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- Xybio
- 上海
- P1855
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pIREShyg3
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：P1855/pIREShyg3哺乳表达质粒
别称: pIREShyg3
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
P1855/pIREShyg3质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列 ：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3231/pENTR223-LSM3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3232/pENTR223-ALG8-A1507G人源基因质粒 |
| P3233/pENTR223-IL32（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3234/pENTR223-MRTO4（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3235/pENTR223-STK32C（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3236/pENTR223-S1PR1人源基因质粒 |
| P3237/pENTR223-ELAVL3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3238/pENTR223-PEX11G人源基因质粒 |
| P3239/pENTR223-GKAP1人源基因质粒 |
| P3240/pENTR223-VAPB人源基因质粒 |
| P3241/pENTR223-HOXB13人源基因质粒 |
| P3242/pENTR223-DNAJB6人源基因质粒 |
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文献和实验( 1 ) PRSETB 细菌表达质粒（Invitrogen ) : 用于 Ni-次氮基三乙酸（NTA ) 琼脂糖蛋白纯化的 His-tag；用于选择的氨苄青霉素和用于诱导蛋白质表达的异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷（IPTG )。 ( 2 ) pcDNA3 哺乳动物瞬时表达质粒（Invitrogen ) : 巨细胞病毒启动子和用于细菌选择的氨苄青霉素抗性基因。 2.2 生物化学和生物物理鉴定 ( 1 ) Luria-Bertani ( LB ) 培养基：10 g 胰蛋白胨，5 g 酵母
输卵管转移前一天晚上与切除输精管小鼠交配的假孕母鼠，注射当天早上母鼠可见精栓。尽管像Swiss Webster系的哺育母鼠很容易超重，随着体重的增加，它们将表现出不同程度的感觉消失，但它们是优良的哺育母鼠。另外，它们的价格也便宜。另一个成功的鼠系是B6D2F1，它们生命力强并有一定杂合优势。（3）麻醉剂：阿佛丁被证明是输卵管转移手术的有效麻醉剂。（三）实验操作程序和方法1．鼠系克隆（1） 动情期的探测：在转基因动物模型的建立中母鼠动情期的监测有很高的技巧性。小鼠的动情期主要划分为四个时期：① 动情
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