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- 上海
- P0487
- 2026年04月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pKJE7
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pKJE7大肠伴侣质粒
别称: pKJE7
质粒属性
质粒简介
pKJE7质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7193 bp ds-DNA circular SYN 12-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 14
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7193)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 12, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7193
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin 5802..6346
/direction=RIGHT
/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
promoter 6872..6974
/note="cat promoter"
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
CDS 6975..441
/codon_start=1
/gene="cat"
/product="chloramphenicol acetyltransferase"
/note="CmR"
/note="confers resistance to chloramphenicol"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
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DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
ORIGIN
1 cgtatggcaa tgaaagacgg tgagctggtg atatgggata gtgttcaccc ttgttacacc
61 gttttccatg agcaaactga aacgttttca tcgctctgga gtgaatacca cgacgatttc
121 cggcagtttc tacacatata ttcgcaagat gtggcgtgtt acggtgaaaa cctggcctat
181 ttccctaaag ggtttattga gaatatgttt ttcgtctcag ccaatccctg ggtgagtttc
241 accagttttg atttaaacgt ggccaatatg gacaacttct tcgcccccgt tttcaccatg
301 ggcaaatatt atacgcaagg cgacaaggtg ctgatgccgc tggcgattca ggttcatcat
361 gccgtctgtg atggcttcca tgtcggcaga atgcttaatg aattacaaca gtactgcgat
421 gagtggcagg gcggggcgta atttttttaa ggcagttatt ggtgccctta aacgcctggt
481 gctacgcctg aataagtgat aataagcgga tgaatggcag aaattcgaag aatagttacg
541 gcttatgaca tctttgtgga cacatcattc actttttatt cacatccggc cctgaactcg
601 ctaggacttg ccccggtgca ttttttaaat acccgcgaaa aatagagctg atcgtcaaat
661 ccaacattgc gcccaacggt cgctatcggc attcgcgtag tgctaagcag aagtttcgcc
721 tggctgatac gctgatcttc gcgccagctc aatacgctaa tgcctaactg ctggcggaac
781 agatgtgata accgggaggg cgacaggcag acatgctggg cgacgctggc gatatcaaaa
841 tggctgtccg ccagatggtc gctgatatac tggcaggcat cgcgcacacg gctatccatc
901 ggcgggtgca acgactcatt aattaccgcc atacgtctga gcaacaactg ctccagcaga
961 ttgatcgcca gtagctcaga atagcgacct tccccttgcc cggcgctgat gatctgcccg
1021 aacagttcgc tgaaatgcgg ctggcgcgcc tcgtccgggc ggaaaaatcc tgtctgggca
1081 aagattgtcg gccaggtcag ccactcctgc cagtaggcgc gaggccggaa ataaacccac
1141 tggtgatacc actcgctggc gtccggatgc cgtccatagt gatgaatctc gcccggcgga
1201 aacaataata tatcgccagg ccgacagaca aactgctcgc cattattatt aatgacgccc
1261 tctccgcgga tggtcaggtt aagaatatat cccttcatgc ccaacggacg atcgataaaa
1321 aaatccagat atccattcgc ttcaattggc gtcagcccgg cgaccagatg ggcattaaat
1381 gaatatcccg gcaatagcgg atcattttgc gtttcagcca tgatttctct accccccgat
