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- 详细信息
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCMV-Tag 4A
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCMV-Tag 4A哺乳表达质粒
别称: pCMV-Tag 4A
质粒属性
质粒简介
pCMV-Tag 4A哺乳表达质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4319 bp ds-DNA circular SYN 10-JUL-2018
DEFINITION Mammalian expression vector for tagging proteins with a C-terminal
FLAG epitope. For other reading frames, use pCMV-Tag 4B or pCMV-Tag
4C.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCMV-Tag 4A
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4319)
AUTHORS Agilent Technologies
TITLE Direct Submission
COMMENT The cloned gene must include a Kozak sequence and start codon.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4319
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
enhancer 66..370
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 371..574
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 620..638
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
misc_feature 651..743
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
CDS 744..767
/codon_start=1
/product="FLAG epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/note="FLAG"
/translation="DYKDDDDK"
misc_feature 783..793
/note="stop codons"
/note="stop codons in all three reading frames"
promoter complement(821..839)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 1113..1234
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1241..1696)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1723..1825
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 1829..2186
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2221..3015
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin)"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
misc_feature 3247..3294
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
rep_origin 3623..4211
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 atgcattagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga
61 gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg
121 cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg
181 acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca
241 tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc
301 ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc
361 tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc
421 acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa
481 tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag
541 gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctggttta gtgaaccgtc agatccgcta
601 gcgattacgc caagctcgaa attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctccacc
661 gcggtggcgg ccgctctagc ccgggcggat cccccgggct gcaggaattc gatatcaagc
721 ttatcgatac cgtcgacctc gaggattaca aggatgacga cgataagtag ggcccggtac
781 cttaattaat taaggtacca ggtaagtgta cccaattcgc cctatagtga gtcgtattac
841 aattcactcg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg gagatccaat
901 ttttaagtgt ataatgtgtt aaactactga ttctaattgt ttgtgtattt tagattcaca
961 gtcccaaggc tcatttcagg cccctcagtc ctcacagtct gttcatgatc ataatcagcc
1021 ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct cccacacctc cccctgaacc
1081 tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt tattgcagct tataatggtt
1141 acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca ctgcattcta
1201 gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttaacgcgt aaattgtaag cgttaatatt
1261 ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa
1321 atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca
1381 gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc
1441 gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg
1501 aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg
1561 ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg
1621 gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg
1681 ccgctacagg gcgcgtcagg tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt
1741 ttatttttct aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg
1801 cttcaataat attgaaaaag gaagaatcct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt
1861 gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc
1921 atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
1981 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc
2041 cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta
2101 tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct
2161 tttttggagg cctaggcttt tgcaaagatc gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc
2221 atgattgaac aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga gaggctattc
2281 ggctatgact gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca
2341 gcgcaggggc gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg
2401 caagacgagg cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg
2461 ctcgacgttg tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag
2521 gatctcctgt catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg
2581 cggcggctgc atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc
2641 atcgagcgag cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa
2701 gaacatcagg ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgag catgcccgac
2761 ggcgaggatc tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat
2821 ggccgctttt ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac
2881 atagcgttgg ctacccgtga tattgctgaa gaacttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc
2941 ctcgtgcttt acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt
3001 gacgagttct tctgagcggg actctggggt tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc
3061 tgccatcacg agatttcgat tccaccgccg ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg
3121 ttttccggga cgccggctgg atgatcctcc agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg
3181 cccaccctag ggggaggcta actgaaacac ggaaggagac aataccggaa ggaacccgcg
3241 ctatgacggc aataaaaaga cagaataaaa cgcacggtgt tgggtcgttt gttcataaac
3301 gcggggttcg gtcccagggc tggcactctg tcgatacccc accgagaccc cattggggcc
3361 aatacgcccg cgtttcttcc ttttccccac cccacccccc aagttcgggt gaaggcccag
3421 ggctcgcagc caacgtcggg gcggcaggcc ctgccatagc ctcaggttac tcatatatac
3481 tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg
3541 ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg
3601 tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc
3661 aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc
3721 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt
3781 agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc
3841 taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact
3901 caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac
3961 agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag
4021 aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg
4081 gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg
4141 tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga
4201 gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt
4261 ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCMV-Tag 4A哺乳表达质粒
别称: pCMV-Tag 4A
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCMV-Tag 4A哺乳表达质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4319 bp ds-DNA circular SYN 10-JUL-2018
DEFINITION Mammalian expression vector for tagging proteins with a C-terminal
FLAG epitope. For other reading frames, use pCMV-Tag 4B or pCMV-Tag
4C.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCMV-Tag 4A
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4319)
AUTHORS Agilent Technologies
TITLE Direct Submission
COMMENT The cloned gene must include a Kozak sequence and start codon.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4319
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
enhancer 66..370
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 371..574
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
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/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
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/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
CDS 744..767
/codon_start=1
/product="FLAG epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
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/translation="DYKDDDDK"
misc_feature 783..793
/note="stop codons"
/note="stop codons in all three reading frames"
promoter complement(821..839)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
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/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1723..1825
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 1829..2186
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2221..3015
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
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(Geneticin)"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
misc_feature 3247..3294
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
rep_origin 3623..4211
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 atgcattagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga
61 gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg
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1801 cttcaataat attgaaaaag gaagaatcct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt
1861 gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc
1921 atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
1981 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc
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3301 gcggggttcg gtcccagggc tggcactctg tcgatacccc accgagaccc cattggggcc
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3721 tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2817/pENTR223-MLC1-C74A人源基因质粒 |
| P2818/pENTR223-GNAZ-C404A人源基因质粒 |
| P2819/pENTR223-FGD6人源基因质粒 |
| P2820/pENTR223-IQUB（1-1119bp）人源基因质粒 |
| P2821/pENTR223-PTPN2-C15G人源基因质粒 |
| P2822/pENTR223-NFKBIE（418-1503bp）人源基因质粒 |
| P2823/pENTR223-DNAJB11人源基因质粒 |
| P2824/pENTR223-B4GALT3（2同义突变）人源基因质粒 |
| P2825/pENTR223-KCNJ13（3点突变）人源基因质粒 |
| P2848/pENTR223-NGEF人源基因质粒 |
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