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- Xybio
- 上海
- P1015
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#21229
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pLVX-aMHC-eGFP-Rex-Neo小鼠启动子质粒
别称: Plasmid#21229
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,慢病毒
载体用途：启动子检测
基因种属：小鼠
基因类型：Promoter
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pLVX-aMHC-eGFP-Rex-Neo质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4888/pCMV-SPORT6-SFRS14人源基因质粒 |
| P4889/pCMV-SPORT6-SLC26A6人源基因质粒 |
| P4890/pCMV-SPORT6-FKBP10人源基因质粒 |
| P4891/pCMV-SPORT6-NCAPG2人源基因质粒 |
| P3943/pCMV-SPORT6-MFAP2人源基因质粒 |
| P3944/pCMV-SPORT6-MLST8人源基因质粒 |
| P3945/pCMV-SPORT6-CCNK人源基因质粒 |
| P3946/pCMV-SPORT6-PEPD人源基因质粒 |
| P3947/pCMV-SPORT6-VIPAS39人源基因质粒 |
| P3948/pCMV-SPORT6-GALM人源基因质粒 |
| P3949/pCMV-SPORT6-CD73人源基因质粒 |
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文献和实验就可以了。 如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题 你可以根据质粒图谱看，定向将启动子CMV后 将基因定向克隆进去，利用酶切反应及连接的特异性。 ps： 感觉你对自己的实验目的都不是很清楚，这很危险！宁可不做，就怕费力不讨好！ bigbang_0_0 用pEGFP质粒，很适合GFP标签的蛋白的表达； 如果做稳定转染，需要用G418筛选标记 (neo r)
蛋白表达 的资源。 因此，稳转后再转染 另一质粒，应该很难获得和初次转染一样的高表达效率。 同时，相同真核启动子之间是否也有直接竞争关系?这个也有可能的。我们看到成熟的商品化载体在同时表达两种蛋白产物时(如EGFP和neo)，均有意采用不同启动子和不同的转录终止区。从pEGFP-N1的载体图可以看出。这说明这种竞争很可能是存在的而且应该避免。楼主先后转染的质粒可能也是同一启动子启动目的基因的，可以尝试第二种质粒换一个启动子试试，例如TK(胸苷激酶)启动子启动的pGL
后再转染另一质粒，应该很难获得和初次转染一样的高表达效率。 同时，相同真核启动子之间是否也有直接竞争关系？这个也有可能的。我们看到成熟的商品化载体在同时表达两种蛋白产物时（如EGFP和neo），均有意采用不同启动子和不同的转录终止区。从pEGFP-N1的载体图可以看出。这说明这种竞争很可能是存在的而且应该避免。楼主先后转染的质粒可能也是同一启动子启动目的基因的，可以尝试第二种质粒换一个启动子试试，例如TK（胸苷激酶）启动子启动的pGL3-promotor
