pUC119大肠克隆质粒

基本信息
名称：pUC119大肠克隆质粒
别称: pUC-119
启动子：Lac/lac promoter
复制子: pUC
质粒大小：3162bp
质粒标签：LacZ
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

5'测序引物:	M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物:	M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注:	蓝白斑筛选，产生单链DNA

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
      pUC119载体是利用pUC19载体的Nde I 酶切位点，插入含有M13 phage DNA Intergenic region (IG) 的HgiA I (5645) - DraI (5941) 片段构建而成的。由于在lacZ基因中含有多克隆位点，因此在含有IPTG、X-Gal的平板培养基上可以很容易地通过蓝白筛选判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因，使用M13系列的通用引物对插入载体中的DNA片段进行测序。使用Deletion Kit for Kilo-Sequence (Code No. : 6030) 可以对克隆得到的数千碱基的DNA片段进行测序。
       由于pUC119载体中插入了M13 phage DNA的Intergenic region (IG)，因此pUC119载体还可以在Helper phage M13K07的感染下产生单链DNA，包入Phage颗粒内后从菌体内放出，而不存在Helper phage单链DNA的污染。使用本制品时，可以稳定获得单链的长片段DNA (~7kb)，并且没有缺失。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3162 bp ds-DNA    circular SYN 22-9-2015
KEYWORDS    Untitled 4
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3162)
  AUTHORS   admin
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-9-22  from MLCC
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3162
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     protein_bind    107..128
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     promoter        143..173
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    181..197
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     primer_bind     205..221
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     misc_feature    234..290
                     /gene="
                     "
                     /note="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     primer_bind     complement(291..307)
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     rep_origin      520..975
                     /direction=RIGHT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        1257..1361
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             1362..2222
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      2393..2981
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
ORIGIN
        1 agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
       61 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc
      121 tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa
      181 ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagcttg
      241 catgcctgca ggtcgactct agaggatccc cgggtaccga gctcgaattc actggccgtc
      301 gttttacaac gtcgtgactg ggaaaaccct ggcgttaccc aacttaatcg ccttgcagca
      361 catccccctt tcgccagctg gcgtaatagc gaagaggccc gcaccgatcg cccttcccaa
      421 cagttgcgca gcctgaatgg cgaatggcgc ctgatgcggt attttctcct tacgcatctg
      481 tgcggtattt cacaccgcat acgtcaaagc aaccatagta cgcgccctgt agcggcgcat
      541 taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag
      601 cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc
      661 aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc
      721 ccaaaaaact tgatttgggt gatggttcac gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt
      781 ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa
      841 caacactcaa ccctatctcg ggctattctt ttgatttata agggattttg ccgatttcgg
      901 cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat
      961 taacgtttac aattttatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa
     1021 gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg
     1081 catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac
     1141 cgtcatcacc gaaacgcgcg agacgaaagg gcctcgtgat acgcctattt ttataggtta
     1201 atgtcatgat aataatggtt tcttagacgt caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg
     1261 gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc atgagacaat
     1321 aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc
     1381 gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa
     1441 cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac
     1501 tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga
     1561 tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag
     1621 agcaactcgg tcgccgcata cactattctc agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca
     1681 cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag taagagaatt atgcagtgct gccataacca
     1741 tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa
     1801 ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc
     1861 tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa
     1921 cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac ttactctagc ttcccggcaa caattaatag
     1981 actggatgga ggcggataaa gttgcaggac cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct
     2041 ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac
     2101 tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa
     2161 ctatggatga acgaaataga cagatcgctg agataggtgc ctcactgatt aagcattggt
     2221 aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac tttagattga tttaaaactt catttttaat
     2281 ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg
     2341 agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc
     2401 ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg
     2461 tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag
     2521 cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact
     2581 ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg
     2641 gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc
     2701 ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg
     2761 aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg
     2821 cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag
     2881 ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc
     2941 gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct
     3001 ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc
     3061 ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc
     3121 gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga ag
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0535/pET28a-Ngal人源基因质粒

P0688/pGEX-STAT3人源基因质粒

P0537/pET28a-TGFB1人源基因质粒

P1054/pT7-His-AGK人源基因质粒

P1055/pT7-His-TNF人源基因质粒

P1140/pT7-His-IL13人源基因质粒

P1160/pT7-His-LGALS13人源基因质粒

P1161/pT7-His-IL4人源基因质粒

P1162/pT7-His-IL6人源基因质粒

P1163/pT7-His-TRAF6-S12F人源基因质粒

P1164/pT7-His-GSK3B人源基因质粒