pHG52d34.5-CMV-PD-1(b)-mCherry

基本信息
名称：pHG52d34.5-CMV-PD-1(b)-mCherry质粒
别称: pHG52d34.5-CMV-PD-1(b)-mCherry
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：mCherry
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：红色

质粒简介
 pHG52d34.5-CMV-PD-1(b)-mCherry质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                8424 bp ds-DNA     circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pHG52d34.5-CMVPD-1(b)-RFP
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 8424)
  AUTHORS   CLK
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     ORIGDB|GenBank
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8424
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    4..758
                     /note="HSV2d34.5B"
     CDS             complement(1809..2669)
                     /codon_start=1
                     /note="Amp"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        3120..3136
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                     /note="SP6 promoter"
     misc_feature    3152..4457
                     /note="HSV2d34.5A"
     misc_feature    4500..5154
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     misc_feature    5155..5173
                     /note="T7 promoter"
     misc_feature    5248..6588
                     /note="pd-1(b)"
     misc_feature    6598..6654
                     /note="P2A"
     misc_feature    6655..7308
                     /note="pd-1(b)"
     CDS             7309..7383
                     /codon_start=1
                     /note="T2A"
                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGPPDPPVAT"
     CDS             7384..8094
                     /codon_start=1
                     /note="mcherry"
                     /translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
                     TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
                     EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
                     GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
                     EGRHSTGGMDELYK"
     misc_feature    8135..8152
                     /note="Sp6"
     polyA_signal    8154..8385
                     /note="BGH poly A"
ORIGIN
        1 atccgtgtaa ccgccagtcc gtgcttgcct agcgaactca cccgtcccgg ctggcgtgcg
       61 cagcccgggc cgtgttgcgg gccctcttaa ggggcggcgg caggacgggg actcccgccc
      121 cgcctctttt cccccgggga gtcaaccccc ggggggggtg ttttttgggg gggggcgcga
      181 aggcgggcgg cggcggcggg cgggcggcag ggcagccccg cgcgccccct tccccgtccc
      241 tcccccggag ccggccgctc ccccgcgggc gccgcccctc cccccgcgcg ccgcggggct
      301 gccttcccgc gggcgccccc gcgcggcttt tttcccgcgc ccgcccccgc gcggcaggac
      361 ggggactagc aggctgtgcc gcagaccacc acacactccc aagctccccg cccccccgaa
      421 gacgccagtc gcaccaccgc tcgccctcgc agaccagaca gttgcaccaa gcacccgccc
      481 gcccgcacac ggttccccgc caccccctcc ctcccctcca tcccgccgag ctcgcggcag
      541 cccctccccc ccgcgcgcca cggggctgcg gtcccgcggc cgcctccccc gcggccgcct
      601 cccccgcgcc ccgccccggg ggcttccccc gcccctcccc ccgcgcccgc ggccccgagc
      661 tcgcagcagc ccctccctcc cgcgccccgt gccttccctc ccgctcctgc gggggggctc
      721 gggccacctg accttcgtaa cctgcactca ggtcagagag atctgccggt ctccctatag
      781 tgagtcgtat taatttcgat aagccaggtt aacctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg
      841 gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc
      901 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc
      961 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg
     1021 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat
     1081 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag
     1141 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga
     1201 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg
     1261 tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt
     1321 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac
     1381 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc
     1441 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt
     1501 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc
     1561 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
     1621 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
     1681 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
