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- 详细信息
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-20
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2年
- 英文名：
phMGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：phMGFP哺乳荧光质粒
别称: phMGFP
质粒属性
质粒简介
phMGFP哺乳荧光质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4707 bp ds-DNA circular SYN 29-JUN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS phMGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4707)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Friday, July 6, 2018 from www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4707
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 138..517
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 518..721
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 857..989
/note="chimeric intron"
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
promoter 1034..1052
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1076..1759
/codon_start=1
/product="GenBank: AY744386.1"
/note="hMGFP"
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PRQAG"
promoter complement(1781..1798)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
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/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2910..3014
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 3015..3875
/codon_start=1
/gene="bla"
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/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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LIKHW"
rep_origin 4046..4634
/direction=RIGHT
/note="ori"
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replication"
ORIGIN
1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
721 tcgtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
1021 aggctagagt acttaatacg actcactata ggctagcccc ggggatatcg ccaccatggg
1081 cgtgatcaag cccgacatga agatcaagct gcggatggag ggcgccgtga acggccacaa
1141 attcgtgatc gagggcgacg ggaaaggcaa gccctttgag ggtaagcaga ctatggacct
1201 gaccgtgatc gagggcgccc ccctgccctt cgcttatgac attctcacca ccgtgttcga
1261 ctacggtaac cgtgtcttcg ccaagtaccc caaggacatc cctgactact tcaagcagac
1321 cttccccgag ggctactcgt gggagcgaag catgacatac gaggaccagg gaatctgtat
1381 cgctacaaac gacatcacca tgatgaaggg tgtggacgac tgcttcgtgt acaaaatccg
1441 cttcgacggg gtcaacttcc ctgctaatgg cccggtgatg cagcgcaaga ccctaaagtg
1501 ggagcccagt accgagaaga tgtacgtgcg ggacggcgta ctgaagggcg atgttaatat
1561 ggcactgctc ttggagggag gcggccacta ccgctgcgac ttcaagacca cctacaaagc
1621 caagaaggtg gtgcagcttc ccgactacca cttcgtggac caccgcatcg agatcgtgag
1681 ccacgacaag gactacaaca aagtcaagct gtacgagcac gccgaagccc acagcggact
1741 accccgccag gccggctaat agttctagag cggccgcttc cctttagtga gggttaatgc
1801 ttcgagcaga catgataaga tacattgatg agtttggaca aaccacaact agaatgcagt
1861 gaaaaaaatg ctttatttgt gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta accattataa
1921 gctgcaataa acaagttaac aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag gttcaggggg
1981 agatgtggga ggttttttaa agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa atccgataag
2041 gatcgatccg ggctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt
2101 gcgcagcctg aatggcgaat ggacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg
2161 gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct
2221 ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcg ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg
2281 ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag
2341 ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg
2401 gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc
2461 tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat
2521 gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttcc
2581 tgatgcggta ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc
2641 tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg
2701 ctgacgcgcc ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg
2761 tctccgggag ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgagacgaa
2821 agggcctcgt gatacgccta tttttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga
2881 cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa
2941 tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt
3001 gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg
3061 cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag
3121 atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg
3181 agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg
3241 gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt
3301 ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga
3361 cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac
3421 ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc
3481 atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc
3541 gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac
3601 tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag
3661 gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg
3721 gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta
3781 tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg
3841 ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata
3901 tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt
3961 ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc
4021 ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct
4081 tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa
4141 ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag
4201 tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc
4261 tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg
4321 actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca
4381 cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat
4441 gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg
4501 tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc
4561 ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc
4621 ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc
4681 cttttgctca catggctcga cagatct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：phMGFP哺乳荧光质粒
别称: phMGFP
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | hMGFP |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
phMGFP哺乳荧光质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4707 bp ds-DNA circular SYN 29-JUN-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS phMGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4707)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Friday, July 6, 2018 from www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4707
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PRQAG"
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4261 tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg
4321 actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3032/pENTR223-NCOA4人源基因质粒 |
| P3033/pENTR223-PRC1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3034/pENTR223-AOAH（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3035/pENTR223-SCG2人源基因质粒 |
| P3036/pENTR223-PLAT（1点突变）人源基因质粒 |
| P3037/pENTR223-ETFDH-C92T人源基因质粒 |
| P3038/pENTR223-ALDH1B1人源基因质粒 |
| P3039/pENTR223-ZZZ3-G15人源基因质粒 |
| P3040/pENTR223-CAMKV人源基因质粒 |
| P3041/pENTR223-PPP2R1A人源基因质粒 |
| P3042/pENTR223-SARS人源基因质粒 |
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