1441 gttcagagaa gaaccaaatt gtccatatcg accaggacga cagagcttcc gtctccgcaa
1501 gactttgcgc ttgatgaaag cacgtatcaa ccccgcttgt gaaaagcgct ttgtaacaaa
1561 agcgtacagt tcaggcgata aaattaagta acagaagtgt ctataactat ggctggaatg
1621 tccacattga atatttgcac agcgtcacac tttgcaaagc attagcattt ttgtccataa
1681 gattagcgga tcctgcctga cggtttttgc cgcgactctc tataatttct ccatacctgt
1741 ttttctggat ggagtaagac catggctatg gattgtggag acgtttagat gggtaaaata
1801 attggtatcg acctgggtac taccaactct tgtgtagcga ttatggatgg caccactcct
1861 cgcgtgctgg agaacgccga aggcgatcgc accacgcctt ctatcattgc ctatacccag
1921 gatggtgaaa ctctagttgg tcagccggct aaacgtcagg cagtgacgaa cccgcaaaac
1981 actctgtttg cgattaaacg cctgattggt cgccgcttcc aggacgaaga agtacagcgt
2041 gatgtttcca tcatgccgtt caaaattatt gctgctgata acggcgacgc atgggtcgaa
2101 gttaaaggcc agaaaatggc accgccgcag atttctgctg aagtgctgaa aaaaatgaag
2161 aaaaccgctg aagattacct gggtgaaccg gtaactgaag ctgttatcac cgtaccggca
2221 tactttaacg atgctcagcg tcaggcaacc aaagacgcag gccgtatcgc tggtctggaa
2281 gtaaaacgta tcatcaacga accgaccgca gctgcgctgg cttacggtct ggacaaaggc
2341 actggcaacc gtactatcgc ggtttatgac ctgggtggtg gtactttcga tatttctatt
2401 atcgaaatcg acgaagttga cggcgaaaaa accttcgaag ttctggcaac caacggtgat
2461 acccacctgg ggggtgaaga cttcgacagc cgtctgatca actatctggt tgaagaattc
2521 aagaaagatc agggcattga cctgcgcaac gatccgctgg caatgcagcg cctgaaagaa
2581 gcggcagaaa aagcgaaaat cgaactgtct tccgctcagc agaccgacgt taacctgcca
2641 tacatcactg cagacgcgac cggtccgaaa cacatgaaca tcaaagtgac tcgtgcgaaa
2701 ctggaaagcc tggttgaaga tctggtaaac cgttccattg agccgctgaa agttgcactg
2761 caggacgctg gcctgtccgt atctgatatc gacgacgtta tcctcgttgg tggtcagact
2821 cgtatgccaa tggttcagaa gaaagttgct gagttctttg gtaaagagcc gcgtaaagac
2881 gttaacccgg acgaagctgt agcaatcggt gctgctgttc agggtggtgt tctgactggt
2941 gacgtaaaag acgtactgct gctggacgtt accccgctgt ctctgggtat cgaaaccatg
3001 ggcggtgtga tgacgacgct gatcgcgaaa aacaccacta tcccgaccaa gcacagccag
3061 gtgttctcta ccgctgaaga caaccagtct gcggtaacca tccatgtgct gcagggtgaa
3121 cgtaaacgtg cggctgataa caaatctctg ggtcagttca acctagatgg tatcaacccg
3181 gcaccgcgcg gcatgccgca gatcgaagtt accttcgata tcgatgctga cggtatcctg
3241 cacgtttccg cgaaagataa aaacagcggt aaagagcaga agatcaccat caaggcttct
3301 tctggtctga acgaagatga aatccagaaa atggtacgcg acgcagaagc taacgccgaa
3361 gctgaccgta agtttgaaga gctggtacag actcgcaacc agggcgacca tctgctgcac
3421 agcacccgta agcaggttga agaagcaggc gacaaactgc cggctgacga caaaactgct
3481 atcgagtctg cgctgactgc actggaaact gctctgaaag gtgaagacaa agccgctatc
3541 gaagcgaaaa tgcaggaact ggcacaggtt tcccagaaac tgatggaaat cgcccagcag
3601 caacatgccc agcagcagac tgccggtgct gatgcttctg caaacaacgc gaaagatgac
3661 gatgttgtcg acgctgaatt tgaagaagtc aaagacaaaa aataatcgcc ctataaacgg
3721 gtaattatac tgacacgggc gaaggggaat ttcctccccg cccgtgcatt catctagggg
