mTurquoise2-pBAD大肠荧光质粒

基本信息
名称：mTurquoise2-pBAD大肠荧光质粒
别称: mTurquoise2-pBAD

启动子:	araBAD
复制子:	pBR322
原核抗性:	Amp
真核抗性:	青色荧光蛋白mTurquoise2
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

质粒宿主：	大肠杆菌
质粒用途：	蛋白表达
片段类型：	ORF
片段物种：
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光标记：	青色

质粒简介
  mTurquoise2-pBAD是一个大肠杆菌青色荧光表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5429 bp ds-DNA     circular SYN 07-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5429
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        1..285
                     /gene="araBAD"
                     /label=araBAD promoter
                     /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the 
                     araC regulatory gene is transcribed in the opposite 
                     direction (Guzman et al., 1995)"
     RBS             312..334
                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage 
                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
     CDS             354..371
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
     CDS             375..407
                     /codon_start=1
                     /product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
                     /label=T7 tag (gene 10 leader)
                     /note="promotes efficient translation in E. coli"
                     /translation="MASMTGGQQMG"
     CDS             420..440
                     /codon_start=1
                     /product="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
                     cleavage site"
                     /label=TEV site
                     /translation="ENLYFQG"
     CDS             447..1166
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced monomeric variant of CFP (Goedhart et 
                     al., 2012)"
                     /label=mTurquoise2
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLSWGVQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYFSDNVYITADKQKNGIK
                     ANFKIRHNIEDGGVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSKLSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     CDS             447..1166
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced monomeric variant of CFP (Goedhart et 
                     al., 2010)"
                     /label=mTurquoise
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLSWGVQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYFSDNVYITADKQKNGIK
                     ANFKIRHNIEDGGVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSKLSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     terminator      1382..1468
                     /gene="Escherichia coli rrnB"
                     /label=rrnB T1 terminator
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     terminator      1560..1587
                     /label=rrnB T2 terminator
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     promoter        1606..1697
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             1698..2558
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      2600..3055
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     rep_origin      3166..3754
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     misc_feature    3940..4080
                     /label=bom
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     CDS             complement(4525..5403)
                     /codon_start=1
                     /gene="araC"
                     /product="L-arabinose regulatory protein"
                     /label=araC
                     /translation="MAEAQNDPLLPGYSFNAHLVAGLTPIEANGYLDFFIDRPLGMKGY
                     ILNLTIRGQGVVKNQGREFVCRPGDILLFPPGEIHHYGRHPEAREWYHQWVYFRPRAYW
                     HEWLNWPSIFANTGFFRPDEAHQPHFSDLFGQIINAGQGEGRYSELLAINLLEQLLLRR
                     MEAINESLHPPMDNRVREACQYISDHLADSNFDIASVAQHVCLSPSRLSHLFRQQLGIS
                     VLSWREDQRISQAKLLLSTTRMPIATVGRNVGFDDQLYFSRVFKKCTGASPSEFRAGCE
                     EKVNDVAVKLS"
ORIGIN
        1 aagaaaccaa ttgtccatat tgcatcagac attgccgtca ctgcgtcttt tactggctct
       61 tctcgctaac caaaccggta accccgctta ttaaaagcat tctgtaacaa agcgggacca
      121 aagccatgac aaaaacgcgt aacaaaagtg tctataatca cggcagaaaa gtccacattg
      181 attatttgca cggcgtcaca ctttgctatg ccatagcatt tttatccata agattagcgg
      241 atactacctg acgcttttta tcgcaactct ctactgtttc tccatacccg tttttttggg
      301 ctagaaataa ttttgtttaa ctttaagaag gagatataca tatgcggggt tctcatcatc
      361 atcatcatca tggtatggct agcatgactg gtggacagca aatgggtcgg gatctgtacg
      421 agaacctgta cttccagggc tcgagcatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg
      481 tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtgtccg
      541 gcgagggcga gggcgatgcc acctacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg
      601 gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccaccct gtcctggggc gtgcagtgct
      661 tcgcccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag
      721 gctacgtcca ggagcgcacc atcttcttca aggacgacgg caactacaag acccgcgccg
      781 aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca
      841 aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa ctacttcagc gacaacgtct
      901 atatcaccgc cgacaagcag aagaacggca tcaaggccaa cttcaagatc cgccacaaca
      961 tcgaggacgg cggcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg
     1021 gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagcaccca gtccaagctg agcaaagacc
     1081 ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggatcactc
     1141 tcggcatgga cgagctgtac aagtaagaat tcgaagcttg gctgttttgg cggatgagag
     1201 aagattttca gcctgataca gattaaatca gaacgcagaa gcggtctgat aaaacagaat
