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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBBR1MCS2-Tac-NDH2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBBR1MCS2-Tac-NDH2质粒
别称: pBBR1MCS2-Tac-NDH2
启动子：Tac
复制子: pBBR1
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：广宿主
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pBBR1MCS2-Tac-NDH2质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6765 bp ds-DNA circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBBR1MCS2-Tac-NDH2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6765)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Friday, July 6, 2018 from www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6765
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 458..1252
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter 2033..2061
/note="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
CDS 2108..3388
/codon_start=1
/note="NDH-2"
/translation="MATQLGHKLGRKKKAKITLVDRNHSHLWKPLLHEVATGSLDEGVD
ALSYLAHARNHGFQFQLGSVIDIDREAKTITIAELRDEKGELLVPERKIAYDTLVMALG
STSNDFNTPGVKENCIFLDNPHQARRFHQEMLNLFLKYSANLGANGKVNIAIVGGGATG
VELSAELHNAVKQLHSYGYKGLTNEALNVTLVEAGERILPALPPRISAAAHNELTKLGV
RVLTQTMVTSADEGGLHTKDGEYIEADLMVWAAGIKAPDFLKDIGGLETNRINQLVVEP
TLQTTRDPDIYAIGDCASCPRPEGGFVPPRAQAAHQMATCAMNNILAQMNGKPLKNYQY
KDHGSLVSLSNFSTVGSLMGNLTRGSMMIEGRIARFVYISLYRMHQIALHGYFKTGLMM
LVGSINRVIRPRLKLHAANDENYALAA"
terminator 3422..3469
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(4311..4973)
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/note="pBBR1 Rep"
/translation="MATQSREIGIQAKNKPGHWVQTERKAHEAWAGLIARKPTAAMLLH
HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
rep_origin 4974..5743
/note="pBBR1 oriV"
/note="replication origin of the broad-host-range plasmid
pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
ORIGIN
1 accttcggga gcgcctgaag cccgttctgg acgccctggg gccgttgaat cgggatatgc
61 aggccaaggc cgccgcgatc atcaaggccg tgggcgaaaa gctgctgacg gaacagcggg
121 aagtccagcg ccagaaacag gcccagcgcc agcaggaacg cgggcgcgca catttccccg
181 aaaagtgcca cctgggatga atgtcagcta ctgggctatc tggacaaggg aaaacgcaag
241 cgcaaagaga aagcaggtag cttgcagtgg gcttacatgg cgatagctag actgggcggt
301 tttatggaca gcaagcgaac cggaattgcc agctggggcg ccctctggta aggttgggaa
361 gccctgcaaa gtaaactgga tggctttctt gccgccaagg atctgatggc gcaggggatc
421 aagatctgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca
481 cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac
541 aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt
601 tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc
661 gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg
721 aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc
781 tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc
841 ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat
901 ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc
961 cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca
1021 tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga
1081 ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat
1141 tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc
1201 tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact
1261 ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc
1321 accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg
1381 atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc acccccatgg gcaaatatta
1441 tacgcaaggc gacaaggtgc tgatgccgct ggcgattcag gttcatcatg ccgtttgtga
1501 tggcttccat gtcggcagaa tgcttaatga attacaacag tttttatgca tgcgcccaat
1561 acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt
1621 tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc tcactcatta
1681 ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa ttgtgagcgg
1741 ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagcgcg caattaaccc
1801 tcactaaagg gaacaaaagc tgggtaccgg gccccccctc gaggtcgacg gtatcgataa
1861 gcttgatatc gaattcgagc tcggtacctc gcgaatgcat ctagatcaca ttcaccaccc
1921 tgaattgact ctcttccggg cgctatcatg ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga
1981 tggtgtccgg gatctcgacg ctctccctta tgcgactcct gcattaggaa atttgacaat
2041 taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatg tctcatgagc ggatatttca cacaggaaac
2101 agtattcatg gcaacacagc tggggcataa gctgggacgc aagaaaaaag ccaaaattac
2161 gctggtcgat cgtaaccaca gccacctgtg gaaaccgctg ctgcacgaag tggcgactgg
2221 ctcgcttgat gaaggcgtcg atgcgttgag ctatctggcc catgcgcgca atcatggttt
2281 ccagttccag ctgggttccg tcattgatat tgatcgtgaa gcgaaaacaa tcactattgc
2341 agaactgcgc gacgagaaag gtgaactgct ggttccggaa cgtaaaatcg cctatgacac
2401 cctggtaatg gcgctgggta gcacctctaa cgatttcaat acgccaggtg tcaaagagaa
2461 ctgcattttc ctcgataacc cgcaccaggc gcgtcgcttc caccaggaga tgctgaattt
2521 gttcctgaaa tactccgcca acctgggcgc gaatggcaaa gtgaacattg cgattgtcgg
2581 cggcggcgcg acgggtgtag aactctccgc tgaattgcac aacgcggtca agcaactgca
2641 cagctacggt tacaaaggcc tgaccaacga agccctgaac gtaacgctgg tagaagcggg
2701 agaacgtatt ttgcctgcgt taccgccacg tatctctgct gcggcccaca acgagctaac
2761 gaaacttggc gttcgcgtgc tgacgcaaac catggtcacc agtgctgatg aaggcggcct
2821 gcacactaaa gatggcgaat atattgaggc tgatctgatg gtatgggcag ccgggatcaa
2881 agcgccagac ttcctgaaag atatcggtgg tcttgaaact aaccgtatca accagctggt
2941 ggtggaaccg acgctgcaaa ccacccgcga tccagacatt tacgctattg gcgactgcgc
3001 gtcatgcccg cgtccggaag ggggctttgt tccgccgcgt gctcaggctg cacaccagat
3061 ggcgacttgc gcaatgaaca acattctggc gcagatgaac ggtaagccgc tgaaaaatta
3121 tcagtataaa gatcatggtt cgctggtatc gctgtcgaac ttctccaccg tcggtagcct
3181 gatgggtaac ctgacgcgcg gctcaatgat gattgaagga cgaattgcgc gctttgtata
3241 tatctcgcta taccgaatgc atcagattgc gctgcatggt tactttaaaa ccggattaat
3301 gatgctggtg gggagtatta accgcgttat ccgtccgcgt ttgaagttgc atgcagcgaa
3361 cgacgaaaat tacgcccttg cagcgtaatt aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata
3421 actagcataa ccccttgggg cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca
3481 ggcatttgag aagcacacgg tcacacatcg gatccactag ttctagagcg gccgccaccg
3541 cggtggagct ccaattcgcc ctatagtgag tcgtattacg cgcgctcact ggccgtcgtt
