pBV220大肠表达质粒

基本信息
名称：pBV220大肠表达质粒
别称: pBV220

启动子:	pR,pL
复制子:	pUC
质粒分类:	大肠杆菌载体；蛋白表达质粒
质粒大小:	3666bp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	30度
表达宿主:	大肠杆菌
诱导方式:	42度
5'测序引物:	pBV220-F: 5′-AAGAAGGGCAGCATTCAAAG-3‘
3'测序引物:	pBV220-R: 5′-CTGCGTTCTGATTTAATCTG-3‘
备注:	温控表达质粒

质粒属性

质粒宿主：	大肠杆菌
质粒用途：	蛋白表达
片段类型：	ORF
片段物种：	空载体
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光标记：

质粒简介
 pBV220质粒的SD sequence（用于结合原核生物核糖体的序列）后紧跟多克隆酶切位点，便于插入带起始ATG的外源基因，可表达非融合蛋白。
载体含有强的转录终止子可 防止出现"通读"现象，有利于质粒-宿主系统的稳定。
载体pBV220为3.7Kb，有利于增加其拷贝数及容量。pBV220含有PL启动子和编码对该启动子具有抑制作用而又对温度敏感的cI蛋白基因cIts857调控基因cI，因此可用温度对插入其中的外源基因的转录进行调控。
温控型原核表达载体，高拷贝数，大容量，强启动子，强转录终止子，可在任何受体菌中诱导表达。
pBV220载体是λPL/PR-cI857温度敏感系统表达载体，能够在42 ℃表达非融合的目的蛋白。
在利用pBV220载体进行质粒构建的时候，需要加入ATG起始密码子。
PBV220质粒属于温度诱导表达型，培养温度为30 ℃，诱导温度为42 ℃。
Ampr, 氨苄抗性基因;
ori, 质粒复制起点;
cIts857, lambda 噬菌体表达抑制基因，但是在热诱导条件下能够表达目的基因;
PRPL, 来自于lambda 噬菌体的串联的PR和PL启动子，保证基因的高水平表达;
SD, Shine-Dalgarno序列;
rrnB, 核糖体rrnB基因，是基因转录终止信号;
pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建的大肠杆菌温控表达载体,目前仍在广泛使用.

