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- Xybio
- 上海
- P1887
- 2025年06月28日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#50795
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCAG-GBP1-10gly-lexADBD基因质粒
别称: Plasmid#50795
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pCAG-GBP1-10gly-lexADBD质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1142/pDsRed2-Dusp6人源基因质粒 |
| P1143/pDsRed2-FMR1人源基因质粒 |
| P1144/pEGFP-FXR2人源基因质粒 |
| P1153/pLEGFP-WT-STAT3人源基因质粒 |
| P4833/pECMV-3×FLAG-SDC1人源基因质粒 |
| P1154/pCMV-FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1166/pECMV-3×FLAG-LGALS13人源基因质粒 |
| P1167/pECMV-3×FLAG-IL4人源基因质粒 |
| P1168/pECMV-3×FLAG-IL6人源基因质粒 |
| P3802/pECMV-3×FLAG-MED10人源基因质粒 |
| P4927/pECMV-3×FLAG-YTHDF3人源基因质粒 |
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文献和实验定好。由于表皮富含抗原提呈细胞而常被选作基因枪注入的靶位。由于基因枪技术能更好地模拟外源异物入侵机体的自然过程,使DNA疫苗更有效的发生转染和有效的抗原提呈相结合,因此成为目前广泛应用且十分高效的免疫方法,它比普通的注射法低 2～3个数量级的DNA量即可产生较高的保护作用。 Leitner等将编码疟原虫环子孢子抗原的质粒通过肌注途径和基因枪介导的表皮途径免疫BALB/C小鼠。结果表明：表皮免疫产生的抗体及保护效率都显著高于肌注途径。同时还发现,就间隔时间及免疫次数而言,表皮途径以 45天为间隔及三次
。虽然肌肉组织的抗原提呈能力较低,但对质粒DNA的吸收和表达效率很高,并且简单快捷,是最主要的免疫方法之一。为进一步提高肌肉细胞对DNA的吸收表达及降低个体差异,有些研究者选用了普鲁卡因和心肌毒素等再生诱导剂,或在注射前使用25%的蔗糖溶液。Levy等采用纵向肌肉注射方式,即在强光照射下充分暴露肌纤维走向和肌肉组织的结构,使注射方向与肌纤维走向平行,避开结缔组织,将DNA注射到肌腹中，该方法可使蛋白质的表达水平提高100倍以上。但免疫效果却不一定好。由于表皮富含抗原提呈细胞而常被选作基因枪注入的靶位
葡萄糖异构酶（GI）在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后，用双引物法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸（Pro138）替代Gly138，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达，结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍；最适反应温度提高10～12℃；酶比活相同。据分析，Pro替代Gly138后，可能由于引入了一个吡咯环，该侧链刚好能够填充于Gly138附近的空洞，使蛋白质空间结构更具刚性，从而提高了酶的热稳定性。 融合蛋白质 脑啡肽