3601 ttacaacgtc gtgactggga aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat
3661 ccccctttcg ccagctggcg taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag
3721 ttgcgcagcc tgaatggcga atggaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt
3781 taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgactgcgat gagtggcagg
3841 gcggggcgta atttttttaa ggcagttatt ggtgccctta aacgcctggt gctacgcctg
3901 aataagtgat aataagcgga tgaatggcag aaattcgaaa gcaaattcga cccggtcgtc
3961 ggttcagggc agggtcgtta aatagccgct tatgtctatt gctggtttac cggtttattg
4021 actaccggaa gcagtgtgac cgtgtgcttc tcaaatgcct gaggccagtt tgctcaggct
4081 ctccccgtgg aggtaataat tgacgatatg atcatttatt ctgcctccca gagcctgata
4141 aaaacggtga atccgttagc gaggtgccgc cggcttccat tcaggtcgag gtggcccggc
4201 tccatgcacc gcgacgcaac gcggggaggc agacaaggta tagggcggcg aggcggctac
4261 agccgatagt ctggaacagc gcacttacgg gttgctgcgc aacccaagtg ctaccggcgc
4321 ggcagcgtga cccgtgtcgg cggctccaac ggctcgccat cgtccagaaa acacggctca
4381 tcgggcatcg gcaggcgctg ctgcccgcgc cgttcccatt cctccgtttc ggtcaaggct
4441 ggcaggtctg gttccatgcc cggaatgccg ggctggctgg gcggctcctc gccggggccg
4501 gtcggtagtt gctgctcgcc cggatacagg gtcgggatgc ggcgcaggtc gccatgcccc
4561 aacagcgatt cgtcctggtc gtcgtgatca accaccacgg cggcactgaa caccgacagg
4621 cgcaactggt cgcggggctg gccccacgcc acgcggtcat tgaccacgta ggccgacacg
4681 gtgccggggc cgttgagctt cacgacggag atccagcgct cggccaccaa gtccttgact
4741 gcgtattgga ccgtccgcaa agaacgtccg atgagcttgg aaagtgtctt ctggctgacc
4801 accacggcgt tctggtggcc catctgcgcc acgaggtgat gcagcagcat tgccgccgtg
4861 ggtttcctcg caataagccc ggcccacgcc tcatgcgctt tgcgttccgt ttgcacccag
4921 tgaccgggct tgttcttggc ttgaatgccg atttctctgg actgcgtggc catgcttatc
4981 tccatgcggt agggtgccgc acggttgcgg caccatgcgc aatcagctgc aacttttcgg
5041 cagcgcgaca acaattatgc gttgcgtaaa agtggcagtc aattacagat tttctttaac
5101 ctacgcaatg agctattgcg gggggtgccg caatgagctg ttgcgtaccc ccctttttta
5161 agttgttgat ttttaagtct ttcgcatttc gccctatatc tagttctttg gtgcccaaag
5221 aagggcaccc ctgcggggtt cccccacgcc ttcggcgcgg ctccccctcc ggcaaaaagt
5281 ggcccctccg gggcttgttg atcgactgcg cggccttcgg ccttgcccaa ggtggcgctg
5341 cccccttgga acccccgcac tcgccgccgt gaggctcggg gggcaggcgg gcgggcttcg
5401 ccttcgactg cccccactcg cataggcttg ggtcgttcca ggcgcgtcaa ggccaagccg
5461 ctgcgcggtc gctgcgcgag ccttgacccg ccttccactt ggtgtccaac cggcaagcga
5521 agcgcgcagg ccgcaggccg gaggcttttc cccagagaaa attaaaaaaa ttgatggggc
5581 aaggccgcag gccgcgcagt tggagccggt gggtatgtgg tcgaaggctg ggtagccggt
5641 gggcaatccc tgtggtcaag ctcgtgggca ggcgcagcct gtccatcagc ttgtccagca
5701 gggttgtcca cgggccgagc gaagcgagcc agccggtggc cgctcgcggc catcgtccac
5761 atatccacgg gctggcaagg gagcgcagcg accgcgcagg gcgaagcccg gagagcaagc
5821 ccgtagggcg ccgcagccgc cgtaggcggt cacgactttg cgaagcaaag tctagtgagt
5881 atactcaagc attgagtggc ccgccggagg caccgccttg cgctgccccc gtcgagccgg
5941 ttggacacca aaagggaggg gcaggcatgg cggcatacgc gatcatgcga tgcaagaagc
6001 tggcgaaaat gggcaacgtg gcggccagtc tcaagcacgc ctaccgcgag cgcgagacgc
