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- 上海
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2年
- 英文名：
pGL4.10[luc2]
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGL4.10[luc2]哺乳报告质粒
别称: pGL4.10[luc2]
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4242 bp ds-DNA circular SYN 28-JUN-2013
DEFINITION Promoterless vector for measuring the activity of promoter and
enhancer sequences with a luciferase assay.
ACCESSION AY738222
VERSION .
KEYWORDS pGL4.10[luc2]
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4242)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, September 3, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4242
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 1..70
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
CDS 100..1752
/codon_start=1
/product="firefly luciferase"
/note="luciferase"
/note="synthetic luc2 version of the luciferase gene"
/translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
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IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
polyA_signal 1796..1917
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2336..2924)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3124..3984)
/codon_start=1
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
polyA_signal 4089..4137
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 4151..4242
/note="pause site"
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcaagatc tggcctcggc
61 ggccaagctt ggcaatccgg tactgttggt aaagccacca tggaagatgc caaaaacatt
121 aagaagggcc cagcgccatt ctacccactc gaagacggga ccgccggcga gcagctgcac
181 aaagccatga agcgctacgc cctggtgccc ggcaccatcg cctttaccga cgcacatatc
241 gaggtggaca ttacctacgc cgagtacttc gagatgagcg ttcggctggc agaagctatg
301 aagcgctatg ggctgaatac aaaccatcgg atcgtggtgt gcagcgagaa tagcttgcag
361 ttcttcatgc ccgtgttggg tgccctgttc atcggtgtgg ctgtggcccc agctaacgac
421 atctacaacg agcgcgagct gctgaacagc atgggcatca gccagcccac cgtcgtattc
481 gtgagcaaga aagggctgca aaagatcctc aacgtgcaaa agaagctacc gatcatacaa
541 aagatcatca tcatggatag caagaccgac taccagggct tccaaagcat gtacaccttc
601 gtgacttccc atttgccacc cggcttcaac gagtacgact tcgtgcccga gagcttcgac
661 cgggacaaaa ccatcgccct gatcatgaac agtagtggca gtaccggatt gcccaagggc
721 gtagccctac cgcaccgcac cgcttgtgtc cgattcagtc atgcccgcga ccccatcttc
781 ggcaaccaga tcatccccga caccgctatc ctcagcgtgg tgccatttca ccacggcttc
841 ggcatgttca ccacgctggg ctacttgatc tgcggctttc gggtcgtgct catgtaccgc
901 ttcgaggagg agctattctt gcgcagcttg caagactata agattcaatc tgccctgctg
961 gtgcccacac tatttagctt cttcgctaag agcactctca tcgacaagta cgacctaagc
1021 aacttgcacg agatcgccag cggcggggcg ccgctcagca aggaggtagg tgaggccgtg
1081 gccaaacgct tccacctacc aggcatccgc cagggctacg gcctgacaga aacaaccagc
1141 gccattctga tcacccccga aggggacgac aagcctggcg cagtaggcaa ggtggtgccc
1201 ttcttcgagg ctaaggtggt ggacttggac accggtaaga cactgggtgt gaaccagcgc
1261 ggcgagctgt gcgtccgtgg ccccatgatc atgagcggct acgttaacaa ccccgaggct
1321 acaaacgctc tcatcgacaa ggacggctgg ctgcacagcg gcgacatcgc ctactgggac
1381 gaggacgagc acttcttcat cgtggaccgg ctgaagagcc tgatcaaata caagggctac
1441 caggtagccc cagccgaact ggagagcatc ctgctgcaac accccaacat cttcgacgcc
1501 ggggtcgccg gcctgcccga cgacgatgcc ggcgagctgc ccgccgcagt cgtcgtgctg
1561 gaacacggta aaaccatgac cgagaaggag atcgtggact atgtggccag ccaggttaca
1621 accgccaaga agctgcgcgg tggtgttgtg ttcgtggacg aggtgcctaa aggactgacc
1681 ggcaagttgg acgcccgcaa gatccgcgag attctcatta aggccaagaa gggcggcaag
1741 atcgccgtgt aataattcta gagtcggggc ggccggccgc ttcgagcaga catgataaga
1801 tacattgatg agtttggaca aaccacaact agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt
1861 gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta accattataa gctgcaataa acaagttaac
1921 aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag gttcaggggg aggtgtggga ggttttttaa
1981 agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa atcgataagg atccgtcgac cgatgccctt
2041 gagagccttc aacccagtca gctccttccg gtgggcgcgg ggcatgacta tcgtcgccgc
2101 acttatgact gtcttcttta tcatgcaact cgtaggacag gtgccggcag cgctcttccg
2161 cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc
2221 actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt
2281 gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc
2341 ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa
2401 acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc
2461 ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg
2521 cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc
2581 tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc
2641 gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca
2701 ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact
2761 acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg
2821 gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt
2881 ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct
2941 tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga
3001 gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa
3061 tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagcggccg caaatgctaa accactgcag
3121 tggttaccag tgcttgatca gtgaggcacc gatctcagcg atctgcctat ttcgttcgtc
3181 catagtggcc tgactccccg tcgtgtagat cactacgatt cgtgagggct taccatcagg
3241 ccccagcgca gcaatgatgc cgcgagagcc gcgttcaccg gcccccgatt tgtcagcaat
3301 gaaccagcca gcagggaggg ccgagcgaag aagtggtcct gctactttgt ccgcctccat
3361 ccagtctatg agctgctgtc gtgatgctag agtaagaagt tcgccagtga gtagtttccg
3421 aagagttgtg gccattgcta ctggcatcgt ggtatcacgc tcgtcgttcg gtatggcttc
3481 gttcaactct ggttcccagc ggtcaagccg ggtcacatga tcacccatat tatgaagaaa
3541 tgcagtcagc tccttagggc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cggtgttgtc
3601 gctcatggta atggcagcac tacacaattc tcttaccgtc atgccatccg taagatgctt
3661 ttccgtgacc ggcgagtact caaccaagtc gttttgtgag tagtgtatac ggcgaccaag
3721 ctgctcttgc ccggcgtcta tacgggacaa caccgcgcca catagcagta ctttgaaagt
3781 gctcatcatc gggaatcgtt cttcggggcg gaaagactca aggatcttgc cgctattgag
3841 atccagttcg atatagccca ctcttgcacc cagttgatct tcagcatctt ttactttcac
3901 cagcgtttcg gggtgtgcaa aaacaggcaa gcaaaatgcc gcaaagaagg gaatgagtgc
3961 gacacgaaaa tgttggatgc tcatactcgt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca
4021 gggttactag tacgtctctc aaggataagt aagtaatatt aaggtacggg aggtattgga
4081 caggccgcaa taaaatatct ttattttcat tacatctgtg tgttggtttt ttgtgtgaat
4141 cgatagtact aacatacgct ctccatcaaa acaaaacgaa acaaaacaaa ctagcaaaat
4201 aggctgtccc cagtgcaagt gcaggtgcca gaacatttct ct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pGL4.10[luc2]哺乳报告质粒
别称: pGL4.10[luc2]
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，信号通路报告载体 |
| 质粒大小: | 4242bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | RVP3:CTAGCAAAATAGGCTGTCCC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 启动子检测 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | Promoter |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | fLuc |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4242 bp ds-DNA circular SYN 28-JUN-2013
DEFINITION Promoterless vector for measuring the activity of promoter and
enhancer sequences with a luciferase assay.
ACCESSION AY738222
VERSION .
KEYWORDS pGL4.10[luc2]
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4242)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, September 3, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
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FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4242
/organism="synthetic DNA construct"
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/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3124..3984)
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/note="AmpR"
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related antibiotics"
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LIKHW"
polyA_signal 4089..4137
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the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggcctaactg gccggtacct gagctcgcta gcctcgagga tatcaagatc tggcctcggc
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1741 atcgccgtgt aataattcta gagtcggggc ggccggccgc ttcgagcaga catgataaga
1801 tacattgatg agtttggaca aaccacaact agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt
1861 gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta accattataa gctgcaataa acaagttaac
1921 aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag gttcaggggg aggtgtggga ggttttttaa
1981 agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa atcgataagg atccgtcgac cgatgccctt
2041 gagagccttc aacccagtca gctccttccg gtgggcgcgg ggcatgacta tcgtcgccgc
2101 acttatgact gtcttcttta tcatgcaact cgtaggacag gtgccggcag cgctcttccg
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2221 actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt
2281 gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc
2341 ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa
2401 acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc
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2641 gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3049/pENTR223-SRPRA（1-1728bp）人源基因质粒 |
| P3050/pENTR223-C17orf53-A376C人源基因质粒 |
| P3051/pENTR223-CYP39A1人源基因质粒 |
| P3052/pENTR223-SEPT9人源基因质粒 |
| P3053/pENTR223-CMIP（476-2322bp）人源基因质粒 |
| P3054/pENTR223-ACSF2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3073/pENTR223-P3H2人源基因质粒 |
| P3074/pENTR223-DBR1（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3078/pENTR223-IP6K2人源基因质粒 |
| P3079/pENTR223-ENY2人源基因质粒 |
| P3080/pENTR223-HIST2H4A人源基因质粒 |
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