pUC18-LasR-pLasRV-EGFP质粒

基本信息
名称：pUC18-LasR-pLasRV-EGFP质粒
别称: pUC18-LasR-pLasRV-EGFP
启动子：J23101
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：EGFP
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：绿色

质粒简介
 pUC18-LasR-pLasRV-EGFP质粒
质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4605 bp ds-DNA     circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pUC18-LasR-PLasRV-EGFP
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4605)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Friday, July 6, 2018 from www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4605
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     primer_bind     379..395
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     misc_feature    405..438
                     /note="J23101"
     RBS             449..460
                     /note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and 
                     Leibler, 2000)"
     misc_feature    475..1197
                     /note="LasR"
     terminator      1206..1277
                     /note="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     terminator      1293..1320
                     /note="T7Te terminator"
                     /note="phage T7 early transcription terminator"
     misc_feature    1347..1466
                     /note="PLasRV"
     RBS             1478..1489
                     /note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and 
                     Leibler, 2000)"
     CDS             1505..2224
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced GFP"
                     /note="EGFP"
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     terminator      2239..2310
                     /note="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     terminator      2326..2353
                     /note="T7Te terminator"
                     /note="phage T7 early transcription terminator"
     primer_bind     complement(2384..2400)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     rep_origin      complement(2786..3374)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3545..4405)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(4406..4510)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
       61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
      121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
      181 accatatgcg gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgcc
      241 attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat
      301 tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt
      361 tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgccaa gctttttaca gctagctcag
      421 tcctaggtat tatgctaggt agcatgcaaa agaggagaaa cctctagaaa taatatggcc
      481 ttggttgacg gttttcttga gctggaacgc tcaagtggaa aattggagtg gagcgccatc
      541 ctccagaaga tggcgagcga ccttggattc tcgaagatcc tgttcggcct gttgcctaag
      601 gacagccagg actacgagaa cgccttcatc gtcggcaact acccggccgc ctggcgcgag
      661 cattacgacc gggctggcta cgcgcgggtc gacccgacgg tcagtcactg tacccagagc
      721 gtactgccga ttttctggga accgtccatc taccagacgc gaaagcagca cgagttcttc
      781 gaggaagcct cggccgccgg cctggtgtat gggctgacca tgccgctgca tggtgctcgc
      841 ggcgaactcg gcgcgctgag cctcagcgtg gaagcggaaa accgggccga ggccaaccgt
      901 ttcatagagt cggtcctgcc gaccctgtgg atgctcaagg actacgcact gcaaagcggt
      961 gccggactgg ccttcgaaca tccggtcagc aaaccggtgg ttctgaccag ccgggagaag
     1021 gaagtgttgc agtggtgcgc catcggcaag accagttggg agatatcggt tatctgcaac
     1081 tgctcggaag ccaatgtgaa cttccatatg ggaaatattc ggcggaagtt cggtgtgacc
     1141 tcccgccgcg tagcggccat tatggccgtt aatttgggtc ttattactct ctaataacca
     1201 ggcatcaaat aaaacgaaag gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt atctgttgtt
     1261 tgtcggtgaa cgctctctac tagagtcaca ctggctcacc ttcgggtggg cctttctgcg
     1321 tttataagtc agtagcatgc atgacccctt tccgaaacga aacaagttgg attttgcacc
     1381 taccagaact ggtagttctg acctgtggct atcttcgaag gcatcgatat tatgcacatt
     1441 ggaactcttc atgacataac gccgagagtc gatatggaaa gaggagaaag ccatatctga
     1501 attcatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg gtgcccatcc tggtcgagct
     1561 ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag cgtgtccggc gagggcgagg gcgatgccac
     1621 ctacggcaag ctgaccctga agttcatctg caccaccggc aagctgcccg tgccctggcc
     1681 caccctcgtg accaccctga cctacggcgt gcagtgcttc agccgctacc ccgaccacat
     1741 gaagcagcac gacttcttca agtccgccat gcccgaaggc tacgtccagg agcgcaccat
     1801 cttcttcaag gacgacggca actacaagac ccgcgccgag gtgaagttcg agggcgacac
     1861 cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag gaggacggca acatcctggg
     1921 gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat atcatggccg acaagcagaa
     1981 gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc gaggacggca gcgtgcagct
     2041 cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc cccgtgctgc tgcccgacaa
     2101 ccactacctg agcacccagt ccgccctgag caaagacccc aacgagaagc gcgatcacat
     2161 ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg gatcactctc ggcatggacg agctgtacaa
     2221 gtaaggtacc ccaggcatca aataaaacga aaggctcagt cgaaagactg ggcctttcgt
     2281 tttatctgtt gtttgtcggt gaacgctctc tactagagtc acactggctc accttcgggt
     2341 gggcctttct gcgtttatag gatccccgga gctcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg
     2401 tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta
     2461 aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
     2521 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
     2581 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
     2641 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
     2701 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
     2761 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
     2821 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
     2881 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
     2941 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca aagctcacgc tgtaggtatc
     3001 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
     3061 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
     3121 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
     3181 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta
     3241 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
     3301 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
     3361 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
     3421 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
     3481 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
     3541 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
     3601 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
     3661 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
     3721 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
     3781 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
     3841 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
     3901 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
     3961 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
     4021 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
     4081 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
     4141 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
     4201 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
     4261 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
     4321 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
     4381 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
     4441 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
     4501 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca
     4561 tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4067/pCMV-SPORT6-RPL13（2同义突变）人源基因质粒

P4068/pCMV-SPORT6-RNF208人源基因质粒

P4069/pCMV-SPORT6-UBE2F人源基因质粒

P4070/pCMV-SPORT6-IMP3（1同义突变）人源基因质粒

P4071/pCMV-SPORT6-SNX12（1-477bp）人源基因质粒

P4072/pCMV-SPORT6-CENPH（1同义突变）人源基因质粒

P4073/pCMV-SPORT6-CHURC1（10-420bp）人源基因质粒

P4074/pCMV-SPORT6-TRIR人源基因质粒

P4075/pCMV-SPORT6-NLRP1人源基因质粒

P4076/pCMV-SPORT6-RFK人源基因质粒