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- 上海
- P3006
- 2026年04月17日
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- 详细信息
- 询价记录
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- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#60240
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pTXB1-Tn5大肠基因质粒
别称: Plasmid#60240
启动子：T7
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pTXB1-Tn5大肠基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8082 bp ds-DNA circular SYN 04-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pTXB1-Tn5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8082)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8082
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(142..333)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(890..1972)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(1973..2050)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
terminator 2203..2289
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2386..2472
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2569..2655
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2752..2838
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2935..3021
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 3156..3174
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 3175..3199
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 3243..4670
/codon_start=1
/product="transposase from the bacterial Tn5 transposon
(Reznikoff, 1993)"
/note="Tn5 transposase"
/translation="MITSALHRAADWAKSVFSSAALGDPRRTARLVNVAAQLAKYSGKS
ITISSEGSKAMQEGAYRFIRNPNVSAEAIRKAGAMQTVKLAQEFPELLAIEDTTSLSYR
HQVAEELGKLGSIQDKSRGWWVHSVLLLEATTFRTVGLLHQEWWMRPDDPADADEKESG
KWLAAAATSRLRMGSMMSNVIAVCDREADIHAYLQDKLAHNERFVVRSKHPRKDVESGL
YLYDHLKNQPELGGYQISIPQKGVVDKRGKRKNRPARKASLSLRSGRITLKQGNITLNA
VLAEEINPPKGETPLKWLLLTSEPVESLAQALRVIDIYTHRWRIEEFHKAWKTGAGAER
QRMEEPDNLERMVSILSFVAVRLLQLRESFTPPQALRAQGLLKEAEHVESQSAETVLTP
DECQLLGYLDKGKRKRKEKAGSLQWAYMAIARLGGFMDSKRTGIASWGALWEGWEALQS
KLDGFLAAKDLMAQGIKI"
CDS 4671..5264
/codon_start=1
/gene="Mycobacterium xenopi gyrA"
/product="modified GyrA intein (Southworth et al., 1999)"
/note="Mxe GyrA intein"
/note="N-terminal cleavage of this intein can be induced by
thiols."
/translation="CITGDALVALPEGESVRIADIVPGARPNSDNAIDLKVLDRHGNPV
LADRLFHSGEHPVYTVRTVEGLRVTGTANHPLLCLVDVAGVPTLLWKLIDEIKPGDYAV
IQRSAFSVDCAGFARGKPEFAPTTYTVGVPGLVRFLEAHHRDPDAQAIADELTDGRFYY
AKVASVTDAGVQPVYSLRVDTADHAFITNGFVSHA"
CDS 5295..5450
/codon_start=1
/gene="Bacillus circulans chiA"
/product="chitin binding domain from chitinase A1 (Watanabe
et al., 1994)"
/note="CBD"
/translation="TTNPGVSAWQVNTAYTAGQLVTYNGKTYKCLQPHTSLAGWEPSNV
PALWQLQ"
terminator 5529..5576
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
promoter 5636..5740
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 5741..6601
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin complement(6643..7156)
/direction=LEFT
/note="M13 ori"
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
rep_origin 7267..7855
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 atacactccg ctatcgctac gtgactgggt catggctgcg ccccgacacc cgccaacacc
61 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
121 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgaggca
181 gctgcggtaa agctcatcag cgtggtcgtg cagcgattca cagatgtctg cctgttcatc
241 cgcgtccagc tcgttgagtt tctccagaag cgttaatgtc tggcttctga taaagcgggc
301 catgttaagg gcggtttttt cctgtttggt cactgatgcc tccgtgtaag ggggatttct
361 gttcatgggg gtaatgatac cgatgaaacg agagaggatg ctcacgatac gggttactga
421 tgatgaacat gcccggttac tggaacgttg tgagggtaaa caactggcgg tatggatgcg