     1261 ttgcctggcg gcagtagcgc ggtggtccca cctgacccca tgccgaactc agaagtgaaa
     1321 cgccgtagcg ccgatggtag tgtggggtct ccccatgcga gagtagggaa ctgccaggca
     1381 tcaaataaaa cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc
     1441 ggtgaacgct ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca
     1501 acggcccgga gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggcatc aaattaagca
     1561 gaaggccatc ctgacggatg gcctttttgc gtttctacaa actcttttgt ttatttttct
     1621 aaatacattc aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat
     1681 attgaaaaag gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg
     1741 cggcattttg ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg
     1801 aagatcagtt gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc
     1861 ttgagagttt tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat
     1921 gtggcgcggt attatcccgt gttgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact
     1981 attctcagaa tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca
     2041 tgacagtaag agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact
     2101 tacttctgac aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg
     2161 atcatgtaac tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg
     2221 agcgtgacac cacgatgcct gcagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg
     2281 aactacttac tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg
     2341 caggaccact tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag
     2401 ccggtgagcg tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc
     2461 gtatcgtagt tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga
     2521 tcgctgagat aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat
     2581 atatacttta gattgattta cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg
     2641 gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc
     2701 ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc
     2761 cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgatttgggt
     2821 gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag
     2881 tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg
     2941 ggctattctt ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag
     3001 ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat taacgtttac aatttaaaag
     3061 gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc
     3121 gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt
     3181 tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt
     3241 gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat
     3301 accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc
     3361 accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa
     3421 gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg
     3481 ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag
     3541 atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag
     3601 gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa
     3661 cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt
     3721 gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg
     3781 gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc
     3841 tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac
     3901 cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ctgatgcggt attttctcct
     3961 tacgcatctg tgcggtattt cacaccgcat ctggtgcact ctcagtacaa tctgctctga
     4021 tgccgcatag ttaagccagt atacactccg ctatcgctac gtgactgggt catggctgcg
     4081 ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc
     4141 gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca
     4201 tcaccgaaac gcgcgaggca gaaggagatg gcgcccaaca gtcccccggc cacggggcct
     4261 gccaccatac ccacgccgaa acaagcgctc atgagcccga agtggcgagc ccgatcttcc
     4321 ccatcggtga tgtcggcgat ataggcgcca gcaaccgcac ctgtggcgcc ggtgatgccg
     4381 gccacgatgc gtccggcgta gaggatctgc tcatgtttga cagcttatca tcgatgcata
     4441 atgtgcctgt caaatggacg aagcagggat tctgcaaacc ctatgctact ccgtcaagcc
     4501 gtcaattgtc tgattcgtta ccaattatga caacttgacg gctacatcat tcactttttc
     4561 ttcacaaccg gcacggaact cgctcgggct ggccccggtg cattttttaa atacccgcga
     4621 gaaatagagt tgatcgtcaa aaccaacatt gcgaccgacg gtggcgatag gcatccgggt
     4681 ggtgctcaaa agcagcttcg cctggctgat acgttggtcc tcgcgccagc ttaagacgct
     4741 aatccctaac tgctggcgga aaagatgtga cagacgcgac ggcgacaagc aaacatgctg
     4801 tgcgacgctg gcgatatcaa aattgctgtc tgccaggtga tcgctgatgt actgacaagc
     4861 ctcgcgtacc cgattatcca tcggtggatg gagcgactcg ttaatcgctt ccatgcgccg
     4921 cagtaacaat tgctcaagca gatttatcgc cagcagctcc gaatagcgcc cttccccttg
     4981 cccggcgtta atgatttgcc caaacaggtc gctgaaatgc ggctggtgcg cttcatccgg
     5041 gcgaaagaac cccgtattgg caaatattga cggccagtta agccattcat gccagtaggc
     5101 gcgcggacga aagtaaaccc actggtgata ccattcgcga gcctccggat gacgaccgta
     5161 gtgatgaatc tctcctggcg ggaacagcaa aatatcaccc ggtcggcaaa caaattctcg
     5221 tccctgattt ttcaccaccc cctgaccgcg aatggtgaga ttgagaatat aacctttcat
     5281 tcccagcggt cggtcgataa aaaaatcgag ataaccgttg gcctcaatcg gcgttaaacc
     5341 cgccaccaga tgggcattaa acgagtatcc cggcagcagg ggatcatttt gcgcttcagc
     5401 catacttttc atactcccgc cattcagag
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4278/pCMV-SPORT6-TNFRSF21（428-1968bp）人源基因质粒

P4279/pCMV-SPORT6-EBAG9人源基因质粒

P4280/pCMV-SPORT6-APH1A人源基因质粒

P4281/pCMV-SPORT6-VSIR（1点突变）人源基因质粒

P4282/pCMV-SPORT6-WDR77人源基因质粒

P4287/pCMV-SPORT6-CRADD人源基因质粒

P4286/PCMV-SPORT6-CCDC127人源基因质粒

P4285/PCMV-SPORT6-CIDEC（5-756bp1同义突变）人源基因质粒

P4284/PCMV-SPORT6-SSSCA1人源基因质粒

P4283/PCMV-SPORT6-AGR2（1同义突变）人源基因质粒

P4277/pCMV-SPORT6-TSPAN6（1同义突变）人源基因质粒

P4271/pCMV-SPORT6-SMYD3人源基因质粒