3781 caatttaaaa aagatggcta agcaagatta ttacgagatt ttaggcgttt ccaaaacagc
3841 ggaagagcgt gaaatcagaa aggcctacaa acgcctggcc atgaaatacc acccggaccg
3901 taaccagggt gacaaagagg ccgaggcgaa atttaaagag atcaaggaag cttatgaagt
3961 tctgaccgac tcgcaaaaac gtgcggcata cgatcagtat ggtcatgctg cgtttgagca
4021 aggtggcatg ggcggcggcg gttctggcgg cggcgcagac ttcagcgata tttttggtga
4081 cgttttcggc gatatttttg gcggcggacg tggtcgtcaa cgtgcggcgc gcggtgctga
4141 tttacgctat aacatggagc tcaccctcga agaagctgta cgtggcgtga ccaaagagat
4201 ccgcattccg actctggaag agtgtgacgt ttgccacggt agcggtgcaa aaccaggtac
4261 acagccgcag acttgtccga cctgtcatgg ttctggtcag gtgcagatgc gccagggatt
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4381 gtgcaacaaa tgtcatggtc atggtcgtgt tgagcgcagc aaaacgctgt ccgttaaaat
4441 cccggcaggg gtggacactg gagaccgcat ccgtcttgcg ggcgaaggtg aagcgggcga
4501 gcatggcgca ccggcaggcg atctgtacgt tcaggttcag gttaaacagc acccgatttt
4561 cgagcgtgaa ggcaacaacc tgtattgcga agtcccgatc aacttcgcta tggcggcgct
4621 gggtggcgaa atcgaagtac cgacccttga tggtcgcgtc aaactgaaag tgcctggcga
4681 aacccagacc ggtaagctat tccgtatgcg cggtaaaggc gtcaagtctg tccgcggtgg
4741 cgcgcagggt gatttgctgt gccgcgttgt cgtcgaaaca ccggtaggcc tgaacgaaag
4801 gcagaaacag ctgctgcaag agctgcaaga aagcttcggt ggcccaaccg gcgagcacaa
4861 cagcccgcgc tcaaagagct tctttgatgg tgtgaagaag ttttttgacg acctgacccg
4921 ctaacctcgc ggagaaattc atgagtagta aagaacagaa aacgcctgag gggcaagccc
4981 cggaagaaat tatcatggat cagcacgaag agattgaggc agttgagcca gaagcttctg
5041 ctgagcaggt ggatccgcgc gatgaaaaag ttgcgaatct cgaagctcag ctggctgaag
5101 cccagacccg tgaacgtgac ggcattttgc gtgtaaaagc cgaaatggaa aacctgcgtc
5161 gtcgtactga actggatatt gaaaaagccc acaaattcgc gctggagaaa ttcatcaacg
5221 aattgctgcc ggtgattgat agcctggatc gtgcgctgga agtggctgat aaagctaacc
5281 cggatatgtc tgcgatggtt gaaggcattg agctgacgct gaagtcgatg ctggatgttg
5341 tgcgtaagtt tggcgttgaa gtgatcgccg aaactaacgt cccactggac ccgaatgtgc
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5461 tgcagaaggg ttatacgctg aatggtcgta cgattcgtgc ggcgatggtt actgtagcga
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5641 aggcgccgat atcagatccg gtaccaagct tatcgatgat aagctgtcaa acatgagaat
5701 tacaacttat atcgtatggg gctgacttca ggtgctacat ttgaagagat aaattgcact
5761 gaaatctaga aatattttat ctgattaata agatgatctt cttgagatcg ttttggtctg
5821 cgcgtaatct cttgctctga aaacgaaaaa accgccttgc agggcggttt ttcgaaggtt
5881 ctctgagcta ccaactcttt gaaccgaggt aactggcttg gaggagcgca gtcaccaaaa
5941 cttgtccttt cagtttagcc ttaaccggcg catgacttca agactaactc ctctaaatca
6001 attaccagtg gctgctgcca gtggtgcttt tgcatgtctt tccgggttgg actcaagacg
6061 atagttaccg gataaggcgc agcggtcgga ctgaacgggg ggttcgtgca tacagtccag
6121 cttggagcga actgcctacc cggaactgag tgtcaggcgt ggaatgagac aaacgcggcc
6181 ataacagcgg aatgacaccg gtaaaccgaa aggcaggaac aggagagcgc acgagggagc
