 tggctacagg aaggccagac gcgaattatt tttgatggcg ttaactcggc gtttcatctg
4801 tggtgcaacg ggcgctgggt cggttacggc caggacagtc gtttgccgtc tgaatttgac
4861 ctgagcgcat ttttacgcgc cggagaaaac cgcctcgcgg tgatggtgct gcgctggagt
4921 gacggcagtt atctggaaga tcaggatatg tggcggatga gcggcatttt ccgtgacgtc
4981 tcgttgctgc ataaaccgac tacacaaatc agcgatttcc atgttgccac tcgctttaat
5041 gatgatttca gccgcgctgt actggaggct gaagttcaga tgtgcggcga gttgcgtgac
5101 tacctacggg taacagtttc tttatggcag ggtgaaacgc aggtcgccag cggcaccgcg
5161 cctttcggcg gtgaaattat cgatgagcgt ggtggttatg ccgatcgcgt cacactacgt
5221 ctgaacgtcg aaaacccgaa actgtggagc gccgaaatcc cgaatctcta tcgtgcggtg
5281 gttgaactgc acaccgccga cggcacgctg attgaagcag aagcctgcga tgtcggtttc
5341 cgcgaggtgc ggattgaaaa tggtctgctg ctgctgaacg gcaagccgtt gctgattcga
5401 ggcgttaacc gtcacgagca tcatcctctg catggtcagg tcatggatga gcagacgatg
5461 gtgcaggata tcctgctgat gaagcagaac aactttaacg ccgtgcgctg ttcgcattat
5521 ccgaaccatc cgctgtggta cacgctgtgc gaccgctacg gcctgtatgt ggtggatgaa
5581 gccaatattg aaacccacgg catggtgcca atgaatcgtc tgaccgatga tccgcgctgg
5641 ctaccggcga tgagcgaacg cgtaacgcga atggtgcagc gcgatcgtaa tcacccgagt
5701 gtgatcatct ggtcgctggg gaatgaatca ggccacggcg ctaatcacga cgcgctgtat
5761 cgctggatca aatctgtcga tccttcccgc ccggtgcagt atgaaggcgg cggagccgac
5821 accacggcca ccgatattat ttgcccgatg tacgcgcgcg tggatgaaga ccagcccttc
5881 ccggctgtgc cgaaatggtc catcaaaaaa tggctttcgc tacctggaga gacgcgcccg
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6001 tggcaggcgt ttcgtcagta tccccgttta cagggcggct tcgtctggga ctgggtggat
6061 cagtcgctga ttaaatatga tgaaaacggc aacccgtggt cggcttacgg cggtgatttt
6121 ggcgatacgc cgaacgatcg ccagttctgt atgaacggtc tggtctttgc cgaccgcacg
6181 ccgcatccag cgctgacgga agcaaaacac cagcagcagt ttttccagtt ccgtttatcc
6241 gggcaaacca tcgaagtgac cagcgaatac ctgttccgtc atagcgataa cgagctcctg
6301 cactggatgg tggcgctgga tggtaagccg ctggcaagcg gtgaagtgcc tctggatgtc
6361 gctccacaag gtaaacagtt gattgaactg cctgaactac cgcagccgga gagcgccggg
6421 caactctggc tcacagtacg cgtagtgcaa ccgaacgcga ccgcatggtc agaagccggg
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6541 gcgtcccacg ccatcccgca tctgaccacc agcgaaatgg atttttgcat cgagctgggt
6601 aataagcgtt ggcaatttaa ccgccagtca ggctttcttt cacagatgtg gattggcgat
6661 aaaaaacaac tgctgacgcc gctgcgcgat cagttcaccc gtgcaccgct ggataacgac
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6781 gcgggccatt accaggccga agcagcgttg ttgcagtgca cggcagatac acttgctgat
6841 gcggtgctga ttacgaccgc tcacgcgtgg cagcatcagg ggaaaacctt atttatcagc
6901 cggaaaacct accggattga tggtagtggt caaatggcga ttaccgttga tgttgaagtg
6961 gcgagcgata caccgcatcc ggcgcggatt ggcctgaact gccagctggc gcaggtagca
7021 gagcgggtaa actggctcgg attagggccg caagaaaact atcccgaccg ccttactgcc
7081 gcctgttttg accgctggga tctgccattg tcagacatgt ataccccgta cgtcttcccg
7141 agcgaaaacg gtctgcgctg cgggacgcgc gaattgaatt atggcccaca ccagtggcgc
7201 ggcgacttcc agttcaacat cagccgctac agtcaacagc aactgatgga aaccagccat
7261 cgccatctgc tgcacgcgga agaaggcaca tggctgaata tcgacggttt ccatatgggg
7321 attggtggcg acgactcctg gagcccgtca gtatcggcgg aattacagct gagcgccggt
7381 cgctaccatt accagttggt ctggtgtcaa aaataataat aaccaagctt aataaaggat
7441 cttttatttt cattggatct gtgtgttggt tttttgtatg cggccgctag cttggcactg
7501 gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt
7561 gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct
7621 tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tggcgcctga tgcggtattt tctccttacg
7681 catctgtgcg gtatttcaca ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc
7741 gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt
7801 ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag
7861 aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg a
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMIR-REPORT β-gal Control哺乳报告质粒
别称: pMIR-Report β-gal Control
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 信号报告 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | miRNA,UTR |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： | fLuc |
质粒简介