481 gcgggaccag agaaaaatca ctcagggtca atgccagccg aacgccagca agacgtagcc
541 cagcgcgtcg gccgccatgc cggcgataat ggcctgcttc tcgccgaaac gtttggtggc
601 gggaccagtg acgaaggctt gagcgagggc gtgcaagatt ccgaataccg caagcgacag
661 gccgatcatc gtcgcgctcc agcgaaagcg gtcctcgccg aaaatgaccc agagcgctgc
721 cggcacctgt cctacgagtt gcatgataaa gaagacagtc ataagtgcgg cgacgatagt
781 catgccccgc gcccaccgga aggagctgac tgggttgaag gctctcaagg gcatcggtcg
841 agatcccggt gcctaatgag tgagctaact tacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc
901 tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag
961 aggcggtttg cgtattgggc gccagggtgg tttttctttt caccagtgag acgggcaaca
1021 gctgattgcc cttcaccgcc tggccctgag agagttgcag caagcggtcc acgctggttt
1081 gccccagcag gcgaaaatcc tgtttgatgg tggttaacgg cgggatataa catgagctgt
1141 cttcggtatc gtcgtatccc actaccgaga tatccgcacc aacgcgcagc ccggactcgg
1201 taatggcgcg cattgcgccc agcgccatct gatcgttggc aaccagcatc gcagtgggaa
1261 cgatgccctc attcagcatt tgcatggttt gttgaaaacc ggacatggca ctccagtcgc
1321 cttcccgttc cgctatcggc tgaatttgat tgcgagtgag atatttatgc cagccagcca
1381 gacgcagacg cgccgagaca gaacttaatg ggcccgctaa cagcgcgatt tgctggtgac
1441 ccaatgcgac cagatgctcc acgcccagtc gcgtaccgtc ttcatgggag aaaataatac
1501 tgttgatggg tgtctggtca gagacatcaa gaaataacgc cggaacatta gtgcaggcag
1561 cttccacagc aatggcatcc tggtcatcca gcggatagtt aatgatcagc ccactgacgc
1621 gttgcgcgag aagattgtgc accgccgctt tacaggcttc gacgccgctt cgttctacca
1681 tcgacaccac cacgctggca cccagttgat cggcgcgaga tttaatcgcc gcgacaattt
1741 gcgacggcgc gtgcagggcc agactggagg tggcaacgcc aatcagcaac gactgtttgc
1801 ccgccagttg ttgtgccacg cggttgggaa tgtaattcag ctccgccatc gccgcttcca
1861 ctttttcccg cgttttcgca gaaacgtggc tggcctggtt caccacgcgg gaaacggtct
1921 gataagagac accggcatac tctgcgacat cgtataacgt tactggtttc acattcacca
1981 ccctgaattg actctcttcc gggcgctatc atgccatacc gcgaaaggtt ttgcgccatt
2041 cgatggtgtc cgggatctcg acgctctccc ttatgcgact cctgcattag gaagcagccc
2101 agtagtaggt tgaggccgtt gagcaccgcc gccgcaagga atggtgcatg ccggcatgcc
2161 gccctttcgt cttcaagaat taattcccaa ttccccaggc atcaaataaa acgaaaggct
2221 cagtcgaaag actgggcctt tcgttttatc tgttgtttgt cggtgaacgc tctcctgagt
2281 aggacaaatc cgccgggagc ggatttgaac gttgcgaagc aacggcccgg agggtggcgg
2341 gcaggacgcc cgccataaac tgccaggaat taattcccca ggcatcaaat aaaacgaaag
2401 gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt atctgttgtt tgtcggtgaa cgctctcctg
2461 agtaggacaa atccgccggg agcggatttg aacgttgcga agcaacggcc cggagggtgg
2521 cgggcaggac gcccgccata aactgccagg aattaattcc ccaggcatca aataaaacga
2581 aaggctcagt cgaaagactg ggcctttcgt tttatctgtt gtttgtcggt gaacgctctc
2641 ctgagtagga caaatccgcc gggagcggat ttgaacgttg cgaagcaacg gcccggaggg
2701 tggcgggcag gacgcccgcc ataaactgcc aggaattaat tccccaggca tcaaataaaa
2761 cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct
2821 ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca acggcccgga
2881 gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggaatt aattccccag gcatcaaata
2941 aaacgaaagg ctcagtcgaa agactgggcc tttcgtttta tctgttgttt gtcggtgaac
3001 gctctcctga gtaggacaaa tccgccggga gcggatttga acgttgcgaa gcaacggccc
3061 ggagggtggc gggcaggacg cccgccataa actgccagga attggggatc ggaattaatt
3121 cccggtttaa accggggatc tcgatcccgc gaaattaata cgactcacta taggggaatt
3181 gtgagcggat aacaattccc ctctagaaat aattttgtta actttaagaa ggagatatac
3241 atatgattac cagtgcactg catcgtgcgg cggattgggc gaaaagcgtg ttttctagtg
3301 ctgcgctggg tgatccgcgt cgtaccgcgc gtctggtgaa tgttgcggcg caactggcca
3361 aatatagcgg caaaagcatt accattagca gcgaaggcag caaagccatg caggaaggcg
3421 cgtatcgttt tattcgtaat ccgaacgtga gcgcggaagc gattcgtaaa gcgggtgcca
