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- 详细信息
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- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pCDNA3-HA-N
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3-HA-N哺乳表达质粒
别称: pCDNA3-HA-N
质粒属性
质粒简介
pCDNA3.0-HA-N载体是专门设计用来在哺乳细胞中进行高水平的稳定表达和瞬时表达。其中人巨细胞病毒早期启动子(CMV)在广泛的哺乳动物细胞中可以实现高表达。新霉素抗性基因可以用来筛选稳定细胞系，具体用G418筛选，另外HA做为标签能在WB实验中更方便的检测到目的基因是否表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5484 bp ds-DNA circular SYN 20-NOV-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5484
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 898..924
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/note="HA"
/translation="YPYDVPDYA"
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/note="MCS"
promoter complement(1036..1054)
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
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/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 1350..1778
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1792..2122
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 1973..2108
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2189..2983
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3157..3278
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(3327..3343)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3351..3367
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3375..3405)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3420..3441
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(3729..4317)
/direction=LEFT
/note="pUC ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4488..5348)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccgc caccatgtac
901 ccatacgacg tcccagacta cgctggaagc ttggtaccga gctcggatcc actagtaacg
961 gccgccagtg tgctggaatt ctgcagatat ccatcacact ggcggccgct cgagcatgca
1021 tctagagggc cctattctat agtgtcacct aaatgctaga gctcgctgat cagcctcgac
1081 tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct
1141 ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct
1201 gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg
1261 ggaagacaat agcaggcatg ctggggatgc ggtgggctct atggcttctg aggcggaaag
1321 aaccagctgg ggctctaggg ggtatcccca cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc
1381 gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc
1441 tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa
1501 tcggggcatc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact
1561 tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt
1621 gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa
1681 ccctatctcg gtctattctt ttgatttata agggattttg gggatttcgg cctattggtt
1741 aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag
1801 ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca ggcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct
1861 caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca
1921 aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc
1981 cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta
2041 tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt
2101 tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt tcggatctga
2161 tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc
2221 tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg
2281 ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac
2341 cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc
2401 cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg
2461 gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga
2521 gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg
2581 cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg
2641 tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt
2701 cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc
2761 ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg
2821 gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga
2881 gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc
2941 gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc
3001 gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc
3061 ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat gatcctccag
3121 cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc caccccaact tgtttattgc agcttataat
3181 ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat
3241 tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctgtat accgtcgacc
3301 tctagctaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg
3361 ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa
3421 tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac
3481 ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt
3541 gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga
3601 gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca
3661 ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg
3721 ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt
3781 cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc
3841 ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct
3901 tcgggaagcg tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc
3961 gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta
4021 tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca
4081 gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag
4141 tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag
4201 ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt
4261 agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa
4321 gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg
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4441 agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta
4501 atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc
4561 cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg
4621 ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga
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4741 tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt
4801 gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc
4861 caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc
4921 ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca
4981 gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag
5041 tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg
5101 tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa
5161 cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa
5221 cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga
5281 gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga
5341 atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg
5401 agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt
5461 ccccgaaaag tgccacctga cgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3-HA-N哺乳表达质粒
别称: pCDNA3-HA-N
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | bGH poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞真核表达载体；蛋白过表达质粒 |
| 质粒大小: | 5484bp |
| 质粒标签: | N-HA |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | T7：TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | SP6：ATTTAGGTGACACTATAGAA |
| 备注: | 载体上有起始密码子ATG，注意不要移码。 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
