pSIH1-ControlshRNA-Puro干扰质粒

基本信息
名称：pSIH1-ControlshRNA-Puro干扰质粒
别称: pSIH1-Control-shRNA-Puro
启动子：H1
复制子: pUC
终止子:  5LTR (truncated) ,SV40 poly(A) signal
质粒分类:  RNA文库质粒；RNA其它质粒；shRNA其它质粒
质粒大小：7102bp
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度

表达宿主:	293T等哺乳细胞
培养条件:	37℃，5%CO2
诱导方式:	无需诱导
5'测序引物:	H1-F（TCGCTATGTGTTCTGGGAAA）
3'测序引物:	SV40-polyA-R（GAAATTTGTGATGCTATTGC）
备注:	本质粒由淼灵质粒平台提供

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,慢病毒
载体用途：干扰沉默
基因种属：
基因类型：shRNA
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：

质粒简介
pSIH1-ControlshRNA质粒是pSIH1-H1-puro载体的阳性对照质粒，pSIH1-H1-puro是一个哺乳细胞慢病毒RNA干扰质粒。H1启动shRNA的转录，可特异性的干扰目的蛋白的表达。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞，也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Puro筛选标记，可用嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7102 bp ds-DNA    circular SYN 09-七月-2017
DEFINITION  .
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pSIH1-ControlshRNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7102)
  AUTHORS   MiaoLingBio
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2017年7月9日 from MiaoLingPlasmid
            http://www.snapgene.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7102
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     LTR             234..414
                     /note="5' LTR (truncated)"
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    458..583
                     /note="HIV-1 Psi"
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                     type 1"
     misc_feature    1076..1309
                     /note="RRE"
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                     cytoplasm."
     misc_feature    1798..1915
                     /note="cPPT/CTS"
                     /note="central polypurine tract and central termination 
                     sequence of HIV-1"
     promoter        2005..2208
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             2279..2878
                     /codon_start=1
                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"
                     /product="puromycin N-acetyltransferase"
                     /note="Puro"
                     /note="confers resistance to puromycin"
                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
     misc_feature    2885..3473
                     /note="WPRE"
                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 
                     regulatory element"
     misc_feature    3726..3816
                     /note="H1 promoter"
     misc_feature    3825..3881
                     /note="ControlshRNA"
     LTR             3912..4092
                     /note="5' LTR (truncated)"
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     polyA_signal    4164..4285
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      4304..4439
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     rep_origin      complement(4879..5467)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(5638..6498)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="Amp"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(6499..6603)
                     /gene="bla"
                     /note="Amp promoter"
ORIGIN
        1 acgcgtgtag tcttatgcaa tactcttgta gtcttgcaac atggtaacga tgagttagca
       61 acatgcctta caaggagaga aaaagcaccg tgcatgccga ttggtggaag taaggtggta
      121 cgatcgtgcc ttattaggaa ggcaacagac gggtctgaca tggattggac gaaccactga
      181 attgccgcat tgcagagata ttgtatttaa gtgcctagct cgatacaata aacgggtctc
      241 tctggttaga ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta
      301 agcctcaata aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact
      361 ctggtaacta gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg
      421 cccgaacagg gacctgaaag cgaaagggaa accagagctc tctcgacgca ggactcggct
      481 tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt
      541 gactagcgga ggctagaagg agagagatgg gtgcgagagc gtcagtatta agcgggggag
      601 aattagatcg cgatgggaaa aaattcggtt aaggccaggg ggaaagaaaa aatataaatt
      661 aaaacatata gtatgggcaa gcagggagct agaacgattc gcagttaatc ctggcctgtt
      721 agaaacatca gaaggctgta gacaaatact gggacagcta caaccatccc ttcagacagg
      781 atcagaagaa cttagatcat tatataatac agtagcaacc ctctattgtg tgcatcaaag
      841 gatagagata aaagacacca aggaagcttt agacaagata gaggaagagc aaaacaaaag
      901 taagaccacc gcacagcaag cggccgctga tcttcagacc tggaggagga gatatgaggg
      961 acaattggag aagtgaatta tataaatata aagtagtaaa aattgaacca ttaggagtag
     1021 cacccaccaa ggcaaagaga agagtggtgc agagagaaaa aagagcagtg ggaataggag
     1081 ctttgttcct tgggttcttg ggagcagcag gaagcactat gggcgcagcc tcaatgacgc
     1141 tgacggtaca ggccagacaa ttattgtctg gtatagtgca gcagcagaac aatttgctga
     1201 gggctattga ggcgcaacag catctgttgc aactcacagt ctggggcatc aagcagctcc
     1261 aggcaagaat cctggctgtg gaaagatacc taaaggatca acagctcctg gggatttggg
     1321 gttgctctgg aaaactcatt tgcaccactg ctgtgccttg gaatgctagt tggagtaata
     1381 aatctctgga acagattgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
     1441 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
     1501 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
     1561 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
     1621 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
     1681 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
     1741 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatctcgac ggttaacttt
     1801 taaaagaaaa ggggggattg gggggtacag tgcaggggaa agaatagtag acataatagc
     1861 aacagacata caaactaaag aattacaaaa acaaattaca aaaattcaaa attttatcga
     1921 tactagtatt atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac
     1981 gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga
     2041 tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg
     2101 ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg
     2161 caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctcg tttagtgaac
     2221 cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc tccatagaag attctagaat
     2281 gaccgagtac aagcccacgg tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtcccca gggccgtacg
     2341 caccctcgcc gccgcgttcg ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg atccggaccg
     2401 ccacatcgag cgggtcaccg agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg ggctcgacat