pMIR-REPORT β-gal Control质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7891 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7891
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 12..328
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/note="SV40 enhancer and early promoter"
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APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_signal 1254..1335
/label=SV40 poly(A) signal
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promoter 1423..1527
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 1528..2388
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/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
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/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
enhancer 3739..4042
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4043..4246
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 4369..7416
/codon_start=1
/gene="lacZ"
/product="beta-galactosidase"
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NHDALYRWIKSVDPSRPVQYEGGGADTTATDIICPMYARVDEDQPFPAVPKWSIKKWLS
LPGETRPLILCEYAHAMGNSLGGFAKYWQAFRQYPRLQGGFVWDWVDQSLIKYDENGNP
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ORIGIN
1 gacgaaagat tggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
61 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
121 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
181 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
241 tatttatgca gaggccgagg ccgcctcggc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
301 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctagcttgc atgcctgcag gtcggccgcc
361 acgaccggtg ccgccaccat cccctgaccc acgcccctga cccctcacaa ggagacgacc
421 ttccatgacc gagtacaagc ccacggtgcg cctcgccacc cgcgacgacg tcccccgggc
481 cgtacgcacc ctcgccgccg cgttcgccga ctaccccgcc acgcgccaca ccgtcgaccc
541 ggaccgccac atcgagcggg tcaccgagct gcaagaactc ttcctcacgc gcgtcgggct
601 cgacatcggc aaggtgtggg tcgcggacga cggcgccgcg gtggcggtct ggaccacgcc
661 ggagagcgtc gaagcggggg cggtgttcgc cgagatcggc ccgcgcatgg ccgagttgag
721 cggttcccgg ctggccgcgc agcaacagat ggaaggcctc ctggcgccgc accggcccaa
781 ggagcccgcg tggttcctgg ccaccgtcgg cgtctcgccc gaccaccagg gcaagggtct
841 gggcagcgcc gtcgtgctcc ccggagtgga ggcggccgag cgcgccgggg tgcccgcctt
901 cctggagacc tccgcgcccc gcaacctccc cttctacgag cggctcggct tcaccgtcac
961 cgccgacgtc gaggtgcccg aaggaccgcg cacctggtgc atgacccgca agcccggtgc
1021 ctgacgcccg ccccacgacc cgcagcgccc gaccgaaagg agcgcacgac cccatggctc
1081 cgaccgaagc cacccggggc ggccccgccg accccgcacc cgcccccgag gcccaccgac
1141 tctagaggat cataatcagc cataccacat ttgtagaggt tttacttgct ttaaaaaacc
1201 tcccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt
1261 ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag
1321 catttttttc actgcaatct cgtgatacgc ctatttttat aggttaatgt catgataata
1381 atggtttctt agacgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt
1441 ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg
1501 cttcaataat attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt
1561 cccttttttg cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta
1621 aaagatgctg aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc
1681 ggtaagatcc ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa
1741 gttctgctat gtggcgcggt attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc
1801 cgcatacact attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt
1861 acggatggca tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact
1921 gcggccaact tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac
1981 aacatggggg atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata
2041 ccaaacgacg agcgtgacac cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta
2101 ttaactggcg aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg
2161 gataaagttg caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat
2221 aaatctggag ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt
2281 aagccctccc gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga
