pttq18大肠表达质粒

基本信息
名称：pttq18大肠表达质粒
别称: pttq18

原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pttq18质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4563 bp ds-DNA     circular SYN 26-APR-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pttq18
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4563)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4563
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     rep_origin      897..1485
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     promoter        1927..1955
                     /label=tac promoter
                     /note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and 
                     lac UV5 promoters"
     protein_bind    1963..1979
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     CDS             1999..2322
                     /codon_start=1
                     /gene="lacZ fragment"
                     /product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
                     /label=lacZ-alpha
                     /translation="MNSSSVPGDPLESTCRHASLALAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAH
                     PPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRINSLFWRMREDFQP
                     DTD"
     misc_feature    2001..2057
                     /label=MCS
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     primer_bind     complement(2061..2077)
                     /label=M13 fwd
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     terminator      2478..2564
                     /gene="Escherichia coli rrnB"
                     /label=rrnB T1 terminator
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     terminator      2656..2683
                     /label=rrnB T2 terminator
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     promoter        3051..3128
                     /gene="lacI (mutant)"
                     /label=lacIq promoter
                     /note="In the lacIq allele, a single base change in the 
                     promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
     CDS             3129..4211
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                     /label=lacI
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
     promoter        4324..4428
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             4429..726
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
ORIGIN
        1 gaactggatc tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca
       61 atgatgagca cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg
      121 caagagcaac tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca
      181 gtcacagaaa agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata
      241 accatgagtg ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag
      301 ctaaccgctt ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg
      361 gagctgaatg aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca
      421 acaacgttgc gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta
      481 atagactgga tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct
      541 ggctggttta ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca
      601 gcactggggc cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag
      661 gcaactatgg atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat
      721 tggtaactgt cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt
      781 taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa
      841 cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga
      901 gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg
      961 gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc
     1021 agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag
     1081 aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc
     1141 agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg
     1201 cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac
     1261 accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga
     1321 aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt
     1381 ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag
     1441 cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg
     1501 gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta
     1561 tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc
     1621 agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cccaatacgc
     1681 aaaccgcctc tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gaattaattc tcatgtttga
     1741 cagcttatca tcgactgcac ggtgcaccaa tgcttctggc gtcaggcagc catcggaagc
     1801 tgtggtatgg ctgtgcaggt cgtaaatcac tgcataattc gtgtcgctca aggcgcactc
     1861 ccgttctgga taatgttttt tgcgccgaca tcataacggt tctggcaaat attctgaaat
     1921 gagctgttga caattaatca tcggctcgta taatgtgtgg aattgtgagc ggataacaat
     1981 ttcacacagg aaacagcgat gaattcgagc tcggtacccg gggatcctct agagtcgacc
     2041 tgcaggcatg caagcttggc actggccgtc gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct
     2101 ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc
     2161 gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggcgc
     2221 ctgatgcggt attttctcct tacgcatctg tgcggtattt cacaccgcat aaattccctg
     2281 ttttggcgga tgagagaaga ttttcagcct gatacagatt aaatcagaac gcagaagcgg
     2341 tctgataaaa cagaatttgc ctggcggcag tagcgcggtg gtcccacctg accccatgcc
     2401 gaactcagaa gtgaaacgcc gtagcgccga tggtagtgtg gggtctcccc atgcgagagt
     2461 agggaactgc caggcatcaa ataaaacgaa aggctcagtc gaaagactgg gcctttcgtt
     2521 ttatctgttg tttgtcggtg aacgctctcc tgagtaggac aaatccgccg ggagcggatt
     2581 tgaacgttgc gaagcaacgg cccggagggt ggcgggcagg acgcccgcca taaactgcca
     2641 ggcatcaaat taagcagaag gccatcctga cggatggcct ttttgcgttt ctacaaactc
     2701 ttcctgtcgt catatctaca agccatcccc ccacagatac ggtaaactag cctcgttttt
     2761 gcatcaggaa agcagggaat ttatggtgca ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat
     2821 agttaagcca gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc gccctgacgg gcttgtctgc
     2881 tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg gagctgcatg tgtcagaggt
     2941 tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgagac gaaagggcct cgtgatacgc ctatttttat
     3001 aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtgagg ttctgtaccc gacaccatcg
     3061 aatggtgcaa aacctttcgc ggtatggcat gatagcgccc ggaagagagt caattcaggg
     3121 tggtgaatgt gaaaccagta acgttatacg atgtcgcaga gtatgccggt gtctcttatc
     3181 agaccgtttc ccgcgtggtg aaccaggcca gccacgtttc tgcgaaaacg cgggaaaaag
     3241 tggaagcggc gatggcggag ctgaattaca ttcccaaccg cgtggcacaa caactggcgg
     3301 gcaaacagtc gttgctgatt ggcgttgcca cctccagtct ggccctgcac gcgccgtcgc
     3361 aaattgtcgc ggcgattaaa tctcgcgccg atcaactggg tgccagcgtg gtggtgtcga
     3421 tggtagaacg aagcggcgtc gaagcctgta aagcggcggt gcacaatctt ctcgcgcaac
     3481 gcgtcagtgg gctgatcatt aactatccgc tggatgacca ggatgccatt gctgtggaag
     3541 ctgcctgcac taatgttccg gcgttatttc ttgatgtctc tgaccagaca cccatcaaca
     3601 gtattatttt ctcccatgaa gacggtacgc gactgggcgt ggagcatctg gtcgcattgg
     3661 gtcaccagca aatcgcgctg ttagcgggcc cattaagttc tgtctcggcg cgtctgcgtc
     3721 tggctggctg gcataaatat ctcactcgca atcaaattca gccgatagcg gaacgggaag
     3781 gcgactggag tgccatgtcc ggttttcaac aaaccatgca aatgctgaat gagggcatcg
     3841 ttcccactgc gatgctggtt gccaacgatc agatggcgct gggcgcaatg cgcgccatta
     3901 ccgagtccgg gctgcgcgtt ggtgcggata tctcggtagt gggatacgac gataccgaag
     3961 acagctcatg ttatatcccg ccgttaacca ccatcaaaca ggattttcgc ctgctggggc
     4021 aaaccagcgt ggaccgcttg ctgcaactct ctcagggcca ggcggtgaag ggcaatcagc
     4081 tgttgcccgt ctcactggtg aaaagaaaaa ccaccctggc gcccaatacg caaaccgcct
     4141 ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg acaggtttcc cgactggaaa
     4201 gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgta agttagctca ctcattaggc accccaggct
     4261 ttacacttta tgcttccgac ctgcaagaac ctcacgtcag gtggcacttt tcggggaaat
     4321 gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg
     4381 agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa
     4441 catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac
     4501 ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac
     4561 atc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1476/BL21 CodonPlus (DE3)-RIPL大肠表达菌

P1477/BL21-AI大肠严谨表达菌

P1478/BL21trxB(DE3)大肠表达菌

P1479/BL21Gold (DE3) pLysS大肠表达菌

P1764/SHuffle T7 Express lysY大肠表达菌

P1480/AD494(DE3)大肠表达菌

P1481/TB1大肠表达菌

P1482/C41(DE3)大肠有毒蛋白表达菌

P1483/C41(DE3)pLysS大肠有毒蛋白表达菌

P1484/C43(DE3)大肠有毒蛋白表达菌

P1485/C43(DE3)pLysS大肠有毒蛋白表达菌

P1486/Rosetta(DE3)大肠表达菌