6061 ccaacgctga cgccagcagg acgccagaga acgagcactg ggcggccagc agcaccgatg
6121 aagcgatggg ccgactgcgc gagttgctgc cagagaagcg gcgcaaggac gctgtgttgg
6181 cggtcgagta cgtcatgacg gccagcccgg aatggtggaa gtcggccagc caagaacagc
6241 aggcggcgtt cttcgagaag gcgcacaagt ggctggcgga caagtacggg gcggatcgca
6301 tcgtgacggc cagcatccac cgtgacgaaa ccagcccgca catgaccgcg ttcgtggtgc
6361 cgctgacgca ggacggcagg ctgtcggcca aggagttcat cggcaacaaa gcgcagatga
6421 cccgcgacca gaccacgttt gcggccgctg tggccgatct agggctgcaa cggggcatcg
6481 agggcagcaa ggcacgtcac acgcgcattc aggcgttcta cgaggccctg gagcggccac
6541 cagtgggcca cgtcaccatc agcccgcaag cggtcgagcc acgcgcctat gcaccgcagg
6601 gattggccga aaagctggga atctcaaagc gcgttgagac gccggaagcc gtggccgacc
6661 ggctgacaaa agcggttcgg caggggtatg agcctgccct acaggccgcc gcaggagcgc
6721 gtgagatgcg caagaaggcc gatcaagccc aagagacggc ccgag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBBR1MCS2-Tac-NDH2质粒
别称: pBBR1MCS2-Tac-NDH2
启动子：Tac
复制子: pBBR1
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：广宿主
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pBBR1MCS2-Tac-NDH2质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6765 bp ds-DNA circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBBR1MCS2-Tac-NDH2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6765)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Friday, July 6, 2018 from www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6765
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 458..1252
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
promoter 2033..2061
/note="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
CDS 2108..3388
/codon_start=1
/note="NDH-2"
/translation="MATQLGHKLGRKKKAKITLVDRNHSHLWKPLLHEVATGSLDEGVD
ALSYLAHARNHGFQFQLGSVIDIDREAKTITIAELRDEKGELLVPERKIAYDTLVMALG
STSNDFNTPGVKENCIFLDNPHQARRFHQEMLNLFLKYSANLGANGKVNIAIVGGGATG
VELSAELHNAVKQLHSYGYKGLTNEALNVTLVEAGERILPALPPRISAAAHNELTKLGV
RVLTQTMVTSADEGGLHTKDGEYIEADLMVWAAGIKAPDFLKDIGGLETNRINQLVVEP
TLQTTRDPDIYAIGDCASCPRPEGGFVPPRAQAAHQMATCAMNNILAQMNGKPLKNYQY
KDHGSLVSLSNFSTVGSLMGNLTRGSMMIEGRIARFVYISLYRMHQIALHGYFKTGLMM
LVGSINRVIRPRLKLHAANDENYALAA"
terminator 3422..3469
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(4311..4973)
/codon_start=1
/product="replication protein for the broad-host-range
plasmid pBBR1 from Bordetella bronchiseptica"
/note="pBBR1 Rep"
/translation="MATQSREIGIQAKNKPGHWVQTERKAHEAWAGLIARKPTAAMLLH
HLVAQMGHQNAVVVSQKTLSKLIGRSLRTVQYAVKDLVAERWISVVKLNGPGTVSAYVV
NDRVAWGQPRDQLRLSVFSAAVVVDHDDQDESLLGHGDLRRIPTLYPGEQQLPTGPGEE
PPSQPGIPGMEPDLPALTETEEWERRGQQRLPMPDEPCFLDDGEPLEPPTRVTLPRR"
rep_origin 4974..5743
/note="pBBR1 oriV"
/note="replication origin of the broad-host-range plasmid
pBBR1 from Bordetella bronchiseptica; requires the pBBR1
Rep protein for replication"
ORIGIN
1 accttcggga gcgcctgaag cccgttctgg acgccctggg gccgttgaat cgggatatgc
61 aggccaaggc cgccgcgatc atcaaggccg tgggcgaaaa gctgctgacg gaacagcggg
121 aagtccagcg ccagaaacag gcccagcgcc agcaggaacg cgggcgcgca catttccccg
181 aaaagtgcca cctgggatga atgtcagcta ctgggctatc tggacaaggg aaaacgcaag