2341 aatagacaga tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa
2401 gtttactcat atatacttta gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag
2461 gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac
2521 tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc
2581 gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttt tttgccggat
2641 caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat
2701 actgttcttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct
2761 acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt
2821 cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg
2881 gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta
2941 cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg
3001 gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg
3061 tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc
3121 tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg
3181 gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat
3241 aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc
3301 agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg
3361 cgttggccga ttcattaatg cagctggcac gacaggtttc ccgactggaa agcgggcagt
3421 gagcgcaacg caattaatgt gagttagctc actcattagg caccccaggc tttacacttt
3481 atgcttccgg ctcgtatgtt gtgtggaatt gtgagcggat aacaatttca cacaggaaac
3541 agctatgaca tgattacgaa ttgcaacgat ttaggtgaca ctatagaaga gaaggaatta
3601 atacgactca ctatagggag agagagagaa ttaccctcac taaagggagg agaagcatga
3661 attcaaggta ccagatctta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag
3721 cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc
3781 caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgccaatagg
3841 gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca
3901 tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc
3961 ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt
4021 attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata
4081 gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt
4141 ttggcaccaa aatcaacggg actttccaaa atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca
4201 aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt ctatataagc agagctggtt tagtgaaccg
4261 tggatcctca ccatgtcgtt tactttgacc aacaagaacg tgattttcgt tgccggtctg
4321 ggaggcattg gtctggacac cagcaaggag ctgctcaagc gcgatcccgt cgttttacaa
4381 cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct
4441 ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc
4501 agcctgaatg gcgaatggcg ctttgcctgg tttccggcac cagaagcggt gccggaaagc
4561 tggctggagt gcgatcttcc tgaggccgat actgtcgtcg tcccctcaaa ctggcagatg
4621 cacggttacg atgcgcccat ctacaccaac gtgacctatc ccattacggt caatccgccg
4681 tttgttccca cggagaatcc gacgggttgt tactcgctca catttaatgt tgatgaaagc
4741 tggctacagg aaggccagac gcgaattatt tttgatggcg ttaactcggc gtttcatctg
4801 tggtgcaacg ggcgctgggt cggttacggc caggacagtc gtttgccgtc tgaatttgac
4861 ctgagcgcat ttttacgcgc cggagaaaac cgcctcgcgg tgatggtgct gcgctggagt
4921 gacggcagtt atctggaaga tcaggatatg tggcggatga gcggcatttt ccgtgacgtc
4981 tcgttgctgc ataaaccgac tacacaaatc agcgatttcc atgttgccac tcgctttaat
5041 gatgatttca gccgcgctgt actggaggct gaagttcaga tgtgcggcga gttgcgtgac
5101 tacctacggg taacagtttc tttatggcag ggtgaaacgc aggtcgccag cggcaccgcg
5161 cctttcggcg gtgaaattat cgatgagcgt ggtggttatg ccgatcgcgt cacactacgt
5221 ctgaacgtcg aaaacccgaa actgtggagc gccgaaatcc cgaatctcta tcgtgcggtg
5281 gttgaactgc acaccgccga cggcacgctg attgaagcag aagcctgcga tgtcggtttc
5341 cgcgaggtgc ggattgaaaa tggtctgctg ctgctgaacg gcaagccgtt gctgattcga
5401 ggcgttaacc gtcacgagca tcatcctctg catggtcagg tcatggatga gcagacgatg
5461 gtgcaggata tcctgctgat gaagcagaac aactttaacg ccgtgcgctg ttcgcattat
5521 ccgaaccatc cgctgtggta cacgctgtgc gaccgctacg gcctgtatgt ggtggatgaa
5581 gccaatattg aaacccacgg catggtgcca atgaatcgtc tgaccgatga tccgcgctgg
5641 ctaccggcga tgagcgaacg cgtaacgcga atggtgcagc gcgatcgtaa tcacccgagt
5701 gtgatcatct ggtcgctggg gaatgaatca ggccacggcg ctaatcacga cgcgctgtat
5761 cgctggatca aatctgtcga tccttcccgc ccggtgcagt atgaaggcgg cggagccgac