     1741 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
     1801 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
     1861 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
     1921 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
     1981 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
     2041 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
     2101 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
     2161 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
     2221 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
     2281 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
     2341 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
     2401 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
     2461 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
     2521 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
     2581 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
     2641 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
     2701 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
     2761 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt
     2821 atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc
     2881 ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg
     2941 taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt
     3001 cggggctggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatggac
     3061 atattgtcgt tagaacgcgg ctacaattaa tacataacct tatgtatcat acacatacga
     3121 tttaggtgac actatagaac tcgagcagct gcggtgaagg tcgtcgtcag agattcccac
     3181 ctcggtctcc tcctccgagt cgctgctggc gagccactgc atgtcgttga gcatccccca
     3241 ggcgtgcggg gcggcgggct gcttgacaaa gcaacggggg ggatttagag ggcgcggggc
     3301 gtgaggcggg acccccgcgc cgtgtccccc gtgtccctcc ctcaccccgg ccccccgccc
     3361 gctgcttttt gttcggaagg gggggagaaa ggggtccgta accaaaggtg gtctgcgtcc
     3421 tttggattcc gacccctcgt ctccccccct gtcccccgct ctcgggctcc tccctgcctc
     3481 cctcgccccc ccagagggtc ggggggcggc gcacggccca cgggggtccc ccgaccgctt
     3541 aagcgggccg ggggtcggcc ccgtcaagcg tccccgcccc cgagcccacc gcccgcgacc
     3601 acccccaacc cgcagccggg tggtccgggg aaaagggggg gcctgagacc cgggggtcgc
     3661 cctctcaccg tgccgggggt ctgccgcggc ggccgctcgg ggccggggtc cgcccgggag
     3721 ctcgtgccgg gccggggttc catgagccgg ggtagggtag actcgagacg gcggcccgcg
     3781 gtctctctct tgccgggttt tagtctctgt ctctccgggt ctcctcctcc cgccgggccg
     3841 ccgctccgtc gctcgcagtg ccggggtgcg aatgcggccc gaccgtcaca cggggctgcc
     3901 ttatacccgg cgcctatcca ctcccccaaa ggggcggcat ttacgattcc cccaatagcc
     3961 gcgcgccccg gcgggggcgg agggagggaa tccccccctc tcggggcggc cccgtccccg
     4021 gggaccaacc gggtgtactc caagaacccc attagcatgc gccgcccccc gccgacgcag
     4081 atgggagtcc ccccggcgcc ccgccggcgc ggccctgagt ggtgcccgcc cccggggaaa
     4141 aattcattag catactagga agcccagggg accaataggg gccgatcagc ccacccaccc
     4201 ggcggcgcgc gaggctctgc gtgttctgcc aagaaagtaa tcagcataac ccggaacccc
     4261 gagggagtaa ttacgcgggg agcgaggggc cgtccgaacg tttttaatta ccataagcgg
     4321 gaatggcggc ccgttaaaag ctgctaatta ccgcgagcgg gaacgccggc ccattaaaag
     4381 ttgctaatta ccatgcgcgg ggatggcggc cgggaccgcc tattaaaagt ttctaattac
     4441 cataccggga agccggctct agaggatccc cgggtaccga gctcgaattc atcgatgatc
     4501 gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca
     4561 attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta
     4621 aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat
     4681 gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga ctatttacgg
     4741 taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac
     4801 gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt
     4861 cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg
     4921 cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc
     4981 attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt
     5041 aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata
     5101 agcagagctc tctggctaac tagagaaccc actgcttact ggcttatcga aattaatacg
     5161 actcactata gggagaccca agcttggtac cgagctcgga tccactagta acggccgcca
     5221 gtgtgctgga attctgcaga tatcatgcag gtgcagctgg tgcagagcgg cgtggaggtg
     5281 aagaagcccg gcgccagcgt gaaggtgagc tgcaaggcca gcggctacac cttcaccaac