241 cgcaaagaga aagcaggtag cttgcagtgg gcttacatgg cgatagctag actgggcggt
301 tttatggaca gcaagcgaac cggaattgcc agctggggcg ccctctggta aggttgggaa
361 gccctgcaaa gtaaactgga tggctttctt gccgccaagg atctgatggc gcaggggatc
421 aagatctgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag atggattgca
481 cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac
541 aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt
601 tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc
661 gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg
721 aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc
781 tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc
841 ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat
901 ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc
961 cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca
1021 tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga
1081 ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat
1141 tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc
1201 tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gagcgggact
1261 ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc
1321 accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg
1381 atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc acccccatgg gcaaatatta
1441 tacgcaaggc gacaaggtgc tgatgccgct ggcgattcag gttcatcatg ccgtttgtga
1501 tggcttccat gtcggcagaa tgcttaatga attacaacag tttttatgca tgcgcccaat
1561 acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt
1621 tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc tcactcatta
1681 ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa ttgtgagcgg
1741 ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccaagcgcg caattaaccc
1801 tcactaaagg gaacaaaagc tgggtaccgg gccccccctc gaggtcgacg gtatcgataa
1861 gcttgatatc gaattcgagc tcggtacctc gcgaatgcat ctagatcaca ttcaccaccc
1921 tgaattgact ctcttccggg cgctatcatg ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga
1981 tggtgtccgg gatctcgacg ctctccctta tgcgactcct gcattaggaa atttgacaat
2041 taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatg tctcatgagc ggatatttca cacaggaaac
2101 agtattcatg gcaacacagc tggggcataa gctgggacgc aagaaaaaag ccaaaattac
2161 gctggtcgat cgtaaccaca gccacctgtg gaaaccgctg ctgcacgaag tggcgactgg
2221 ctcgcttgat gaaggcgtcg atgcgttgag ctatctggcc catgcgcgca atcatggttt
2281 ccagttccag ctgggttccg tcattgatat tgatcgtgaa gcgaaaacaa tcactattgc
2341 agaactgcgc gacgagaaag gtgaactgct ggttccggaa cgtaaaatcg cctatgacac
2401 cctggtaatg gcgctgggta gcacctctaa cgatttcaat acgccaggtg tcaaagagaa
2461 ctgcattttc ctcgataacc cgcaccaggc gcgtcgcttc caccaggaga tgctgaattt
2521 gttcctgaaa tactccgcca acctgggcgc gaatggcaaa gtgaacattg cgattgtcgg
2581 cggcggcgcg acgggtgtag aactctccgc tgaattgcac aacgcggtca agcaactgca
2641 cagctacggt tacaaaggcc tgaccaacga agccctgaac gtaacgctgg tagaagcggg
2701 agaacgtatt ttgcctgcgt taccgccacg tatctctgct gcggcccaca acgagctaac
2761 gaaacttggc gttcgcgtgc tgacgcaaac catggtcacc agtgctgatg aaggcggcct
