pCMV-Tag 3B哺乳表达质粒

基本信息
名称：pCMV-Tag 3B哺乳表达质粒
别称: pCMV-Tag 3B

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal，HSV-TK poly（A）
质粒分类:	哺乳细胞载体;蛋白过表达质粒
质粒大小:	4327bp
质粒标签:	C-myc Tag
原核抗性:	Kan
筛选标记:	G418
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
培养条件:	37℃，有氧，LB
5'测序引物:	T3: AATTAACCCTCACTAAAGGG
3'测序引物:	T7: GTAATACGACTCACTATAGGGC

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Kan
真核抗性：	Neo/G418
荧光蛋白：

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4327 bp ds-DNA    circular SYN 05-11-2015
DEFINITION  .
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled 6
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4327)
  AUTHORS   admin
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-11-5   from MLCC
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4327
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        67..370
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        371..574
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
                     promoter"
     promoter        620..638
                     /note="T3 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
     CDS             679..708
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
                     /note="Myc"
                     /translation="EQKLISEEDL"
     primer_bind     complement(756..772)
                     /note="KS primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     promoter        complement(829..847)
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     polyA_signal    1121..1242
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1249..1704)
                     /direction=LEFT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        1731..1835
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     promoter        1837..2194
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2045..2180
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2229..3023
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="NeoR/KanR"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3255..3302
                     /note="HSV TK poly(A) signal"
                     /note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
     rep_origin      3631..4219
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
ORIGIN
        1 atgcattagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc catatatgga
       61 gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca acgacccccg
      121 cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga ctttccattg
      181 acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc aagtgtatca
      241 tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc
      301 ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc
      361 tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc
      421 acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa
      481 tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag
      541 gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctggttta gtgaaccgtc agatccgcta
      601 gcgattacgc caagctcgaa attaaccctc actaaaggga acaaaagctg gagctccacc
      661 gcggtggcgg ccgccatgga gcagaaactc atctctgaag aggatctgag cccgggcgga
      721 tcccccgggc tgcaggaatt cgatatcaag cttatcgata ccgtcgacct cgaggggggg
      781 cccggtacct taattaatta aggtaccagg taagtgtacc caattcgccc tatagtgagt
      841 cgtattacaa ttcactcgat cgcccttccc aacagttgcg cagcctgaat ggcgaatgga
      901 gatccaattt ttaagtgtat aatgtgttaa actactgatt ctaattgttt gtgtatttta
      961 gattcacagt cccaaggctc atttcaggcc cctcagtcct cacagtctgt tcatgatcat
     1021 aatcagccat accacatttg tagaggtttt acttgcttta aaaaacctcc cacacctccc
     1081 cctgaacctg aaacataaaa tgaatgcaat tgttgttgtt aacttgttta ttgcagctta
     1141 taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact
     1201 gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct taacgcgtaa attgtaagcg
     1261 ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat
     1321 aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata gggttgagtg
     1381 ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc
     1441 gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt
     1501 tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag
     1561 cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg
     1621 gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc
     1681 ttaatgcgcc gctacagggc gcgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc
     1741 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct
     1801 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agaatcctga ggcggaaaga accagctgtg
     1861 gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca
     1921 aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg
     1981 cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc ccctaactcc
     2041 gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg gctgactaat
     2101 tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctcggcctct gagctattcc agaagtagtg
     2161 aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaagatcga tcaagagaca ggatgaggat
     2221 cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga
     2281 ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc
     2341 ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga
     2401 atgaactgca agacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg
     2461 cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc
     2521 cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg
     2581 atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga
     2641 aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc
     2701 tggacgaaga acatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgagca
     2761 tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg
     2821 tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct
     2881 atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga acttggcggc gaatgggctg
     2941 accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc
     3001 gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac
     3061 gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt
     3121 cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga
     3181 gttcttcgcc caccctaggg ggaggctaac tgaaacacgg aaggagacaa taccggaagg
     3241 aacccgcgct atgacggcaa taaaaagaca gaataaaacg cacggtgttg ggtcgtttgt
     3301 tcataaacgc ggggttcggt cccagggctg gcactctgtc gataccccac cgagacccca
     3361 ttggggccaa tacgcccgcg tttcttcctt ttccccaccc caccccccaa gttcgggtga
     3421 aggcccaggg ctcgcagcca acgtcggggc ggcaggccct gccatagcct caggttactc
     3481 atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat
     3541 cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc
     3601 agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg
     3661 ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct
     3721 accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgtcct
     3781 tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct
     3841 cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg
     3901 gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc
     3961 gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga
     4021 gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg
     4081 cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta
     4141 tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg
     4201 ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg
     4261 ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat
     4321 taccgcc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2801/pENTR223-FGFR1OP（2点突变）人源基因质粒

P2802/pENTR223-TRPV5人源基因质粒

P2804/pENTR223-TENT5C（1同义突变）人源基因质粒

P2805/pENTR223-MCM7人源基因质粒

P2806/pENTR223-RASSF8人源基因质粒

P2807/pENTR223-NSDHL（1同义突变）人源基因质粒

P2808/pENTR223-CD46人源基因质粒

P2809/pENTR223-ZSCAN9人源基因质粒

P2810/pENTR223-PPME1人源基因质粒

P2811/pENTR223-MBOAT2（244-1296bp）人源基因质粒