3481 tgcagaccgt gaaactggcc caggaatttc cggaactgct ggcaattgaa gataccacct
3541 ctctgagcta tcgtcatcag gtggcggaag aactgggcaa actgggtagc attcaggata
3601 aaagccgtgg ttggtgggtg catagcgtgc tgctgctgga agcgaccacc tttcgtaccg
3661 tgggcctgct gcatcaagaa tggtggatgc gtccggatga tccggcggat gcggatgaaa
3721 aagaaagcgg caaatggctg gccgctgctg caacttcgcg tctgagaatg ggcagcatga
3781 tgagcaacgt gattgcggtg tgcgatcgtg aagcggatat tcatgcgtat ctgcaagata
3841 aactggccca taacgaacgt tttgtggtgc gtagcaaaca tccgcgtaaa gatgtggaaa
3901 gcggcctgta tctgtatgat cacctgaaaa accagccgga actgggcggc tatcagatta
3961 gcattccgca gaaaggcgtg gtggataaac gtggcaaacg taaaaaccgt ccggcgcgta
4021 aagcgagcct gagcctgcgt agcggccgta ttaccctgaa acagggcaac attaccctga
4081 acgcggtgct ggccgaagaa attaatccgc cgaaaggcga aaccccgctg aaatggctgc
4141 tgctgaccag cgagccggtg gaaagtctgg cccaagcgct gcgtgtgatt gatatttata
4201 cccatcgttg gcgcattgaa gaatttcaca aagcgtggaa aacgggtgcg ggtgcggaac
4261 gtcagcgtat ggaagaaccg gataacctgg aacgtatggt gagcattctg agctttgtgg
4321 cggtgcgtct gctgcaactg cgtgaatctt ttactccgcc gcaagcactg cgtgcgcagg
4381 gcctgctgaa agaagcggaa cacgttgaaa gccagagcgc ggaaaccgtg ctgaccccgg
4441 atgaatgcca actgctgggc tatctggata aaggcaaacg caaacgcaaa gaaaaagcgg
4501 gcagcctgca atgggcgtat atggcgattg cgcgtctggg cggctttatg gatagcaaac
4561 gtaccggcat tgcgagctgg ggtgcgctgt gggaaggttg ggaagcgctg caaagcaaac
4621 tggatggctt tctggccgcg aaagacctga tggcgcaggg cattaaaatc tgcatcacgg
4681 gagatgcact agttgcccta cccgagggcg agtcggtacg catcgccgac atcgtgccgg
4741 gtgcgcggcc caacagtgac aacgccatcg acctgaaagt ccttgaccgg catggcaatc
4801 ccgtgctcgc cgaccggctg ttccactccg gcgagcatcc ggtgtacacg gtgcgtacgg
4861 tcgaaggtct gcgtgtgacg ggcaccgcga accacccgtt gttgtgtttg gtcgacgtcg
4921 ccggggtgcc gaccctgctg tggaagctga tcgacgaaat caagccgggc gattacgcgg
4981 tgattcaacg cagcgcattc agcgtcgact gtgcaggttt tgcccgcggg aaacccgaat
5041 ttgcgcccac aacctacaca gtcggcgtcc ctggactggt gcgtttcttg gaagcacacc
5101 accgagaccc ggacgcccaa gctatcgccg acgagctgac cgacgggcgg ttctactacg
5161 cgaaagtcgc cagtgtcacc gacgccggcg tgcagccggt gtatagcctt cgtgtcgaca
5221 cggcagacca cgcgtttatc acgaacgggt tcgtcagcca cgctactggc ctcaccggtc
5281 tgaactcagg cctcacgaca aatcctggtg tatccgcttg gcaggtcaac acagcttata
5341 ctgcgggaca attggtcaca tataacggca agacgtataa atgtttgcag ccccacacct
5401 ccttggcagg atgggaacca tccaacgttc ctgccttgtg gcagcttcaa tgactgcagg
5461 aaggggatcc ggctgctaac aaagcccgaa aggaagctga gttggctgct gccaccgctg
5521 agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga
5581 aaggaggaac tatatccgga taactacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg
5641 aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata
5701 accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg
5761 tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac
5821 gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact
5881 ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt tcccaatgat
5941 gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtgttgacg ccgggcaaga
6001 gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac
6061 agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat
6121 gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac
6181 cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct
6241 gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac
6301 gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga
6361 ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg
6421 gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact
6481 ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac
6541 tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta
6601 actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaccccggt tgataatcag
