pCold-SUMO-10×His-3C-Strep II-

基本信息
名称：pCold-SUMO-10×His-3C-Strep II-FLAG大肠表达质粒
别称: pColdSUMO10×His3CStrepIIFLAG

启动子:	CSPA
复制子:	pBR322
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	大肠杆菌
培养条件:	37℃，有氧，LB
诱导方式:	IPTG或乳糖及其类似物

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pCold-SUMO-10×His-3C-Strep II-FLAG质粒是一个可以在低温环境下表达的大肠杆菌载体。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4930 bp ds-DNA     circular SYN 12-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pCold-SUMO-10×His-3C-Strep II-FLAG
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4930)
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4930
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    15..81
                     /label=cspA promoter
     protein_bind    84..100
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     CDS             271..343
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HMNWSHPQFEKSSGSSGGHHHHHH"
     CDS             365..653
                     /codon_start=1
                     /gene="S. cerevisiae SMT3 (truncated)"
                     /product="cleavable ubiquitin-like protein tag"
                     /label=SUMO
                     /translation="DSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRR
                     LMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQAPEDLDMEDNDIIEAHREQIG"
     CDS             676..705
                     /codon_start=1
                     /product="10xHis affinity tag"
                     /label=10xHis
                     /translation="HHHHHHHHHH"
     CDS             706..729
                     /codon_start=1
                     /product="recognition and cleavage site for human 
                     rhinovirus 3C and PreScission proteases"
                     /label=HRV 3C site
                     /translation="LEVLFQGP"
     CDS             775..798
                     /codon_start=1
                     /product="peptide that binds Strep-Tactin(R), an engineered
                     form of streptavidin"
                     /label=Strep-Tag II
                     /translation="WSHPQFEK"
     CDS             850..873
                     /codon_start=1
                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                     cleavage site"
                     /label=FLAG
                     /translation="DYKDDDDK"
     rep_origin      complement(1234..1689)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        1789..1893
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             1894..2754
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      2925..3513
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3685..4767)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                     /label=lacI
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
     promoter        complement(4768..4845)
                     /gene="lacI"
                     /label=lacI promoter
ORIGIN
        1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
       61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
      121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
      181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
      241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catatgaatt ggagccaccc gcagttcgaa
      301 aaaagcagcg gcagcagcgg cggtcatcac catcatcatc acggcggcag cggcggcagc
      361 gggtcggact cagaagtcaa tcaagaagct aagccagagg tcaagccaga agtcaagcct
      421 gagactcaca tcaatttaaa ggtgtccgat ggatcttcag agatcttctt caagatcaaa
      481 aagaccactc ctttaagaag gctgatggaa gcgttcgcta aaagacaggg taaggaaatg
      541 gactccttaa gattcttgta cgacggtatt agaattcaag ctgatcaggc ccctgaagat
      601 ttggacatgg aggataacga tattattgag gctcaccgcg aacagattgg aggcctggag
      661 ctcggtaccc tcgagcatca ccatcaccat caccatcacc atcacctgga agttctgttc
      721 caggggcccg aattctatgg caggaagaag cggagacagc gacgaagagg atcctggagc
      781 cacccgcagt tcgagaaagc ggccgcatat ggcaggaaga agcggagaca gcgacgaaga
      841 taagtcgacg attacaagga tgacgacgat aagtaatcta gataggtaat ctctgcttaa
      901 aagcacagaa tctaagatcc ctgccattgg gcggggattt ttttatttgt tttcaggaaa
      961 taaataatcg atcgcgtaat aaaatctatt attatttttg tgaagaataa atttgggtgc
     1021 aatgagaatg cgcaggccct ttcgtctcgc gccgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct
     1081 gacacatgca gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac
     1141 aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg gggctggctt aactatgcgg
     1201 catcagagca gattgtactg agagtgcacc ataaaattgt aaacgttaat attttgttaa
     1261 aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca
     1321 aaatccctta taaatcaaaa gaatagcccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga
     1381 acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc
     1441 agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac ccaaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc
     1501 gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc
     1561 cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg
     1621 caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac
     1681 agggcgcgta ctatggttgc tttgacgtat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag
     1741 gagaaaatac cgcatcaggc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct
     1801 atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga
     1861 taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc
     1921 cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg
     1981 aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc
     2041 aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact
     2101 tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc
     2161 ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag
     2221 catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat
     2281 aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt
     2341 ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa
     2401 gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc
     2461 aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat agactggatg
     2521 gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt
     2581 gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca
     2641 gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat
     2701 gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca
     2761 gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg
     2821 atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg
     2881 ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt
     2941 ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg
     3001 ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata
     3061 ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca
     3121 ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag
     3181 tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc
     3241 tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga
     3301 tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg
     3361 tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac
     3421 gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg
     3481 tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg
     3541 ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atagtcatgc cccgcgccca ccggaaggag
     3601 ctgactgggt tgaaggctct caagggcatc ggtcgagatc ccggtgccta atgagtgagc
     3661 taacttacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc
     3721 cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgccag
     3781 ggtggttttt cttttcacca gtgagacggg caacagctga ttgcccttca ccgcctggcc
     3841 ctgagagagt tgcagcaagc ggtccacgct ggtttgcccc agcaggcgaa aatcctgttt
     3901 gatggtggtt aacggcggga tataacatga gctgtcttcg gtatcgtcgt atcccactac
     3961 cgagatatcc gcaccaacgc gcagcccgga ctcggtaatg gcgcgcattg cgcccagcgc
     4021 catctgatcg ttggcaacca gcatcgcagt gggaacgatg ccctcattca gcatttgcat
     4081 ggtttgttga aaaccggaca tggcactcca gtcgccttcc cgttccgcta tcggctgaat
     4141 ttgattgcga gtgagatatt tatgccagcc agccagacgc agacgcgccg agacagaact
     4201 taatgggccc gctaacagcg cgatttgctg gtgacccaat gcgaccagat gctccacgcc
     4261 cagtcgcgta ccgtcttcat gggagaaaat aatactgttg atgggtgtct ggtcagagac
     4321 atcaagaaat aacgccggaa cattagtgca ggcagcttcc acagcaatgg catcctggtc
     4381 atccagcgga tagttaatga tcagcccact gacgcgttgc gcgagaagat tgtgcaccgc
     4441 cgctttacag gcttcgacgc cgcttcgttc taccatcgac accaccacgc tggcacccag
     4501 ttgatcggcg cgagatttaa tcgccgcgac aatttgcgac ggcgcgtgca gggccagact
     4561 ggaggtggca acgccaatca gcaacgactg tttgcccgcc agttgttgtg ccacgcggtt
     4621 gggaatgtaa ttcagctccg ccatcgccgc ttccactttt tcccgcgttt tcgcagaaac
     4681 gtggctggcc tggttcacca cgcgggaaac ggtctgataa gagacaccgg catactctgc
     4741 gacatcgtat aacgttactg gtttcacatt caccaccctg aattgactct cttccgggcg
     4801 ctatcatgcc ataccgcgaa aggttttgcg ccattcgatg gtgtccggga tctcgacgct
     4861 ctcccttatg cgactcctgc attaggaagc agcccagtag taggttgagg ccgttgagca
     4921 ccgccgccgc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4064/pCMV-SPORT6-CALM1人源基因质粒

P4065/pCMV-SPORT6-DAD1人源基因质粒

P4066/pCMV-SPORT6-CST3人源基因质粒

P4067/pCMV-SPORT6-RPL13（2同义突变）人源基因质粒

P4068/pCMV-SPORT6-RNF208人源基因质粒

P4069/pCMV-SPORT6-UBE2F人源基因质粒

P4070/pCMV-SPORT6-IMP3（1同义突变）人源基因质粒

P4071/pCMV-SPORT6-SNX12（1-477bp）人源基因质粒

P4072/pCMV-SPORT6-CENPH（1同义突变）人源基因质粒

P4073/pCMV-SPORT6-CHURC1（10-420bp）人源基因质粒

P4074/pCMV-SPORT6-TRIR人源基因质粒