pCDNA3.0-HA-N载体是专门设计用来在哺乳细胞中进行高水平的稳定表达和瞬时表达。其中人巨细胞病毒早期启动子(CMV)在广泛的哺乳动物细胞中可以实现高表达。新霉素抗性基因可以用来筛选稳定细胞系，具体用G418筛选，另外HA做为标签能在WB实验中更方便的检测到目的基因是否表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5484 bp ds-DNA circular SYN 20-NOV-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5484
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/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
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promoter"
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promoter 1792..2122
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/note="SV40 enhancer and early promoter"
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variants"
protein_bind 3351..3367
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3375..3405)
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protein_bind 3420..3441
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/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
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replication"
CDS complement(4488..5348)
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related antibiotics"
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ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtcgactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccgc caccatgtac
901 ccatacgacg tcccagacta cgctggaagc ttggtaccga gctcggatcc actagtaacg
961 gccgccagtg tgctggaatt ctgcagatat ccatcacact ggcggccgct cgagcatgca
1021 tctagagggc cctattctat agtgtcacct aaatgctaga gctcgctgat cagcctcgac
1081 tgtgccttct agttgccagc catctgttgt ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct
1141 ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct
1201 gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg
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1381 gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc
1441 tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa
1501 tcggggcatc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact
1561 tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt
1621 gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa
1681 ccctatctcg gtctattctt ttgatttata agggattttg gggatttcgg cctattggtt
1741 aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaattaa ttctgtggaa tgtgtgtcag
1801 ttagggtgtg gaaagtcccc aggctcccca ggcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct
1861 caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca
1921 aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc
1981 cctaactccg cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta
2041 tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt
2101 tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc gggagcttgt atatccattt tcggatctga
2161 tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc
2221 tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg
2281 ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac
2341 cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc
2401 cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg
2461 gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga
2521 gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg
2581 cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg
2641 tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt
2701 cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc
2761 ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg
2821 gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga
2881 gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc
2941 gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc
3001 gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc
3061 ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt ttccgggacg ccggctggat gatcctccag
3121 cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc caccccaact tgtttattgc agcttataat
3181 ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat
3241 tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat gtatcttatc atgtctgtat accgtcgacc
3301 tctagctaga gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg
3361 ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa
3421 tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac
3481 ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt
3541 gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga
3601 gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca
3661 ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg
3721 ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt
3781 cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc
3841 ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct
3901 tcgggaagcg tggcgctttc tcaatgctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc
3961 gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta
4021 tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca
4081 gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag
4141 tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag
4201 ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt
4261 agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa
4321 gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg
4381 attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga
4441 agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta
4501 atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc
4561 cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg
4621 ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga
4681 agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt
4741 tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt
4801 gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc
4861 caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc
4921 ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca
4981 gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag
5041 tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg
5101 tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa
5161 cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa
5221 cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga
5281 gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga
5341 atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg
5401 agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt
5461 ccccgaaaag tgccacctga cgtc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0991/pENTR223-STXBP1人源基因质粒 |
| P0993/pENTR223-HDAC7人源基因质粒 |
| P1013/pENTR223-LRPPRC人源基因质粒 |
| P0853/pENTR223-TIGIT人源基因质粒 |
| P0891/pENTR223-CXCR4人源基因质粒 |
| P0764/pENTR223-IDH1人源基因质粒 |
| P0526/pENTR223-AGK人源基因质粒 |
| P0612/pENTR223-VEGFA人源基因质粒 |
| P0623/pENTR223-SIRT4人源基因质粒 |
| P0624/pENTR223-BMP4人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Recombinant DNA Engineering, Or Cloning Genes In Plasmids
and thus fusion proteins. For example there might be sequence for a fluorescent protein such as GFP or a peptide tag such as HA upstream of MCS (and downstream of promoter) so that an insert in frame will lead to the generation of a fusion protein, an N-terminal
pmCherry-C1 哺乳细胞质粒 Amp http://www.yrgene.com/product/vector/15552 pCDNA3 哺乳细胞质粒 Amp pCDNA3-HA 哺乳细胞质粒 Amp
【求助】逆转录病毒、慢病毒载体与其他真核表达载体在稳定筛选时的区别？
.1等一些真核表达载体就行了还是选择慢病毒载体更好？ freecell 1. 在慢病毒载体中，由哺乳动物细胞翻译后的再加工修饰产生的外源蛋白，在活性方面远胜于原核表达系统及酵母、昆虫细胞等真核表达系统，表达的外源蛋白更加的接近天然蛋白。 2. 真核表达质粒的转染对于分裂增殖比较旺盛的体外培养细胞转染效果较好，但表达的目的基因常常随时间的延长而发生丢失。与真核表达质粒相比，病毒载体介导的基因转移可以整合入宿主的基因组中，具有更好的稳定性。最初研究的鼠干细胞
pCDNA3-HA-N哺乳表达质粒
￥100 - 1000
