pUC57大肠克隆质粒

基本信息
名称：pUC57大肠克隆质粒
别称: pUC-57
启动子：Lac/laco promoter
复制子: pUC
质粒分类:  大肠杆菌载体；克隆质粒
质粒大小：2710bp
质粒标签：LacZ
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

5'测序引物:	M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物:	M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注:	蓝白斑筛选，单一的EcoRV酶切位点

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
  pUC57是大肠杆菌克隆质粒，大小为2710bp，含有氨苄抗生素抗性基因，能在含有氨苄的LB培养基上生长，是一个高拷贝质粒载体，可用于蓝白斑筛选。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                2710 bp ds-DNA    circular SYN 22-9-2015
KEYWORDS    Untitled 5
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 2710)
  AUTHORS   admin
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-9-22  from MLCC
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..2710
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     primer_bind     379..395
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     primer_bind     complement(489..505)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     protein_bind    513..529
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(537..567)
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    582..603
                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                     /note="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     rep_origin      complement(891..1479)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(1650..2510)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2511..2615)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
       61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
      121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
      181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
      241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
      301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
      361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgaatt cgagctcggt acctcgcgaa
      421 tgcatctaga tatcggatcc cgggcccgtc gactgcagag gcctgcatgc aagcttggcg
      481 taatcatggt catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac
      541 atacgagccg gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca
      601 ttaattgcgt tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat
      661 taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc
      721 tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca
      781 aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca
      841 aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg
      901 ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg
      961 acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt
     1021 ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt
     1081 tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc
     1141 tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt
     1201 gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt
     1261 agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc
     1321 tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa
     1381 agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt
     1441 tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct
     1501 acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta
     1561 tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa
     1621 agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct taatcagtga ggcacctatc
     1681 tcagcgatct gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac tccccgtcgt gtagataact
     1741 acgatacggg agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg agacccacgc
     1801 tcaccggctc cagatttatc agcaataaac cagccagccg gaagggccga gcgcagaagt
     1861 ggtcctgcaa ctttatccgc ctccatccag tctattaatt gttgccggga agctagagta
     1921 agtagttcgc cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg catcgtggtg
     1981 tcacgctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt
     2041 acatgatccc ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc
     2101 agaagtaagt tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt
     2161 actgtcatgc catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc
     2221 tgagaatagt gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg ggataatacc
     2281 gcgccacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa
     2341 ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac
     2401 tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa
     2461 aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt
     2521 tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa
     2581 tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct
     2641 gacgtctaag aaaccattat tatcatgaca ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg
     2701 ccctttcgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1165/pT7-His-CD1D人源基因质粒

P1187/pT7-His-LGALS13人源基因质粒

P0610/pT7-His-Survium人源基因质粒

P1191/pT7-His-Nrf2人源基因质粒

P1192/pT7-His-Smad3人源基因质粒

P1193/pT7-His-FNDC5人源基因质粒

P1194/pT7-His-VEGFA人源基因质粒

P1239/pT7-His-DRD2人源基因质粒

P1240/pT7-His-DRD3人源基因质粒

P1241/pT7-His-pCSK9人源基因质粒

P1242/pT7-His-CD20人源基因质粒