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- Xybio
- 上海
- P1331
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pEGFP-N1-Myc-6×His-FLAG
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pEGFP-N1-Myc-6×His-FLAG哺乳荧光质粒
别称: pEGFP-N1-Myc-6×His-FLAG
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pEGFP-N1-Myc-6×His-FLAG质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2790/pENTR223-MUL1（3点突变）人源基因质粒 |
| P2791/pENTR223-PAAF1（2点突变）人源基因质粒 |
| P2792/pENTR223-STOML2（2点突变）人源基因质粒 |
| P2793/pENTR223-RAD51B（2点突变）人源基因质粒 |
| P2794/pENTR223-PRKAR1A人源基因质粒 |
| P2795/pENTR223-SLC35G2（67-1239bp2点突变）人源基因质粒 |
| P2796/pENTR223-LDHAL6B人源基因质粒 |
| P2797/pENTR223-ILF2人源基因质粒 |
| P2798/pENTR223-POGLUT1（3点突变）人源基因质粒 |
| P2799/pENTR223-UBA6-G7T人源基因质粒 |
| P2800/pENTR223-GABPB1-A784G人源基因质粒 |
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文献和实验2)、哺乳动物/真核表达载体 pcDNA3.1+ 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA3.1- 不含任何标签的真核表达载体 amp/neo 5.4kb E. coli/mammals pcDNA4/V5-His A, amp 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisA 含His标签的真核表达载体 amp/neo pcDNA 3.1(-) myc-hisB 含His标签
蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody （货号#E022060 ）可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag
【共享】在免疫沉淀IP：免疫荧光IF实验中关于Flag抗体的应用
蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。 由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody（货号#E022060）可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。比如在免疫荧光IF的实验里，同时配合EarthOx的Dylight