2821 gcacactaaa gatggcgaat atattgaggc tgatctgatg gtatgggcag ccgggatcaa
2881 agcgccagac ttcctgaaag atatcggtgg tcttgaaact aaccgtatca accagctggt
2941 ggtggaaccg acgctgcaaa ccacccgcga tccagacatt tacgctattg gcgactgcgc
3001 gtcatgcccg cgtccggaag ggggctttgt tccgccgcgt gctcaggctg cacaccagat
3061 ggcgacttgc gcaatgaaca acattctggc gcagatgaac ggtaagccgc tgaaaaatta
3121 tcagtataaa gatcatggtt cgctggtatc gctgtcgaac ttctccaccg tcggtagcct
3181 gatgggtaac ctgacgcgcg gctcaatgat gattgaagga cgaattgcgc gctttgtata
3241 tatctcgcta taccgaatgc atcagattgc gctgcatggt tactttaaaa ccggattaat
3301 gatgctggtg gggagtatta accgcgttat ccgtccgcgt ttgaagttgc atgcagcgaa
3361 cgacgaaaat tacgcccttg cagcgtaatt aacctaggct gctgccaccg ctgagcaata
3421 actagcataa ccccttgggg cctctaaacg ggtcttgagg ggttttttgc tgaaacctca
3481 ggcatttgag aagcacacgg tcacacatcg gatccactag ttctagagcg gccgccaccg
3541 cggtggagct ccaattcgcc ctatagtgag tcgtattacg cgcgctcact ggccgtcgtt
3601 ttacaacgtc gtgactggga aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat
3661 ccccctttcg ccagctggcg taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag
3721 ttgcgcagcc tgaatggcga atggaaattg taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt
3781 taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgactgcgat gagtggcagg
3841 gcggggcgta atttttttaa ggcagttatt ggtgccctta aacgcctggt gctacgcctg
3901 aataagtgat aataagcgga tgaatggcag aaattcgaaa gcaaattcga cccggtcgtc
3961 ggttcagggc agggtcgtta aatagccgct tatgtctatt gctggtttac cggtttattg
4021 actaccggaa gcagtgtgac cgtgtgcttc tcaaatgcct gaggccagtt tgctcaggct
4081 ctccccgtgg aggtaataat tgacgatatg atcatttatt ctgcctccca gagcctgata
4141 aaaacggtga atccgttagc gaggtgccgc cggcttccat tcaggtcgag gtggcccggc
4201 tccatgcacc gcgacgcaac gcggggaggc agacaaggta tagggcggcg aggcggctac
4261 agccgatagt ctggaacagc gcacttacgg gttgctgcgc aacccaagtg ctaccggcgc
4321 ggcagcgtga cccgtgtcgg cggctccaac ggctcgccat cgtccagaaa acacggctca
4381 tcgggcatcg gcaggcgctg ctgcccgcgc cgttcccatt cctccgtttc ggtcaaggct
4441 ggcaggtctg gttccatgcc cggaatgccg ggctggctgg gcggctcctc gccggggccg
4501 gtcggtagtt gctgctcgcc cggatacagg gtcgggatgc ggcgcaggtc gccatgcccc
4561 aacagcgatt cgtcctggtc gtcgtgatca accaccacgg cggcactgaa caccgacagg
4621 cgcaactggt cgcggggctg gccccacgcc acgcggtcat tgaccacgta ggccgacacg
4681 gtgccggggc cgttgagctt cacgacggag atccagcgct cggccaccaa gtccttgact
4741 gcgtattgga ccgtccgcaa agaacgtccg atgagcttgg aaagtgtctt ctggctgacc
4801 accacggcgt tctggtggcc catctgcgcc acgaggtgat gcagcagcat tgccgccgtg
4861 ggtttcctcg caataagccc ggcccacgcc tcatgcgctt tgcgttccgt ttgcacccag
4921 tgaccgggct tgttcttggc ttgaatgccg atttctctgg actgcgtggc catgcttatc
4981 tccatgcggt agggtgccgc acggttgcgg caccatgcgc aatcagctgc aacttttcgg
5041 cagcgcgaca acaattatgc gttgcgtaaa agtggcagtc aattacagat tttctttaac
5101 ctacgcaatg agctattgcg gggggtgccg caatgagctg ttgcgtaccc ccctttttta
5161 agttgttgat ttttaagtct ttcgcatttc gccctatatc tagttctttg gtgcccaaag
5221 aagggcaccc ctgcggggtt cccccacgcc ttcggcgcgg ctccccctcc ggcaaaaagt