     2461 cggcaaggtg tgggtcgcgg acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca cgccggagag
     2521 cgtcgaagcg ggggcggtgt tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt tgagcggttc
     2581 ccggctggcc gcgcagcaac agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc ccaaggagcc
     2641 cgcgtggttc ctggccaccg tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg gtctgggcag
     2701 cgccgtcgtg ctccccggag tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg ccttcctgga
     2761 gacctccgcg ccccgcaacc tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg tcaccgccga
     2821 cgtcgaggtg cccgaaggac cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg gtgcctgagt
     2881 cgacaatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg actggtattc ttaactatgt
     2941 tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct ttgtatcatg ctattgcttc
     3001 ccgtatggct ttcattttct cctccttgta taaatcctgg ttgctgtctc tttatgagga
     3061 gttgtggccc gttgtcaggc aacgtggcgt ggtgtgcact gtgtttgctg acgcaacccc
     3121 cactggttgg ggcattgcca ccacctgtca gctcctttcc gggactttcg ctttccccct
     3181 ccctattgcc acggcggaac tcatcgccgc ctgccttgcc cgctgctgga caggggctcg
     3241 gctgttgggc actgacaatt ccgtggtgtt gtcggggaag ctgacgtcct ttccatggct
     3301 gctcgcctgt gttgccacct ggattctgcg cgggacgtcc ttctgctacg tcccttcggc
     3361 cctcaatcca gcggaccttc cttcccgcgg cctgctgccg gctctgcggc ctcttccgca
     3421 tcttcgcctt cgccctcaga cgagtcggat ctccctttgg gccgcctccc cgcctggaat
     3481 taattcgagc tcggtacctt taagaccaat gacttacaag gcagctgtag atcttagcca
     3541 ctttttaaaa gaaaaggggg gactggaagg gctaattcac tcccaacgat gtcaagaatt
     3601 ggaacgctga cgtcatcaac ccgctccaag gaatcgcggg cccagtgtca ctaggcggga
     3661 acacccagcg cgcgtgcgcc ctggcaggaa gatggctgtg agggacaggg gagtggcgcc
     3721 ctgcaatatt tgcatgtcgc tatgtgttct gggaaatcac cataaacgtg aaatgtcttt
     3781 ggatttggga atcttataag ttctgtatga gaccacttgg atccaatagc gactaaacac
     3841 atcaattcaa gagattgatg tgtttagtcg ctattttttt tgaattcttc gatctgcttt
     3901 ttgcttctac tgggtctctc tggttagacc agatctgagc ctgggagctc tctggctaac
     3961 tagggaaccc actgcttaag cctcaataaa gcttgccttg agtgcttcaa gtagtgtgtg
     4021 cccgtctgtt gtgtgactct ggtaactaga gatccctcag acccttttag tcagtgtgga
     4081 aaatctctag cagtagtagt tcatgtcatc ttattattca gtatttataa cttgcaaaga
     4141 aatgaatatc agagagtgag aggaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa
     4201 gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt
     4261 tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctggctcta gctatcccgc ccctaactcc
     4321 gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc
     4381 cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct
     4441 agacttttgc agagacggcc caaattcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa
     4501 ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg
     4561 gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca
     4621 gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg
     4681 tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
     4741 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
     4801 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
     4861 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
     4921 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
     4981 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
     5041 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
     5101 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
     5161 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
     5221 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
     5281 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
     5341 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
     5401 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
     5461 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
     5521 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
     5581 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
     5641 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
     5701 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
     5761 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
     5821 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
     5881 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
     5941 tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
     6001 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
     6061 tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat
     6121 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
     6181 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
     6241 ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat
     6301 cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag
     6361 ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt
     6421 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
     6481 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
     6541 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
     6601 gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga cgtctaagaa accattatta tcatgacatt
     6661 aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtctc gcgcgtttcg gtgatgacgg
     6721 tgaaaacctc tgacacatgc agctcccgga gacggtcaca gcttgtctgt aagcggatgc
     6781 cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct
     6841 taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc
     6901 gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgccat tcgccattca ggctgcgcaa
     6961 ctgttgggaa gggcgatcgg tgcgggcctc ttcgctatta cgccagctgg cgaaaggggg
     7021 atgtgctgca aggcgattaa gttgggtaac gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa
     7081 aacgacggcc agtgccaagc tg
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3881/pCMV-SPORT6-GPRASP2人源基因质粒

P3882/pCMV-SPORT6-PSMD3（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3883/pCMV-SPORT6-MLXIPL人源基因质粒

P3884/pCMV-SPORT6-PUS7（1同义突变)人源基因质粒

P3885/pCMV-SPORT6-DISP1人源基因质粒

P3886/pCMV-SPORT6-SH2B1人源基因质粒

P3887/pCMV-SPORT6-BCL2（1同义突变）人源基因质粒

P3888/pCMV-SPORT6-PUF60(2点突变）人源基因质粒

P3889/pCMV-SPORT6-EIF2B5（1点突变）人源基因质粒

P3890/pCMV-SPORT6-CHRNB1人源基因质粒

P3891/pCMV-SPORT6-SERPINE1人源基因质粒

P3892/pCMV-SPORT6-ARMC8人源基因质粒