pCDNA3.1-mCherry哺乳荧光质粒

基本信息
名称：pCDNA3.1-mCherry哺乳荧光质粒
别称: pCDNA3.1-mCherry

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	bGH
原核抗性:	Amp
筛选标记:	G418
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
诱导方式:	无需诱导
5'测序引物:	CMV-F
3'测序引物:	bGH

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：	Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介
   pCDNA3.1-mCherry是一个哺乳红色荧光表达质粒，由武汉淼灵生物科技有限公司构建并保藏至淼灵质粒平台。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6139 bp ds-DNA     circular SYN 19-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6139
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        202..581
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        582..785
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     promoter        830..848
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     regulatory      890..899
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             896..1606
                     /codon_start=1
                     /product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
                     (Shaner et al., 2004)"
                     /label=mCherry
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
                     TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
                     EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
                     GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
                     EGRHSTGGMDELYK"
     polyA_signal    1706..1930
                     /label=bGH poly(A) signal
                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
     rep_origin      1976..2404
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2418..2747
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2598..2733
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2814..3608
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /label=Neo
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3782..3903
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(4354..4939)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5110..5970)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(5971..6075)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagtatctg ctccctgctt
       61 gtgtgttgga ggtcgctgag tagtgcgcga gcaaaattta agctacaaca aggcaaggct
      121 tgaccgacaa ttgcatgaag aatctgctta gggttaggcg ttttgcgctg cttcgcgatg
      181 tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgactag ttattaatag taatcaatta
      241 cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg
      301 gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc
      361 ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa
      421 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca
      481 atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta
      541 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt
      601 acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg
      661 acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca
      721 actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca
      781 gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt aatacgactc
      841 actataggga gacccaagct ggctagcgtt taaacttaag cttggtaccg ccaccatggt
      901 gagcaagggc gaggaggata acatggccat catcaaggag ttcatgcgct tcaaggtgca
      961 catggagggc tccgtgaacg gccacgagtt cgagatcgag ggcgagggcg agggccgccc
     1021 ctacgagggc acccagaccg ccaagctgaa ggtgaccaag ggtggccccc tgcccttcgc
     1081 ctgggacatc ctgtcccctc agttcatgta cggctccaag gcctacgtga agcaccccgc
     1141 cgacatcccc gactacttga agctgtcctt ccccgagggc ttcaagtggg agcgcgtgat
     1201 gaacttcgag gacggcggcg tggtgaccgt gacccaggac tcctccctgc aggacggcga
     1261 gttcatctac aaggtgaagc tgcgcggcac caacttcccc tccgacggcc ccgtaatgca
     1321 gaagaagacc atgggctggg aggcctcctc cgagcggatg taccccgagg acggcgccct
     1381 gaagggcgag atcaagcaga ggctgaagct gaaggacggc ggccactacg acgctgaggt
     1441 caagaccacc tacaaggcca agaagcccgt gcagctgccc ggcgcctaca acgtcaacat
     1501 caagttggac atcacctccc acaacgagga ctacaccatc gtggaacagt acgaacgcgc
     1561 cgagggccgc cactccaccg gcggcatgga cgagctgtac aagtagggat ccactagtcc
     1621 agtgtggtgg aattctgcag atatccagca cagtggcggc cgctcgagtc tagagggccc
     1681 gtttaaaccc gctgatcagc ctcgactgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc
     1741 ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa
     1801 aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg
     1861 gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg
     1921 ggctctatgg cttctgaggc ggaaagaacc agctggggct ctagggggta tccccacgcg
     1981 ccctgtagcg gcgcattaag cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca
     2041 cttgccagcg ccctagcgcc cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc
     2101 gccggctttc cccgtcaagc tctaaatcgg gggctccctt tagggttccg atttagtgct
     2161 ttacggcacc tcgaccccaa aaaacttgat tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg
     2221 ccctgataga cggtttttcg ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc
     2281 ttgttccaaa ctggaacaac actcaaccct atctcggtct attcttttga tttataaggg
     2341 attttgccga tttcggccta ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg
     2401 aattaattct gtggaatgtg tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag
     2461 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag
     2521 gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc
     2581 cgcccctaac tccgcccatc ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc
     2641 atggctgact aatttttttt atttatgcag aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat
     2701 tccagaagta gtgaggaggc ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag
     2761 cttgtatatc cattttcgga tctgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg
     2821 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg
     2881 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg
     2941 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg
     3001 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg
     3061 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc
     3121 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc
     3181 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc
     3241 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc
     3301 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg
     3361 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct
     3421 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt
     3481 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc
     3541 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt
     3601 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc
     3661 acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg
     3721 ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc
     3781 caacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac
     3841 aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc
     3901 ttatcatgtc tgtataccgt cgacctctag ctagagcttg gcgtaatcat ggtcatagct
     3961 gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacatacgag ccggaagcat
     4021 aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gagctaactc acattaattg cgttgcgctc
     4081 actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg
     4141 cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct
     4201 gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt
     4261 atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc
     4321 caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga
     4381 gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata
     4441 ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac
     4501 cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg
     4561 taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc
     4621 cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag
     4681 acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt
     4741 aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt
     4801 atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg
     4861 atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg
     4921 cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg
     4981 gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta
     5041 gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg
     5101 gtctgacagt taccaatgct taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg
     5161 ttcatccata gttgcctgac tccccgtcgt gtagataact acgatacggg agggcttacc
     5221 atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg agacccacgc tcaccggctc cagatttatc
     5281 agcaataaac cagccagccg gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatccgc
     5341 ctccatccag tctattaatt gttgccggga agctagagta agtagttcgc cagttaatag
     5401 tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg catcgtggtg tcacgctcgt cgtttggtat
     5461 ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc ccatgttgtg
     5521 caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt
     5581 gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt actgtcatgc catccgtaag
     5641 atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg
     5701 accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg ggataatacc gcgccacata gcagaacttt
     5761 aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct
     5821 gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag catcttttac
     5881 tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat
     5941 aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt tttcaatatt attgaagcat
     6001 ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca
     6061 aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtcgacg gatcgggaga
     6121 tctcccgatc ccctatggt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2931/pENTR223-IFT57（217-1290bp点突变）人源基因质粒

P2932/pENTR223-ELMOD39（1同义突变2点突变）人源基因质粒

P2965/pENTR223-NR1I2（1同义突变）人源基因质粒

P2966/pENTR223-KLHL41人源基因质粒

P2967/pENTR223-IKZF2（1同义突变）人源基因质粒

P2968/pENTR223-SLC25A23-C23G（1同义突变）人源基因质粒

P2969/pENTR223-CYP39A1(2点突变）人源基因质粒

P2970/pENTR223-THUMPD3（3同义突变）人源基因质粒

P2971/pENTR223-GRB7人源基因质粒

P2972/pENTR223-DIDO1（5287-6723bp点突变）人源基因质粒

P2973/pENTR223-PLTP(2点突变）人源基因质粒