6241 cgccagggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc actgatttga
6301 gcgtcagatt tcgtgatgct tgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg gctttgccgc
6361 ggccctctca cttccctgtt aagtatcttc ctggcatctt ccaggaaatc tccgccccgt
6421 tcgtaagcca tttccgctcg ccgcagtcga acgaccgagc gtagcgagtc agtgagcgag
6481 gaagcggaat atatcctgta tcacatattc tgctgacgca ccggtgcagc cttttttctc
6541 ctgccacatg aagcacttca ctgacaccct catcagtgcc aacatagtaa gccagtatac
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6661 tgaacaggag ggacagctga tagaaacaga agccactgga gcacctcaaa aacaccatca
6721 tacactaaat cagtaagttg gcagcatcac ccgacgcact ttgcgccgaa taaatacctg
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6961 ctaaggaagc taaaatggag aaaaaaatca ctggatatac caccgttgat atatcccaat
7021 ggcatcgtaa agaacatttt gaggcatttc agtcagttgc tcaatgtacc tataaccaga
7081 ccgttcagct ggatattacg gcctttttaa agaccgtaaa gaaaaataag cacaagtttt
7141 atccggcctt tattcacatt cttgcccgcc tgatgaatgc tcatccggaa ttc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pKJE7大肠伴侣质粒
别称: pKJE7
| 复制子: | p15A ori |
|---|---|
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；伴侣分子表达质粒 |
| 质粒大小: | 7.2kb |
| 原核抗性: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | 阿拉伯糖 |
| 备注: | 伴侣分子表达质粒 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 包装辅助 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Chl |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pKJE7质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7193 bp ds-DNA circular SYN 12-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 14
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7193)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 12, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7193
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin 5802..6346
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/note="p15A ori"
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
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chloramphenicol acetyltransferase"
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KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
ORIGIN
1 cgtatggcaa tgaaagacgg tgagctggtg atatgggata gtgttcaccc ttgttacacc
61 gttttccatg agcaaactga aacgttttca tcgctctgga gtgaatacca cgacgatttc
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541 gcttatgaca tctttgtgga cacatcattc actttttatt cacatccggc cctgaactcg
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721 tggctgatac gctgatcttc gcgccagctc aatacgctaa tgcctaactg ctggcggaac
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2701 ctggaaagcc tggttgaaga tctggtaaac cgttccattg agccgctgaa agttgcactg
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2821 cgtatgccaa tggttcagaa gaaagttgct gagttctttg gtaaagagcc gcgtaaagac