6661 aaaagcccca aaaacaggaa gattgtataa gcaaatattt aaattgtaaa cgttaatatt
6721 ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa
6781 atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag tgttgttcca
6841 gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc
6901 gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt tttggggtcg
6961 aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg
7021 ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg
7081 gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg
7141 ccgctacagg gcgcgtaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa
7201 aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg
7261 atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc
7321 gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac
7381 tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca
7441 ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt
7501 ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc
7561 ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg
7621 aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc
7681 cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac
7741 gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct
7801 ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc
7861 cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt
7921 tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac
7981 cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag ctatggtgca
8041 ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat agttaagcca gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pTXB1-Tn5大肠基因质粒
别称: Plasmid#60240
启动子：T7
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：大肠杆菌
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pTXB1-Tn5大肠基因质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8082 bp ds-DNA circular SYN 04-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pTXB1-Tn5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8082)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8082
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS complement(142..333)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
CDS complement(890..1972)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(1973..2050)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
terminator 2203..2289
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2386..2472
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2569..2655
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2752..2838
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2935..3021
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 3156..3174
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 3175..3199
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 3243..4670
/codon_start=1
/product="transposase from the bacterial Tn5 transposon
(Reznikoff, 1993)"
/note="Tn5 transposase"
/translation="MITSALHRAADWAKSVFSSAALGDPRRTARLVNVAAQLAKYSGKS
ITISSEGSKAMQEGAYRFIRNPNVSAEAIRKAGAMQTVKLAQEFPELLAIEDTTSLSYR
HQVAEELGKLGSIQDKSRGWWVHSVLLLEATTFRTVGLLHQEWWMRPDDPADADEKESG
KWLAAAATSRLRMGSMMSNVIAVCDREADIHAYLQDKLAHNERFVVRSKHPRKDVESGL
YLYDHLKNQPELGGYQISIPQKGVVDKRGKRKNRPARKASLSLRSGRITLKQGNITLNA
VLAEEINPPKGETPLKWLLLTSEPVESLAQALRVIDIYTHRWRIEEFHKAWKTGAGAER
QRMEEPDNLERMVSILSFVAVRLLQLRESFTPPQALRAQGLLKEAEHVESQSAETVLTP
DECQLLGYLDKGKRKRKEKAGSLQWAYMAIARLGGFMDSKRTGIASWGALWEGWEALQS
KLDGFLAAKDLMAQGIKI"
CDS 4671..5264
/codon_start=1
/gene="Mycobacterium xenopi gyrA"
/product="modified GyrA intein (Southworth et al., 1999)"
/note="Mxe GyrA intein"
/note="N-terminal cleavage of this intein can be induced by
thiols."
