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- Xybio
- 上海
- P1889
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#46884
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pMA2775大肠基因质粒
别称: Plasmid#46884
启动子：TRE
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞,慢病毒
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Puro
荧光蛋白：
质粒简介
pMA2775质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3725/pCMV-SPORT6-VASH1人源基因质粒 |
| P3726/pCMV-SPORT6-ATF4人源基因质粒 |
| P3727/pCMV-SPORT6-IPO13（1同义突变1点突变）人源基因质粒 |
| P3728/pCMV-SPORT6-TMEFF2人源基因质粒 |
| P3729/pCMV-SPORT6-DOK5人源基因质粒 |
| P3730/pCMV-SPORT6-VIRMA（1842-5439bp1同义突变）人源基因质粒 |
| P3731/pCMV-SPORT6-ECT2人源基因质粒 |
| P3732/pCMV-SPORT6-TINAGL1（29-1089bp）人源基因质粒 |
| P3820/pCMV-SPORT6-SEC23B人源基因质粒 |
| P3796/pCMV-SPORT6-HSD17B8人源基因质粒 |
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文献和实验需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源：QIAGEN 凯杰
1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带，这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋，线性，开环等多种不同的形态，所以在电泳时常看到三条不同大小的条带，而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态，可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态；右图为质粒电泳图 2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关，比如： ①在加入裂解缓冲液后，剧烈震荡导致大肠杆菌基因
的 DNA 闯进受体细胞，受体细胞就会把它「消灭」。当外来的 DNA 进入大肠杆菌时，大肠杆菌内部的内切酶就会使其「粉身碎骨」。因此，目的基因的直接导入往往不通。在这种情况下，生物工程师们就要采用 DNA 重组技术。首先将目的基因与质粒经过内切酶的「裁剪」，然后靠连接酶的作用，将目的基因和质粒（或病毒 DNA）重新组合起来形成重组 DNA。 重组 DNA 就能在质粒（或病毒 DNA）的「带领」下进入受体细胞。基因工程的操作步骤包括 4 步：获取目的基因、重组 DNA、将拼好的 DNA 送入受