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3001 ggcggtgtga tgacgacgct gatcgcgaaa aacaccacta tcccgaccaa gcacagccag
3061 gtgttctcta ccgctgaaga caaccagtct gcggtaacca tccatgtgct gcagggtgaa
3121 cgtaaacgtg cggctgataa caaatctctg ggtcagttca acctagatgg tatcaacccg
3181 gcaccgcgcg gcatgccgca gatcgaagtt accttcgata tcgatgctga cggtatcctg
3241 cacgtttccg cgaaagataa aaacagcggt aaagagcaga agatcaccat caaggcttct
3301 tctggtctga acgaagatga aatccagaaa atggtacgcg acgcagaagc taacgccgaa
3361 gctgaccgta agtttgaaga gctggtacag actcgcaacc agggcgacca tctgctgcac
3421 agcacccgta agcaggttga agaagcaggc gacaaactgc cggctgacga caaaactgct
3481 atcgagtctg cgctgactgc actggaaact gctctgaaag gtgaagacaa agccgctatc
3541 gaagcgaaaa tgcaggaact ggcacaggtt tcccagaaac tgatggaaat cgcccagcag
3601 caacatgccc agcagcagac tgccggtgct gatgcttctg caaacaacgc gaaagatgac
3661 gatgttgtcg acgctgaatt tgaagaagtc aaagacaaaa aataatcgcc ctataaacgg
3721 gtaattatac tgacacgggc gaaggggaat ttcctccccg cccgtgcatt catctagggg
3781 caatttaaaa aagatggcta agcaagatta ttacgagatt ttaggcgttt ccaaaacagc
3841 ggaagagcgt gaaatcagaa aggcctacaa acgcctggcc atgaaatacc acccggaccg
3901 taaccagggt gacaaagagg ccgaggcgaa atttaaagag atcaaggaag cttatgaagt
3961 tctgaccgac tcgcaaaaac gtgcggcata cgatcagtat ggtcatgctg cgtttgagca
4021 aggtggcatg ggcggcggcg gttctggcgg cggcgcagac ttcagcgata tttttggtga
4081 cgttttcggc gatatttttg gcggcggacg tggtcgtcaa cgtgcggcgc gcggtgctga
4141 tttacgctat aacatggagc tcaccctcga agaagctgta cgtggcgtga ccaaagagat
4201 ccgcattccg actctggaag agtgtgacgt ttgccacggt agcggtgcaa aaccaggtac
4261 acagccgcag acttgtccga cctgtcatgg ttctggtcag gtgcagatgc gccagggatt
4321 cttcgctgta cagcagacct gtccacactg tcagggccgc ggtacgctga tcaaagatcc
4381 gtgcaacaaa tgtcatggtc atggtcgtgt tgagcgcagc aaaacgctgt ccgttaaaat
4441 cccggcaggg gtggacactg gagaccgcat ccgtcttgcg ggcgaaggtg aagcgggcga
4501 gcatggcgca ccggcaggcg atctgtacgt tcaggttcag gttaaacagc acccgatttt
4561 cgagcgtgaa ggcaacaacc tgtattgcga agtcccgatc aacttcgcta tggcggcgct
4621 gggtggcgaa atcgaagtac cgacccttga tggtcgcgtc aaactgaaag tgcctggcga
4681 aacccagacc ggtaagctat tccgtatgcg cggtaaaggc gtcaagtctg tccgcggtgg
4741 cgcgcagggt gatttgctgt gccgcgttgt cgtcgaaaca ccggtaggcc tgaacgaaag
4801 gcagaaacag ctgctgcaag agctgcaaga aagcttcggt ggcccaaccg gcgagcacaa
4861 cagcccgcgc tcaaagagct tctttgatgg tgtgaagaag ttttttgacg acctgacccg
4921 ctaacctcgc ggagaaattc atgagtagta aagaacagaa aacgcctgag gggcaagccc
4981 cggaagaaat tatcatggat cagcacgaag agattgaggc agttgagcca gaagcttctg
5041 ctgagcaggt ggatccgcgc gatgaaaaag ttgcgaatct cgaagctcag ctggctgaag
5101 cccagacccg tgaacgtgac ggcattttgc gtgtaaaagc cgaaatggaa aacctgcgtc
5161 gtcgtactga actggatatt gaaaaagccc acaaattcgc gctggagaaa ttcatcaacg
5221 aattgctgcc ggtgattgat agcctggatc gtgcgctgga agtggctgat aaagctaacc