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3666 bp ds-DNA     circular SYN 03-JAN-2019
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pBV220
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3666)
  AUTHORS   Triple Threat
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3666
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    1..28
                     /note="MCS"
     misc_feature    239..444
                     /note="rrnB T1 T2"
     promoter        463..554
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             555..1415
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1586..2174
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2526..3239)
                     /codon_start=1
                     /gene="cIts"
                     /product="temperature-sensitive variant of the phage lambda
                     repressor"
                     /note="lambda repressor (ts)"
                     /note="thermosensitivity is conferred by the A67T mutation"
                     /translation="MSTKKKPLTQEQLEDARRLKAIYEKKKNELGLSQESVADKMGMGQ
                     SGVGALFNGINALNAYNAALLTKILKVSVEEFSPSIAREIYEMYEAVSMQPSLRSEYEY
                     PVFSHVQAGMFSPKLRTFTKGDAERWVSTTKKASDSAFWLEVEGNSMTAPTGSKPSFPD
                     GMLILVDPEQAVEPGDFCIARLGGDEFTFKKLIRDSGQVFLQPLNPQYPMIPCNESCSV
                     VGKVIASQWPEETFG"
     misc_feature    3287..3530
                     /note="PL/PR promoter"
ORIGIN
        1 gaattcccgg ggatccgtcg acctgcagcc aagcttggct gttttggcgg atgagagaag
       61 attttcagcc tgatacagat taaatcagaa cgcagaagcg gtctgataaa acagaatttg
      121 cctggcggca gtagcgcggt ggtcccacct gaccccatgc cgaactcaga agtgaaacgc
      181 cgtagcgccg atggtagtgt ggggtctccc catgcgagag tagggaactg ccaggcatca
      241 aataaaacga aaggctcagt cgaaagactg ggcctttcgt tttatctgtt gtttgtcggt
      301 gaacgctctc ctgagtagga caaatccgcc gggagcggat ttgaacgttg cgaagcaacg
      361 gcccggaggg tggcgggcag gacgcccgcc ataaactgcc aggcatcaaa ttaagcagaa
      421 ggccatcctg acggatggcc tttttgcgtt tctacaaact cttttgttta tttttctaaa
      481 tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt
      541 gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg
      601 cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag
      661 atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg
      721 agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg
      781 gcgcggtatt atcccgtgtt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt
      841 ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga
      901 cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac
      961 ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc
     1021 atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc
     1081 gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac
     1141 tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag
     1201 gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg
     1261 gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta
     1321 tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg
     1381 ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata
     1441 tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt
     1501 ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc
     1561 ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct
     1621 tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa
     1681 ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag
     1741 tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc
     1801 tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg
     1861 actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca
     1921 cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat
     1981 gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg
     2041 tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc
     2101 ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc
     2161 ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc
     2221 cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg
     2281 cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga
     2341 gcgaggaagc ggaagagcgc ttatctttcc ctttattttt gctgcggtaa gtcgcataaa
     2401 aaccattctt cataattcaa tccatttact atgttatgtt ctgaggggag tgaaaattcc
     2461 cctaattcga tgaagattct tgctcaattg ttatcagcta tgcgccgacc agaacacctt
     2521 gccgatcagc caaacgtctc ttcaggccac tgactagcga taactttccc cacaacggaa
     2581 caactctcat tgcatgggat cattgggtac tgtgggttta gtggttgtaa aaacacctga
     2641 ccgctatccc tgatcagttt cttgaaggta aactcatcac ccccaagtct ggctatgcag
     2701 aaatcacctg gctcaacagc ctgctcaggg tcaacgagaa ttaacattcc gtcaggaaag
     2761 cttggcttgg agcctgttgg tgcggtcatg gaattacctt caacctcaag ccagaatgca
     2821 gaatcactgg cttttttggt tgtgcttacc catctctccg catcaccttt ggtaaaggtt
     2881 ctaagcttag gtgagaacat ccctgcctga acatgagaaa aaacagggta ctcatactca
     2941 cttctaagtg acggctgcat actaaccgct tcatacatct cgtagatttc tctggcgatt
     3001 gaagggctaa attcttcaac gctaactttg agaatttttg taagcaatgc ggcgttataa
     3061 gcatttaatg cattgatgcc attaaataaa gcaccaacgc ctgactgccc catccccatc
     3121 ttgtctgcga cagattcctg ggataagcca agttcatttt tctttttttc ataaattgct
     3181 ttaaggcgac gtgcgtcctc aagctgctct tgtgttaatg gtttcttttt tgtgctcata
     3241 cgttaaatct atcaccgcaa gggataaata tctaacaccg tgcgtgttga ctattttacc
     3301 tctggcggtg ataatggttg catgtactaa ggaggttgta tggaacaacg cataaccctg
     3361 aaagattatg caatgcgctt tgggcaaacc aagacagcta aagatctctc acctaccaaa
     3421 caatgccccc ctgcaaaaaa taaattcata taaaaaacat acagataacc atctgcggtg
     3481 ataaattatc tctggcggtg ttgacataaa taccactggc ggtgatactg agcacatcag
     3541 caggacgcac tgaccaccat gaaggtgacg ctcttaaaaa ttaagccctg aagaagggca
     3601 gcattcaaag cagaaggctt tggggtgtgt gatacgaaac gaagcattgg ttaaaaatta
     3661 aggagg
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0827/pIZT-DsRed2-V5-6×His昆虫胞内质粒

P0296/pAC5.1b-EGFP昆虫胞内质粒

P1399/pAC5.1b-EGFP-2昆虫胞内质粒

P1219/pAC5.1b-EGFP-V5-6×His昆虫胞内质粒

P1681/pMT-V5-HisA昆虫胞内质粒

P1878/pCoHygro昆虫辅助质粒

P1858/pCoBlast昆虫辅助质粒

P1894/pCoPuro昆虫辅助质粒

P1879/pBlueBacHis2 A昆虫胞内质粒

P0291/pFastBac1昆虫胞内质粒

P1697/pFastBac1-Gus昆虫胞内质粒