/translation="CITGDALVALPEGESVRIADIVPGARPNSDNAIDLKVLDRHGNPV
LADRLFHSGEHPVYTVRTVEGLRVTGTANHPLLCLVDVAGVPTLLWKLIDEIKPGDYAV
IQRSAFSVDCAGFARGKPEFAPTTYTVGVPGLVRFLEAHHRDPDAQAIADELTDGRFYY
AKVASVTDAGVQPVYSLRVDTADHAFITNGFVSHA"
CDS 5295..5450
/codon_start=1
/gene="Bacillus circulans chiA"
/product="chitin binding domain from chitinase A1 (Watanabe
et al., 1994)"
/note="CBD"
/translation="TTNPGVSAWQVNTAYTAGQLVTYNGKTYKCLQPHTSLAGWEPSNV
PALWQLQ"
terminator 5529..5576
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
promoter 5636..5740
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 5741..6601
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin complement(6643..7156)
/direction=LEFT
/note="M13 ori"
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
rep_origin 7267..7855
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 atacactccg ctatcgctac gtgactgggt catggctgcg ccccgacacc cgccaacacc
61 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
121 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgaggca
181 gctgcggtaa agctcatcag cgtggtcgtg cagcgattca cagatgtctg cctgttcatc
241 cgcgtccagc tcgttgagtt tctccagaag cgttaatgtc tggcttctga taaagcgggc
301 catgttaagg gcggtttttt cctgtttggt cactgatgcc tccgtgtaag ggggatttct
361 gttcatgggg gtaatgatac cgatgaaacg agagaggatg ctcacgatac gggttactga
421 tgatgaacat gcccggttac tggaacgttg tgagggtaaa caactggcgg tatggatgcg
481 gcgggaccag agaaaaatca ctcagggtca atgccagccg aacgccagca agacgtagcc
541 cagcgcgtcg gccgccatgc cggcgataat ggcctgcttc tcgccgaaac gtttggtggc
601 gggaccagtg acgaaggctt gagcgagggc gtgcaagatt ccgaataccg caagcgacag
661 gccgatcatc gtcgcgctcc agcgaaagcg gtcctcgccg aaaatgaccc agagcgctgc
721 cggcacctgt cctacgagtt gcatgataaa gaagacagtc ataagtgcgg cgacgatagt
781 catgccccgc gcccaccgga aggagctgac tgggttgaag gctctcaagg gcatcggtcg
841 agatcccggt gcctaatgag tgagctaact tacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc
901 tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag
961 aggcggtttg cgtattgggc gccagggtgg tttttctttt caccagtgag acgggcaaca
1021 gctgattgcc cttcaccgcc tggccctgag agagttgcag caagcggtcc acgctggttt
1081 gccccagcag gcgaaaatcc tgtttgatgg tggttaacgg cgggatataa catgagctgt
1141 cttcggtatc gtcgtatccc actaccgaga tatccgcacc aacgcgcagc ccggactcgg
1201 taatggcgcg cattgcgccc agcgccatct gatcgttggc aaccagcatc gcagtgggaa
1261 cgatgccctc attcagcatt tgcatggttt gttgaaaacc ggacatggca ctccagtcgc
1321 cttcccgttc cgctatcggc tgaatttgat tgcgagtgag atatttatgc cagccagcca
1381 gacgcagacg cgccgagaca gaacttaatg ggcccgctaa cagcgcgatt tgctggtgac
1441 ccaatgcgac cagatgctcc acgcccagtc gcgtaccgtc ttcatgggag aaaataatac
1501 tgttgatggg tgtctggtca gagacatcaa gaaataacgc cggaacatta gtgcaggcag
1561 cttccacagc aatggcatcc tggtcatcca gcggatagtt aatgatcagc ccactgacgc
1621 gttgcgcgag aagattgtgc accgccgctt tacaggcttc gacgccgctt cgttctacca
1681 tcgacaccac cacgctggca cccagttgat cggcgcgaga tttaatcgcc gcgacaattt