5281 cggatatgtc tgcgatggtt gaaggcattg agctgacgct gaagtcgatg ctggatgttg
5341 tgcgtaagtt tggcgttgaa gtgatcgccg aaactaacgt cccactggac ccgaatgtgc
5401 atcaggccat cgcaatggtg gaatctgatg acgttgcgcc aggtaacgta ctgggcatta
5461 tgcagaaggg ttatacgctg aatggtcgta cgattcgtgc ggcgatggtt actgtagcga
5521 aagcaaaagc ttaatttctg ctttcgtaat aattcacggc cctgcatgca agctcagatc
5581 tgagcttggc tgttttggcg gatgagagaa gaggtcgact ctagaggatc tactagtcat
5641 aggcgccgat atcagatccg gtaccaagct tatcgatgat aagctgtcaa acatgagaat
5701 tacaacttat atcgtatggg gctgacttca ggtgctacat ttgaagagat aaattgcact
5761 gaaatctaga aatattttat ctgattaata agatgatctt cttgagatcg ttttggtctg
5821 cgcgtaatct cttgctctga aaacgaaaaa accgccttgc agggcggttt ttcgaaggtt
5881 ctctgagcta ccaactcttt gaaccgaggt aactggcttg gaggagcgca gtcaccaaaa
5941 cttgtccttt cagtttagcc ttaaccggcg catgacttca agactaactc ctctaaatca
6001 attaccagtg gctgctgcca gtggtgcttt tgcatgtctt tccgggttgg actcaagacg
6061 atagttaccg gataaggcgc agcggtcgga ctgaacgggg ggttcgtgca tacagtccag
6121 cttggagcga actgcctacc cggaactgag tgtcaggcgt ggaatgagac aaacgcggcc
6181 ataacagcgg aatgacaccg gtaaaccgaa aggcaggaac aggagagcgc acgagggagc
6241 cgccagggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc actgatttga
6301 gcgtcagatt tcgtgatgct tgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg gctttgccgc
6361 ggccctctca cttccctgtt aagtatcttc ctggcatctt ccaggaaatc tccgccccgt
6421 tcgtaagcca tttccgctcg ccgcagtcga acgaccgagc gtagcgagtc agtgagcgag
6481 gaagcggaat atatcctgta tcacatattc tgctgacgca ccggtgcagc cttttttctc
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6601 actccgctag cgctgatgtc cggcggtgct tttgccgtta cgcaccaccc cgtcagtagc
6661 tgaacaggag ggacagctga tagaaacaga agccactgga gcacctcaaa aacaccatca
6721 tacactaaat cagtaagttg gcagcatcac ccgacgcact ttgcgccgaa taaatacctg
6781 tgacggaaga tcacttcgca gaataaataa atcctggtgt ccctgttgat accgggaagc
6841 cctgggccaa cttttggcga aaatgagacg ttgatcggca cgtaagaggt tccaactttc
6901 accataatga aataagatca ctaccgggcg tattttttga gttatcgaga ttttcaggag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1346/pFC334丝状真菌基因编辑质粒 |
| P0802/p5921念珠菌类质粒 |
| P4547/p5921质粒菌种 |
| P0803/pCaEXP念珠菌类质粒 |
| P4548/pCaEXP质粒菌种 |
| P1756/pCU-MET3-GFP念珠菌绿色荧光质粒 |
| P0313/pCS2+鱼类表达质粒 |
| P0933/E1b-GFP-Tol2鱼类荧光质粒 |
| P1123/pT7-gRNA鱼类编辑质粒 |
| P0747/pCS2-nCas9n鱼类编辑质粒 |
| P1812/pCS2-nCas9n-nanos 3’UTR鱼类编辑质粒 |
| P0771/pKW08-Lx分枝杆菌表达质粒 |
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文献和实验相关实验
mnidr 请问最早的质粒是在哪发现的？原始的野生型大肠杆菌是不是没有质粒？我做实验用试剂盒提质粒有的大肠杆菌就提不出。 多谢 freecell 1946年，莱德伯格(Lederburg)和塔特姆(Tatum)发现的F因子是最早发现的质粒，1952年，由Lederburg正式命名为质粒。 确切地讲，质粒是细菌内的共生遗传因子，它能在细菌中垂直遗传并赋予宿主细胞一些表型，例如对抗
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pKJE7大肠伴侣质粒
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