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- Xybio
- 上海
- P1295
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCMV-SPORT6-TATDN1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pUC-SPYNE②植物双分子荧光质粒
别称: pCMV-SPORT6-TATDN1
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | |
| 基因种属： | 人 |
| 基因类型： | cDNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCMV-SPORT6-TATDN1（1点突变）
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1119/p2CT-His-MBP-Lbu_C2c2_R472A_H477A_R1048A_H1053A大肠敲除质粒 |
| P2838/pREDCas9大肠敲除质粒 |
| P3064/pET-28b-Cas9-His大肠编辑质粒 |
| P0705/pBPK2101-saCas9-gRNA大肠编辑质粒 |
| P1183/pY001 (pFnCpf1_full)大肠敲除质粒 |
| P1736/6-His-MBP-TEV-FnCpf1大肠敲除质粒 |
| P2440/pJYS1Ptac大肠敲除质粒 |
| P2638/pJYS1Peftu大肠敲除质粒 |
| P2884/p46Cpf1-OP2大肠编辑质粒 |
| P1206/pRH2502大肠敲除质粒 |
| P0841/pET302-6HIS-dCas9-Halo大肠敲除质粒 |
| P0843/pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression大肠敲除质粒 |
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文献和实验②能自主复制，是能独立复制的复制子（autonomous replicon）。一般质粒DNA复制的质粒可随宿主细胞分裂而传给后代。按质粒复制的调控及其拷贝数可分两类：严紧控制（stringent control）型质粒的复制常与宿主的繁殖偶联，拷贝数较少，每个细胞中只有1个到十几个拷贝；另一类是松弛控制（relaxed control）型质粒，其复制宿主不偶联，每个细胞中有几十到几百个拷贝。每个质粒DNA上都有复制的起点，只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制，不同质粒
有以下几点要求： ①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。 ②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。 ③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。 ④容易从宿主细胞中分离纯化出来， 这才便于重组操作。 ⑤有容易被识别筛选的标志，当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。这才介于克隆操作。 常用的载体有质粒，噬菌
g/mL 无 DNA 酶的 RNA 酶，37 ℃ 温育 1 h，以除去残留的 RNA。6. 重复步骤 4、5。1 g 细胞大约能提取到 2 mg DNA。（二）从植物组织中提取基因组 DNA【实验试剂与器材】1. CTAB 抽提液：2% (w/v) CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)，100 mM Tris.Cl，pH8.0， 20 mM EDTA，pH8.0，1.4M NaCl2. CTAB/NaCl 溶液：10% CTAB，0.7M NaCl配制方法：在 80 mL 双蒸水中溶解 4.1 g