1741 gcgacggcgc gtgcagggcc agactggagg tggcaacgcc aatcagcaac gactgtttgc
1801 ccgccagttg ttgtgccacg cggttgggaa tgtaattcag ctccgccatc gccgcttcca
1861 ctttttcccg cgttttcgca gaaacgtggc tggcctggtt caccacgcgg gaaacggtct
1921 gataagagac accggcatac tctgcgacat cgtataacgt tactggtttc acattcacca
1981 ccctgaattg actctcttcc gggcgctatc atgccatacc gcgaaaggtt ttgcgccatt
2041 cgatggtgtc cgggatctcg acgctctccc ttatgcgact cctgcattag gaagcagccc
2101 agtagtaggt tgaggccgtt gagcaccgcc gccgcaagga atggtgcatg ccggcatgcc
2161 gccctttcgt cttcaagaat taattcccaa ttccccaggc atcaaataaa acgaaaggct
2221 cagtcgaaag actgggcctt tcgttttatc tgttgtttgt cggtgaacgc tctcctgagt
2281 aggacaaatc cgccgggagc ggatttgaac gttgcgaagc aacggcccgg agggtggcgg
2341 gcaggacgcc cgccataaac tgccaggaat taattcccca ggcatcaaat aaaacgaaag
2401 gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt atctgttgtt tgtcggtgaa cgctctcctg
2461 agtaggacaa atccgccggg agcggatttg aacgttgcga agcaacggcc cggagggtgg
2521 cgggcaggac gcccgccata aactgccagg aattaattcc ccaggcatca aataaaacga
2581 aaggctcagt cgaaagactg ggcctttcgt tttatctgtt gtttgtcggt gaacgctctc
2641 ctgagtagga caaatccgcc gggagcggat ttgaacgttg cgaagcaacg gcccggaggg
2701 tggcgggcag gacgcccgcc ataaactgcc aggaattaat tccccaggca tcaaataaaa
2761 cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct
2821 ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca acggcccgga
2881 gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggaatt aattccccag gcatcaaata
2941 aaacgaaagg ctcagtcgaa agactgggcc tttcgtttta tctgttgttt gtcggtgaac
3001 gctctcctga gtaggacaaa tccgccggga gcggatttga acgttgcgaa gcaacggccc
3061 ggagggtggc gggcaggacg cccgccataa actgccagga attggggatc ggaattaatt
3121 cccggtttaa accggggatc tcgatcccgc gaaattaata cgactcacta taggggaatt
3181 gtgagcggat aacaattccc ctctagaaat aattttgtta actttaagaa ggagatatac
3241 atatgattac cagtgcactg catcgtgcgg cggattgggc gaaaagcgtg ttttctagtg
3301 ctgcgctggg tgatccgcgt cgtaccgcgc gtctggtgaa tgttgcggcg caactggcca
3361 aatatagcgg caaaagcatt accattagca gcgaaggcag caaagccatg caggaaggcg
3421 cgtatcgttt tattcgtaat ccgaacgtga gcgcggaagc gattcgtaaa gcgggtgcca
3481 tgcagaccgt gaaactggcc caggaatttc cggaactgct ggcaattgaa gataccacct
3541 ctctgagcta tcgtcatcag gtggcggaag aactgggcaa actgggtagc attcaggata
3601 aaagccgtgg ttggtgggtg catagcgtgc tgctgctgga agcgaccacc tttcgtaccg
3661 tgggcctgct gcatcaagaa tggtggatgc gtccggatga tccggcggat gcggatgaaa
3721 aagaaagcgg caaatggctg gccgctgctg caacttcgcg tctgagaatg ggcagcatga
3781 tgagcaacgt gattgcggtg tgcgatcgtg aagcggatat tcatgcgtat ctgcaagata
3841 aactggccca taacgaacgt tttgtggtgc gtagcaaaca tccgcgtaaa gatgtggaaa
3901 gcggcctgta tctgtatgat cacctgaaaa accagccgga actgggcggc tatcagatta
3961 gcattccgca gaaaggcgtg gtggataaac gtggcaaacg taaaaaccgt ccggcgcgta
4021 aagcgagcct gagcctgcgt agcggccgta ttaccctgaa acagggcaac attaccctga
4081 acgcggtgct ggccgaagaa attaatccgc cgaaaggcga aaccccgctg aaatggctgc
