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- 上海
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pColdProS2
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pCold-ProS2大肠表达质粒
别称: pColdProS2
质粒属性
质粒简介
pCold ProS2 DNA 是一种融合的冷休克表达载体，使用来源于革兰氏阴性菌Myxococcus xanthus中的Protein S作为可溶性标签。这种Protein S存在于粘细菌的孢子衣中，由173个氨基酸残基组成，是一种非常稳定的可溶性蛋白质。将两个Protein S的N-末端结构域串联，再结合ProS2 Tag的作用，就能使融合目的蛋白的稳定性和可溶性得到提高。此外，由于目的蛋白和ProS2-Tag的相互作用性很低，因此可以将二者有效分离。pCold ProS2 DNA Vector在cspA启动子的下游插入了5’非编码区(5’-UTR)、翻译增强元件(TEE)、His-Tag序列、ProS2-Tag和多克隆位点(MCS)。在ProS2-Tag和多克隆位点(MCS)之间主要是HRV3C Protease、Thrombin和Factor Xa的切断位点，用来消除融合蛋白质的标签。此外，在cspA启动子下游还插入了lac operator，可以严格调控目的基因的表达。由于本制品的启动子是大肠杆菌来源的，所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。总之，pCold ProS2 DNAVector提供的冷休克技术，能够促进蛋白质的正确折叠，增加目的蛋白质的可溶性，对于一些棘手的目的蛋白质的表达是一个很好的选择。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5025 bp ds-DNA circular SYN 19-JAN-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5025
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 84..100
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 271..288
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
misc_feature 289..840
/label=ProS2
CDS 850..873
/codon_start=1
/product="recognition and cleavage site for human
rhinovirus 3C and PreScission proteases"
/label=HRV 3C site
/translation="LEVLFQGP"
CDS 883..900
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/label=thrombin site
/translation="LVPRGS"
CDS 907..918
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/label=Factor Xa site
/translation="IEGR"
rep_origin complement(1329..1784)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1884..1988
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 1989..2849
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3780..4862)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/label=lacI
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(4863..4940)
/gene="lacI"
/label=lacI promoter
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcacat ggcaaatatt
301 accgttttct ataacgaaga cttccagggt aagcaggtcg atctgccgcc tggcaactat
361 acccgcgccc agttggcggc gctgggcatc gagaataata ccatcagctc ggtgaaggtg
421 ccgcctggcg tgaaggctat cctgtaccag aacgatggtt tcgccggcga ccagatcgaa
481 gtggtggcca atgccgagga gttgggcccg ctgaataata acgtctccag catccgcgtc
541 atctccgtgc ccgtgcagcc gcgcatggca aatattaccg ttttctataa cgaagacttc
601 cagggtaagc aggtcgatct gccgcctggc aactataccc gcgcccagtt ggcggcgctg
661 ggcatcgaga ataataccat cagctcggtg aaggtgccgc ctggcgtgaa ggctatcctc
721 taccagaacg atggtttcgc cggcgaccag atcgaagtgg tggccaatgc cgaggagctg
781 ggtccgctga ataataacgt ctccagcatc cgcgtcatct ccgtgccggt gcagccgagg
841 tccgcgggtc tggaagttct gttccagggg ccctccgcgg gtctggtgcc acgcggtagt
901 ggtggtatcg aaggtaggca tatggagctc ggtaccctcg agggatccga attcaagctt
961 gtcgacctgc agtctagata ggtaatctct gcttaaaagc acagaatcta agatccctgc
1021 catttggcgg ggattttttt atttgttttc aggaaataaa taatcgatcg cgtaataaaa
1081 tctattatta tttttgtgaa gaataaattt gggtgcaatg agaatgcgca ggccctttcg
1141 tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt
1201 cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg
1261 tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt
1321 gcaccataaa attgtaaacg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat
1381 cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata
1441 gcccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt
1501 ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc
1561 atcacccaaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa
1621 agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg
1681 gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt
1741 aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtactatg gttgctttga
1801 cgtatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgtcag
1861 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt
1921 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa
1981 ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt
2041 gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt
2101 tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt
2161 ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg
2221 tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga
2281 atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa
2341 gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga
2401 caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa
2461 ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca
2521 ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta
2581 ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac
2641 ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc
2701 gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag
2761 ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga
2821 taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt
2881 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata
2941 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag
3001 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa
3061 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt
3121 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc
3181 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa
3241 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa
3301 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc
3361 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa
3421 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa
3481 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg
3541 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc
3601 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg
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4621 gcgacaattt gcgacggcgc gtgcagggcc agactggagg tggcaacgcc aatcagcaac
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4981 gaagcagccc agtagtaggt tgaggccgtt gagcaccgcc gccgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCold-ProS2大肠表达质粒
别称: pColdProS2
| 启动子: | CSPA |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；pCold系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 5025bp |
| 质粒标签: | ProS2 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 5'测序引物: | pCold-F: 5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3 |
| 3'测序引物: | pCold-R：5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pCold ProS2 DNA 是一种融合的冷休克表达载体，使用来源于革兰氏阴性菌Myxococcus xanthus中的Protein S作为可溶性标签。这种Protein S存在于粘细菌的孢子衣中，由173个氨基酸残基组成，是一种非常稳定的可溶性蛋白质。将两个Protein S的N-末端结构域串联，再结合ProS2 Tag的作用，就能使融合目的蛋白的稳定性和可溶性得到提高。此外，由于目的蛋白和ProS2-Tag的相互作用性很低，因此可以将二者有效分离。pCold ProS2 DNA Vector在cspA启动子的下游插入了5’非编码区(5’-UTR)、翻译增强元件(TEE)、His-Tag序列、ProS2-Tag和多克隆位点(MCS)。在ProS2-Tag和多克隆位点(MCS)之间主要是HRV3C Protease、Thrombin和Factor Xa的切断位点，用来消除融合蛋白质的标签。此外，在cspA启动子下游还插入了lac operator，可以严格调控目的基因的表达。由于本制品的启动子是大肠杆菌来源的，所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。总之，pCold ProS2 DNAVector提供的冷休克技术，能够促进蛋白质的正确折叠，增加目的蛋白质的可溶性，对于一些棘手的目的蛋白质的表达是一个很好的选择。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5025 bp ds-DNA circular SYN 19-JAN-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5025
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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promoter 1884..1988
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CDS 1989..2849
/codon_start=1
/gene="bla"
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related antibiotics"
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
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ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcacat ggcaaatatt
301 accgttttct ataacgaaga cttccagggt aagcaggtcg atctgccgcc tggcaactat
361 acccgcgccc agttggcggc gctgggcatc gagaataata ccatcagctc ggtgaaggtg
421 ccgcctggcg tgaaggctat cctgtaccag aacgatggtt tcgccggcga ccagatcgaa
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541 atctccgtgc ccgtgcagcc gcgcatggca aatattaccg ttttctataa cgaagacttc
601 cagggtaagc aggtcgatct gccgcctggc aactataccc gcgcccagtt ggcggcgctg
661 ggcatcgaga ataataccat cagctcggtg aaggtgccgc ctggcgtgaa ggctatcctc
721 taccagaacg atggtttcgc cggcgaccag atcgaagtgg tggccaatgc cgaggagctg
781 ggtccgctga ataataacgt ctccagcatc cgcgtcatct ccgtgccggt gcagccgagg
841 tccgcgggtc tggaagttct gttccagggg ccctccgcgg gtctggtgcc acgcggtagt
901 ggtggtatcg aaggtaggca tatggagctc ggtaccctcg agggatccga attcaagctt
961 gtcgacctgc agtctagata ggtaatctct gcttaaaagc acagaatcta agatccctgc
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1141 tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt
1201 cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg
1261 tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt
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1441 gcccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt
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1621 agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg
1681 gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt
1741 aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtactatg gttgctttga
1801 cgtatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgtcag
1861 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt
1921 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa
1981 ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt
2041 gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt
2101 tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt
2161 ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg
2221 tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga
2281 atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa
2341 gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga
2401 caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa
2461 ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca
2521 ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta
2581 ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac
2641 ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc
2701 gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag
2761 ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga
2821 taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt
2881 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata
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3001 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa
3061 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt
3121 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc
3181 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa
3241 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa
3301 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc
3361 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa
3421 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa
3481 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg
3541 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc
3601 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg
3661 ctcacatagt catgccccgc gcccaccgga aggagctgac tgggttgaag gctctcaagg
3721 gcatcggtcg agatcccggt gcctaatgag tgagctaact tacattaatt gcgttgcgct
3781 cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac
3841 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gccagggtgg tttttctttt caccagtgag
3901 acgggcaaca gctgattgcc cttcaccgcc tggccctgag agagttgcag caagcggtcc
3961 acgctggttt gccccagcag gcgaaaatcc tgtttgatgg tggttaacgg cgggatataa
4021 catgagctgt cttcggtatc gtcgtatccc actaccgaga tatccgcacc aacgcgcagc
4081 ccggactcgg taatggcgcg cattgcgccc agcgccatct gatcgttggc aaccagcatc
4141 gcagtgggaa cgatgccctc attcagcatt tgcatggttt gttgaaaacc ggacatggca
4201 ctccagtcgc cttcccgttc cgctatcggc tgaatttgat tgcgagtgag atatttatgc
4261 cagccagcca gacgcagacg cgccgagaca gaacttaatg ggcccgctaa cagcgcgatt
4321 tgctggtgac ccaatgcgac cagatgctcc acgcccagtc gcgtaccgtc ttcatgggag
4381 aaaataatac tgttgatggg tgtctggtca gagacatcaa gaaataacgc cggaacatta
4441 gtgcaggcag cttccacagc aatggcatcc tggtcatcca gcggatagtt aatgatcagc
4501 ccactgacgc gttgcgcgag aagattgtgc accgccgctt tacaggcttc gacgccgctt
4561 cgttctacca tcgacaccac cacgctggca cccagttgat cggcgcgaga tttaatcgcc
4621 gcgacaattt gcgacggcgc gtgcagggcc agactggagg tggcaacgcc aatcagcaac
4681 gactgtttgc ccgccagttg ttgtgccacg cggttgggaa tgtaattcag ctccgccatc
4741 gccgcttcca ctttttcccg cgttttcgca gaaacgtggc tggcctggtt caccacgcgg
4801 gaaacggtct gataagagac accggcatac tctgcgacat cgtataacgt tactggtttc
4861 acattcacca ccctgaattg actctcttcc gggcgctatc atgccatacc gcgaaaggtt
4921 ttgcgccatt cgatggtgtc cgggatctcg acgctctccc ttatgcgact cctgcattag
4981 gaagcagccc agtagtaggt tgaggccgtt gagcaccgcc gccgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4075/pCMV-SPORT6-NLRP1人源基因质粒 |
| P4076/pCMV-SPORT6-RFK人源基因质粒 |
| P4077/pCMV-SPORT6-CXCL1人源基因质粒 |
| P4078/pCMV-SPORT6-RPL35A人源基因质粒 |
| P4079/pCMV-SPORT6-CRADD人源基因质粒 |
| P4080/pCMV-SPORT6-CCDC127人源基因质粒 |
| P4081/pCMV-SPORT6-CIDEC（5-756bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P4082/pCMV-SPORT6-SSSCA1人源基因质粒 |
| P4083/pCMV-SPORT6-AGR2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4084/pCMV-SPORT6-TRIM31人源基因质粒 |
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