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- 2025年07月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pSP73
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pSP73体外转录质粒
别称: pSP73
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
The pSP73 Vector offers a wide range of restriction sites, providing greater versatility in cloning and transcription of RNA in vitro. The pSP73 Vector contains the SP6 and T7 RNA polymerase promoters and a unique multiple cloning region, which includes restriction sites for BglII, EcoRV, ClaI, EcoRI, SacI, KpnI, SmaI, BamHI, XbaI, SalI, AccI, PstI, SphI, HindIII, PvuII and XhoI. The pSP72 and pSP73 Vectors are essentially identical except for the orientation of the multiple cloning region.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 2464 bp ds-DNA circular SYN 28-9-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 2464)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-9-28 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..2464
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 24..80
/gene="
"
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
promoter complement(102..120)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(378..966)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1137..1997)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(1998..2102)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 2448..2
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
ORIGIN
1 gaaccagatc tgatatcatc gatgaattcg agctcggtac ccggggatcc tctagagtcg
61 acctgcaggc atgcaagctt cagctgctcg aggccggtct ccctatagtg agtcgtatta
121 atttcgataa gccaggttaa cctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt
181 ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg
241 ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg
301 gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag
361 gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga
421 cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct
481 ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc
541 tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg
601 gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc
661 tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca
721 ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag
781 ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct
841 ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc
901 accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga
961 tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca
1021 cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat
1081 taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac
1141 caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt
1201 gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt
1261 gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag
1321 ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct
1381 attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt
1441 gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc
1501 tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt
1561 agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg
1621 gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg
1681 actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct
1741 tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc
1801 attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt
1861 tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt
1921 tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg
1981 aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat
2041 tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg
2101 cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa ccattattat catgacatta
2161 acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtctcg cgcgtttcgg tgatgacggt
2221 gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc
2281 gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg gggctggctt
2341 aactatgcgg catcagagca gattgtactg agagtgcacc atatggacat attgtcgtta
2401 gaacgcggct acaattaata cataacctta tgtatcatac acatacgatt taggtgacac
2461 tata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pSP73体外转录质粒
别称: pSP73
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；克隆质粒 |
| 质粒大小: | 2464bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 5'测序引物: | Sp6:ATTTAGGTGACACTATAGAA |
| 3'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 备注: | 丰富的酶切位点 |
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
The pSP73 Vector offers a wide range of restriction sites, providing greater versatility in cloning and transcription of RNA in vitro. The pSP73 Vector contains the SP6 and T7 RNA polymerase promoters and a unique multiple cloning region, which includes restriction sites for BglII, EcoRV, ClaI, EcoRI, SacI, KpnI, SmaI, BamHI, XbaI, SalI, AccI, PstI, SphI, HindIII, PvuII and XhoI. The pSP72 and pSP73 Vectors are essentially identical except for the orientation of the multiple cloning region.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 2464 bp ds-DNA circular SYN 28-9-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 2464)
AUTHORS admin
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-9-28 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..2464
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 24..80
/gene="
"
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
promoter complement(102..120)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(378..966)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1137..1997)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(1998..2102)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 2448..2
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
ORIGIN
1 gaaccagatc tgatatcatc gatgaattcg agctcggtac ccggggatcc tctagagtcg
61 acctgcaggc atgcaagctt cagctgctcg aggccggtct ccctatagtg agtcgtatta
121 atttcgataa gccaggttaa cctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt
181 ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg
241 ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg
301 gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag
361 gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga
421 cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct
481 ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc
541 tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg
601 gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc
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1021 cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat
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1141 caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt
1201 gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt
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1321 ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct
1381 attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt
1441 gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc
1501 tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt
1561 agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg
1621 gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg
1681 actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct
1741 tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc
1801 attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt
1861 tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt
1921 tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg
1981 aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat
2041 tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg
2101 cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa ccattattat catgacatta
2161 acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtctcg cgcgtttcgg tgatgacggt
2221 gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc
2281 gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg gggctggctt
2341 aactatgcgg catcagagca gattgtactg agagtgcacc atatggacat attgtcgtta
2401 gaacgcggct acaattaata cataacctta tgtatcatac acatacgatt taggtgacac
2461 tata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3929/pCMV-SPORT6-MYD88人源基因质粒 |
| P3930/pCMV-SPORT6-LMF1人源基因质粒 |
| P3931/pCMV-SPORT6-DLX4人源基因质粒 |
| P3932/pCMV-SPORT6-RAB35人源基因质粒 |
| P3933/pCMV-SPORT6-ELK1人源基因质粒 |
| P3934/pCMV-SPORT6-MEF2A(1同义突变）人源基因质粒 |
| P3935/pCMV-SPORT6-CANT1人源基因质粒 |
| P3936/pCMV-SPORT6-ZFP36人源基因质粒 |
| P3937/pCMV-SPORT6-PPM1M人源基因质粒 |
| P3938/pCMV-SPORT6-SARAF人源基因质粒 |
| P3939/pCMV-SPORT6-CHRAC1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
cRNA 探针 cRNA探针是以eDNA为模板在体外转录而成的探针，可方便地通过已克隆于特定质粒载体的，DNA产生。这些质粒通常在紧邻多克隆位点的位置含有一个噬菌体启动子。应用相关的RNA聚合酶和4种核糖核苷(rNTPs)(其中至少一种带有标记物)进行体外转录反应，依赖DNA的RNA聚合酶以克隆的cDNA为模板，以含有标记物的三磷酸核糖核苷为原料，从启动子下游开始在体外转录产生RNA。通过改变外源cDNA在质粒中的插入方向或选用不同的RNA聚合酶，可以控制RNA的转录
突变和化学修饰的耐受性，认为siRNA的5’端相对于3’端具有对突变的较高耐受性。有学者认为正义链3’突出端的任何碱基修饰对siRNA作用效果均无明显影响。还有学者认为与反义链互补的正义链3’端发生1—4个碱基的错配反而有助于增强RNAI的活性。二、siRNA制备方法目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括化学合成体外转录长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAsPCR制备
，结果只是dsRNA两端多了启动子的序列。我们也可以将片段克隆到带2个反向相同RNA聚合酶启动子之间的载体上达到同样的目的。体外转录试剂选择的要点就是产量，速度；由于要避免dsRNA部分序列和其他基因重叠，避免非目标基因的沉默或者脱靶，通常不会选择太长的片断作为dsRNA的模板，因此对试剂盒合成dsRNA的长度，倒是不一定要求太高。 1. 号称RNA公司的Ambion是最早推广RNAi试剂的厂家之一，去年初被生命科学领域的巨头ABI以2.73亿美金高价收购其RNA部门而震动业界
pSP73体外转录质粒
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