4141 tgctgaccag cgagccggtg gaaagtctgg cccaagcgct gcgtgtgatt gatatttata
4201 cccatcgttg gcgcattgaa gaatttcaca aagcgtggaa aacgggtgcg ggtgcggaac
4261 gtcagcgtat ggaagaaccg gataacctgg aacgtatggt gagcattctg agctttgtgg
4321 cggtgcgtct gctgcaactg cgtgaatctt ttactccgcc gcaagcactg cgtgcgcagg
4381 gcctgctgaa agaagcggaa cacgttgaaa gccagagcgc ggaaaccgtg ctgaccccgg
4441 atgaatgcca actgctgggc tatctggata aaggcaaacg caaacgcaaa gaaaaagcgg
4501 gcagcctgca atgggcgtat atggcgattg cgcgtctggg cggctttatg gatagcaaac
4561 gtaccggcat tgcgagctgg ggtgcgctgt gggaaggttg ggaagcgctg caaagcaaac
4621 tggatggctt tctggccgcg aaagacctga tggcgcaggg cattaaaatc tgcatcacgg
4681 gagatgcact agttgcccta cccgagggcg agtcggtacg catcgccgac atcgtgccgg
4741 gtgcgcggcc caacagtgac aacgccatcg acctgaaagt ccttgaccgg catggcaatc
4801 ccgtgctcgc cgaccggctg ttccactccg gcgagcatcc ggtgtacacg gtgcgtacgg
4861 tcgaaggtct gcgtgtgacg ggcaccgcga accacccgtt gttgtgtttg gtcgacgtcg
4921 ccggggtgcc gaccctgctg tggaagctga tcgacgaaat caagccgggc gattacgcgg
4981 tgattcaacg cagcgcattc agcgtcgact gtgcaggttt tgcccgcggg aaacccgaat
5041 ttgcgcccac aacctacaca gtcggcgtcc ctggactggt gcgtttcttg gaagcacacc
5101 accgagaccc ggacgcccaa gctatcgccg acgagctgac cgacgggcgg ttctactacg
5161 cgaaagtcgc cagtgtcacc gacgccggcg tgcagccggt gtatagcctt cgtgtcgaca
5221 cggcagacca cgcgtttatc acgaacgggt tcgtcagcca cgctactggc ctcaccggtc
5281 tgaactcagg cctcacgaca aatcctggtg tatccgcttg gcaggtcaac acagcttata
5341 ctgcgggaca attggtcaca tataacggca agacgtataa atgtttgcag ccccacacct
5401 ccttggcagg atgggaacca tccaacgttc ctgccttgtg gcagcttcaa tgactgcagg
5461 aaggggatcc ggctgctaac aaagcccgaa aggaagctga gttggctgct gccaccgctg
5521 agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga
5581 aaggaggaac tatatccgga taactacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg
5641 aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata
5701 accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg
5761 tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac
5821 gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact
5881 ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt tcccaatgat
5941 gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtgttgacg ccgggcaaga
6001 gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac
6061 agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat
6121 gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac
6181 cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct
6241 gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac
6301 gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga
6361 ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg
6421 gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact
6481 ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac
6541 tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta
6601 actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaccccggt tgataatcag