     5341 tactacatgt actgggtgcg gcaggccccc ggccagggcc tggagtggat gggcggcatc
     5401 aaccccagca acggcggcac caacttcaac gagaagttca agaaccgggt gaccctgacc
     5461 accgacagca gcaccaccac cgcctacatg gagctgaaga gcctgcagtt cgacgacacc
     5521 gccgtgtact actgcgcccg gcgggactac cggttcgaca tgggcttcga ctactggggc
     5581 cagggcacca ccgtgaccgt gagcagcgcc agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg
     5641 gccccctgca gccggagcac cagcgagagc accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac
     5701 tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac
     5761 accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg
     5821 cccagcagca gcctgggcac caagacctac acctgcaacg tggaccacaa gcccagcaac
     5881 accaaggtgg acaagcgggt ggagagcaag tacggccccc cctgcccccc ctgccccgcc
     5941 cccgagttcc tgggcggccc cagcgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg
     6001 atgatcagcc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgagcca ggaggacccc
     6061 gaggtgcagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc
     6121 cgggaggagc agttcaacag cacctaccgg gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcaccag
     6181 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgagca acaagggcct gcccagcagc
     6241 atcgagaaga ccatcagcaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg
     6301 ccccccagcc aggaggagat gaccaagaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaagggc
     6361 ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaacg gccagcccga gaacaactac
     6421 aagaccaccc cccccgtgct ggacagcgac ggcagcttct tcctgtacag ccggctgacc
     6481 gtggacaaga gccggtggca ggagggcaac gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc
     6541 ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg agcctgagcc tgggcaaggg cagcggcgcc
     6601 accaacttca gcctgctgaa gcaggccggc gacgtggagg agaaccccgg ccccgagatc
     6661 gtgctgaccc agagccccgc caccctgagc ctgagccccg gcgagcgggc caccctgagc
     6721 tgccgggcca gcaagggcgt gagcaccagc ggctacagct acctgcactg gtaccagcag
     6781 aagcccggcc aggccccccg gctgctgatc tacctggcca gctacctgga gagcggcgtg
     6841 cccgcccggt tcagcggcag cggcagcggc accgacttca ccctgaccat cagcagcctg
     6901 gagcccgagg acttcgccgt gtactactgc cagcacagcc gggacctgcc cctgaccttc
     6961 ggcggcggca ccaaggtgga gatcaagcgg accgtggccg cccccagcgt gttcatcttc
     7021 ccccccagcg acgagcagct gaagagcggc accgccagcg tggtgtgcct gctgaacaac
     7081 ttctaccccc gggaggccaa ggtgcagtgg aaggtggaca acgccctgca gagcggcaac
     7141 agccaggaga gcgtgaccga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct gagcagcacc
     7201 ctgaccctga gcaaggccga ctacgagaag cacaaggtgt acgcctgcga ggtgacccac
     7261 cagggcctga gcagccccgt gaccaagagc ttcaaccggg gcgagtgcga gggcagagga
     7321 agtcttctaa catgcggtga cgtggaggag aatcccggcc ctccggatcc accggtcgcc
     7381 accatggtga gcaagggcga ggaggataac atggccatca tcaaggagtt catgcgcttc
     7441 aaggtgcaca tggagggctc cgtgaacggc cacgagttcg agatcgaggg cgagggcgag
     7501 ggccgcccct acgagggcac ccagaccgcc aagctgaagg tgaccaaggg tggccccctg
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     7801 gtaatgcaga agaagaccat gggctgggag gcctcctccg agcggatgta ccccgaggac
     7861 ggcgccctga agggcgagat caagcagagg ctgaagctga aggacggcgg ccactacgac
     7921 gctgaggtca agaccaccta caaggccaag aagcccgtgc agctgcccgg cgcctacaac
     7981 gtcaacatca agttggacat cacctcccac aacgaggact acaccatcgt ggaacagtac
     8041 gaacgcgccg agggccgcca ctccaccggc ggcatggacg agctgtacaa gtagagcggc
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     8161 tcgctgatca gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc
     8221 cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga
     8281 aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga
     8341 cagcaagggg gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat
     8401 ggcttctgag gcggaaagaa ccag
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3994/pCMV-SPORT6-BIRC2人源基因质粒

P3995/pCMV-SPORT6-RWDD4（1点突变）人源基因质粒

P3996/pCMV-SPORT6-ZNF707（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3997/pCMV-SPORT6-LUC7L2（1点突变）人源基因质粒

P3998/pCMV-SPORT6-EFCAB7人源基因质粒

P3999/pCMV-SPORT6-CTH人源基因质粒

P4000/pCMV-SPORT6-EIF3D人源基因质粒

P4001/pCMV-SPORT6-VAT1人源基因质粒

P4002/pCMV-SPORT6-NR4A1人源基因质粒

P4003/pCMV-SPORT6-KIAA0020人源基因质粒

P4004/pCMV-SPORT6-KRCC1人源基因质粒

P4005/pCMV-SPORT6-RPS2人源基因质粒