5281 ggcccctccg gggcttgttg atcgactgcg cggccttcgg ccttgcccaa ggtggcgctg
5341 cccccttgga acccccgcac tcgccgccgt gaggctcggg gggcaggcgg gcgggcttcg
5401 ccttcgactg cccccactcg cataggcttg ggtcgttcca ggcgcgtcaa ggccaagccg
5461 ctgcgcggtc gctgcgcgag ccttgacccg ccttccactt ggtgtccaac cggcaagcga
5521 agcgcgcagg ccgcaggccg gaggcttttc cccagagaaa attaaaaaaa ttgatggggc
5581 aaggccgcag gccgcgcagt tggagccggt gggtatgtgg tcgaaggctg ggtagccggt
5641 gggcaatccc tgtggtcaag ctcgtgggca ggcgcagcct gtccatcagc ttgtccagca
5701 gggttgtcca cgggccgagc gaagcgagcc agccggtggc cgctcgcggc catcgtccac
5761 atatccacgg gctggcaagg gagcgcagcg accgcgcagg gcgaagcccg gagagcaagc
5821 ccgtagggcg ccgcagccgc cgtaggcggt cacgactttg cgaagcaaag tctagtgagt
5881 atactcaagc attgagtggc ccgccggagg caccgccttg cgctgccccc gtcgagccgg
5941 ttggacacca aaagggaggg gcaggcatgg cggcatacgc gatcatgcga tgcaagaagc
6001 tggcgaaaat gggcaacgtg gcggccagtc tcaagcacgc ctaccgcgag cgcgagacgc
6061 ccaacgctga cgccagcagg acgccagaga acgagcactg ggcggccagc agcaccgatg
6121 aagcgatggg ccgactgcgc gagttgctgc cagagaagcg gcgcaaggac gctgtgttgg
6181 cggtcgagta cgtcatgacg gccagcccgg aatggtggaa gtcggccagc caagaacagc
6241 aggcggcgtt cttcgagaag gcgcacaagt ggctggcgga caagtacggg gcggatcgca
6301 tcgtgacggc cagcatccac cgtgacgaaa ccagcccgca catgaccgcg ttcgtggtgc
6361 cgctgacgca ggacggcagg ctgtcggcca aggagttcat cggcaacaaa gcgcagatga
6421 cccgcgacca gaccacgttt gcggccgctg tggccgatct agggctgcaa cggggcatcg
6481 agggcagcaa ggcacgtcac acgcgcattc aggcgttcta cgaggccctg gagcggccac
6541 cagtgggcca cgtcaccatc agcccgcaag cggtcgagcc acgcgcctat gcaccgcagg
6601 gattggccga aaagctggga atctcaaagc gcgttgagac gccggaagcc gtggccgacc
6661 ggctgacaaa agcggttcgg caggggtatg agcctgccct acaggccgcc gcaggagcgc
6721 gtgagatgcg caagaaggcc gatcaagccc aagagacggc ccgag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4039/pCMV-SPORT6-MAFF人源基因质粒 |
| P4040/pCMV-SPORT6-ARMCX2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4041/pCMV-SPORT6-TMEM183A人源基因质粒 |
| P4042/pCMV-SPORT6-LRIF1（603-2310bp）人源基因质粒 |
| P4043/pCMV-SPORT6-GRAMD2B人源基因质粒 |
| P4044/pCMV-SPORT6-OXCT1人源基因质粒 |
| P4045/pCMV-SPORT6-UTP15（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4046/pCMV-SPORT6-RPS3A人源基因质粒 |
| P4047/pCMV-SPORT6-RAB38（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4048/pCMV-SPORT6-ABRAXAS2人源基因质粒 |
| P4049/pCMV-SPORT6-SMNDC1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Amp pBBR1MCS-1 广宿主质粒 Cam pBBR1MCS-2 广宿主质粒 Kan http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/U23751.1 pBBR1MCS-3 广宿主质粒
系统通常要根据实验目的来考虑，比如表达量高低，目标蛋白的活性，表达产物的纯化方法等等。主要归结在表达载体的选择上。 表达载体 ：我们关心的质粒上的元件包括启动子，多克隆 位点，终止密码，融合Tag(如果有的话)，复制子，筛选标记/报告基因等。通常，载体很贵，我们可以通过实验室之间交换得到免费的载体。但是要小心，辗转多个实验室和多个实验室成员之手的载体是否保持原来的遗传背景?MCS是否还是原来那个MCS?是我们要特别注意的。 复制子： 通常表达载体 都会选用高拷贝的复制子。pSC
，表达产物的纯化方法等等。主要归结在表达载体的选择上。 表达载体 ：我们关心的质粒上的元件包括启动子，多克隆位点，终止密码，融合Tag（如果有的话），复制子，筛选标记/报告基因等。通常，载体很贵，我们可以通过实验室之间交换得到免费的载体。但是要小心，辗转多个实验室和多个实验室成员之手的载体是否保持原来的遗传背景？MCS是否还是原来那个MCS？是我们要特别注意的。 复制子： 通常表达载体都会选用高拷贝的复制子。pSC101类质粒是严谨方式复制，拷贝数低，pCoE1，pMBI(pUC)类
pBBR1MCS2-Tac-NDH2质粒
￥100 - 1000