6661 aaaagcccca aaaacaggaa gattgtataa gcaaatattt aaattgtaaa cgttaatatt
6721 ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa
6781 atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag tgttgttcca
6841 gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc
6901 gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt tttggggtcg
6961 aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg
7021 ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg
7081 gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg
7141 ccgctacagg gcgcgtaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa
7201 aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg
7261 atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc
7321 gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac
7381 tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca
7441 ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt
7501 ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc
7561 ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg
7621 aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc
7681 cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac
7741 gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct
7801 ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc
7861 cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt
7921 tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac
7981 cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag ctatggtgca
8041 ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat agttaagcca gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3704/pCMV-SPORT6-TMEM59L（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3705/pCMV-SPORT6-ARMT1人源基因质粒 |
| P3706/pCMV-SPORT6-TFAP4人源基因质粒 |
| P3707/pCMV-SPORT6-RIOX1（2点突变1同义突变）人源基因质粒 |
| P3708/pCMV-SPORT6-OLFM2人源基因质粒 |
| P3710/pCMV-SPORT6-PCID2人源基因质粒 |
| P3711/pCMV-SPORT6-LRRC14（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3712/pCMV-SPORT6-GBA2人源基因质粒 |
| P3713/pCMV-SPORT6-RGR（3同义突变）人源基因质粒 |
| P3714/pCMV-SPORT6-VIPR2人源基因质粒 |
| P3715/pCMV-SPORT6-AMOTL2（730-2340）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
需求来确定所用的模板质粒。重组质粒载体构建可以经过酶切酶连、无缝克隆、Gateway 克隆等方式将目的片段连接到目标载体上，或者对载体上的一些元件进行改造。改造好的质粒转入大肠杆菌中进行扩增及抽提。 3、质粒抽提的一般操作流程 从培养的大肠杆菌中抽提质粒，一般需要经过大肠杆菌培养、菌液收集、菌体裂解、基因组 DNA 及蛋白沉淀、质粒吸附、质粒漂洗、质粒洗脱、质粒检测、质粒保存等流程。 内容来源：QIAGEN 凯杰
1. 琼脂糖凝胶电泳检测质粒为何有三条条带 通常完整的质粒电泳会看到多个电泳条带，这与质粒的多种形态有关。质粒可以有超螺旋，线性，开环等多种不同的形态，所以在电泳时常看到三条不同大小的条带，而最下面最亮的条带一般为超螺旋条带。 左图为电镜下的质粒形态，可以看到质粒有不同程度的超螺旋形态；右图为质粒电泳图 2. 质粒纯度不好 质粒中常见的污染杂质有蛋白质、基因组 DNA、RNA、乙醇等。这些杂质有可能是质粒提取过程中操作不当有关，比如： ①在加入裂解缓冲液后，剧烈震荡导致大肠杆菌基因
转位子 transposon 系在原核生物的染色体或质粒中存在的转移因子之一，因运输标记基因而得此名。根据其由来或标记基因的种类而分为Tn1，Tn2，Tn3…，已发现许多具有以决定耐药性基因作为标记基因。其结构上的特征为，其两端具有插入排列顺序或其一部分，此插入排列有同方向的，也有逆方向的。例如，运输耐卡那霉素基因Tn5。其两端具有为1460碱基对（bp）反方向的插入排列顺序（图）。而运输耐氯霉素基因Tng，在两端则有同方向的插入排列顺序（ISI）。转位子转移后，在接近
pTXB1-Tn5大肠基因质粒
￥100 - 1000