5821 accacggcca ccgatattat ttgcccgatg tacgcgcgcg tggatgaaga ccagcccttc
5881 ccggctgtgc cgaaatggtc catcaaaaaa tggctttcgc tacctggaga gacgcgcccg
5941 ctgatccttt gcgaatacgc ccacgcgatg ggtaacagtc ttggcggttt cgctaaatac
6001 tggcaggcgt ttcgtcagta tccccgttta cagggcggct tcgtctggga ctgggtggat
6061 cagtcgctga ttaaatatga tgaaaacggc aacccgtggt cggcttacgg cggtgatttt
6121 ggcgatacgc cgaacgatcg ccagttctgt atgaacggtc tggtctttgc cgaccgcacg
6181 ccgcatccag cgctgacgga agcaaaacac cagcagcagt ttttccagtt ccgtttatcc
6241 gggcaaacca tcgaagtgac cagcgaatac ctgttccgtc atagcgataa cgagctcctg
6301 cactggatgg tggcgctgga tggtaagccg ctggcaagcg gtgaagtgcc tctggatgtc
6361 gctccacaag gtaaacagtt gattgaactg cctgaactac cgcagccgga gagcgccggg
6421 caactctggc tcacagtacg cgtagtgcaa ccgaacgcga ccgcatggtc agaagccggg
6481 cacatcagcg cctggcagca gtggcgtctg gcggaaaacc tcagtgtgac gctccccgcc
6541 gcgtcccacg ccatcccgca tctgaccacc agcgaaatgg atttttgcat cgagctgggt
6601 aataagcgtt ggcaatttaa ccgccagtca ggctttcttt cacagatgtg gattggcgat
6661 aaaaaacaac tgctgacgcc gctgcgcgat cagttcaccc gtgcaccgct ggataacgac
6721 attggcgtaa gtgaagcgac ccgcattgac cctaacgcct gggtcgaacg ctggaaggcg
6781 gcgggccatt accaggccga agcagcgttg ttgcagtgca cggcagatac acttgctgat
6841 gcggtgctga ttacgaccgc tcacgcgtgg cagcatcagg ggaaaacctt atttatcagc
6901 cggaaaacct accggattga tggtagtggt caaatggcga ttaccgttga tgttgaagtg
6961 gcgagcgata caccgcatcc ggcgcggatt ggcctgaact gccagctggc gcaggtagca
7021 gagcgggtaa actggctcgg attagggccg caagaaaact atcccgaccg ccttactgcc
7081 gcctgttttg accgctggga tctgccattg tcagacatgt ataccccgta cgtcttcccg
7141 agcgaaaacg gtctgcgctg cgggacgcgc gaattgaatt atggcccaca ccagtggcgc
7201 ggcgacttcc agttcaacat cagccgctac agtcaacagc aactgatgga aaccagccat
7261 cgccatctgc tgcacgcgga agaaggcaca tggctgaata tcgacggttt ccatatgggg
7321 attggtggcg acgactcctg gagcccgtca gtatcggcgg aattacagct gagcgccggt
7381 cgctaccatt accagttggt ctggtgtcaa aaataataat aaccaagctt aataaaggat
7441 cttttatttt cattggatct gtgtgttggt tttttgtatg cggccgctag cttggcactg
7501 gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt
7561 gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct
7621 tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tggcgcctga tgcggtattt tctccttacg
7681 catctgtgcg gtatttcaca ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc
7741 gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt
7801 ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag
7861 aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg a
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3375/pCMV-SPORT6-NDUFS2人源基因质粒 |
| P3376/pCMV-SPORT6-AP1M2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3377/pCMV-SPORT6-OCIAD1人源基因质粒 |
| P3378/pCMV-SPORT6-PIGG人源基因质粒 |
| P3379/pCMV-SPORT6-IQCG人源基因质粒 |
| P3380/pCMV-SPORT6-ZNF416人源基因质粒 |
| P3381/pCMV-SPORT6-Hsp40（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3382/pCMV-SPORT6-KRT18人源基因质粒 |
| P3383/pCMV-SPORT6-PRPF18（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3384/pCMV-SPORT6-SEC22A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
。 A3： 1. 内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指持家基因(Housekeeping Genes)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。 2. RT-PCR比较不同条件下或者不同组织中，目的基因表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行
Whole Mount X-gal Histochemistry of Transgenic Animal Tissues
, from 0.5 M stock stored at room temperature in the dark 1 mg/ml X-gal, from 25 mg/ml stock in dimethylformamide (DMF), stored at -20oC I almost always prepare it fresh from stock solutions. Notes I typically transfer
在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ，通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不够便利。因为各自的测试化学，处理要求，检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术，结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统，结合pRL载体系统，表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶，在单管中进行双荧光素酶报告基因测试，快速，灵敏，简便。系统还提供PLB裂解液，用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞，不需操作单个样品
pMIR-REPORT β-gal Control哺乳报告质粒
￥100 - 1000
