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pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase

聚合酶基因质粒
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  • ¥100 - 1000
  • Xybio
  • 上海
  • P1758
  • 2025年07月10日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase聚合酶基因质粒
    别称: pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase
    启动子:CMV
    复制子: pUC
    原核抗性: Amp
    筛选标记:G418
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度

    质粒属性
    载体宿主:哺乳细胞
    载体用途:蛋白表达
    基因种属:
    基因类型:ORF
    原核抗性:Amp
    真核抗性:Neo/G418
    荧光蛋白:

    质粒简介
     pECMV-3×FLAG-T7 RNA polymerase是一个哺乳细胞T7 RNA聚合酶表达质粒。

    质粒图谱
    产品细节图片1

    质粒序列
    LOCUS       Exported                8134 bp ds-DNA     circular SYN 19-DEC-2017
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..8134
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         enhancer        235..614
                         /label=CMV enhancer
                         /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
         promoter        615..818
                         /label=CMV promoter
                         /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                         promoter"
         promoter        863..881
                         /label=T7 promoter
                         /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
         regulatory      913..922
                         /regulatory_class="other"
                         /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                         of translation (Kozak, 1987)"
         CDS             922..987
                         /codon_start=1
                         /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
                         enterokinase cleavage site"
                         /label=3xFLAG
                         /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
         CDS             1033..3690
                         /codon_start=1
                         /label=T7 RNA polymerase
                         /translation="MNTINIAKNDFSDIELAAIPFNTLADHYGERLAREQLALEHESYE
                         MGEARFRKMFERQLKAGEVADNAAAKPLITTLLPKMIARINDWFEEVKAKRGKRPTAFQ
                         FLQEIKPEAVAYITIKTTLACLTSADNTTVQAVASAIGRAIEDEARFGRIRDLEAKHFK
                         KNVEEQLNKRVGHVYKKAFMQVVEADMLSKGLLGGEAWSSWHKEDSIHVGVRCIEMLIE
                         STGMVSLHRQNAGVVGQDSETIELAPEYAEAIATRAGALAGISPMFQPCVVPPKPWTGI
                         TGGGYWANGRRPLALVRTHSKKALMRYEDVYMPEVYKAINIAQNTAWKINKKVLAVANV
                         ITKWKHCPVEDIPAIEREELPMKPEDIDMNPEALTAWKRAAAAVYRKDKARKSRRISLE
                         FMLEQANKFANHKAIWFPYNMDWRGRVYAVSMFNPQGNDMTKGLLTLAKGKPIGKEGYY
                         WLKIHGANCAGVDKVPFPERIKFIEENHENIMACAKSPLENTWWAEQDSPFCFLAFCFE
                         YAGVQHHGLSYNCSLPLAFDGSCSGIQHFSAMLRDEVGGRAVNLLPSETVQDIYGIVAK
                         KVNEILQADAINGTDNEVVTVTDENTGEISEKVKLGTKALAGQWLAYGVTRSVTKRSVM
                         TLAYGSKEFGFRQQVLEDTIQPAIDSGKGLMFTQPNQAAGYMAKLIWESVSVTVVAAVE
                         AMNWLKSAAKLLAAEVKDKKTGEILRKRCAVHWVTPDGFPVWQEYKKPIQTRLNLMFLG
                         QFRLQPTINTNKDSEIDAHKQESGIAPNFVHSQDGSHLRKTVVWAHEKYGIESFALIHD
                         SFGTIPADAANLFKAVRETMVDTYESCDVLADFYDQFADQLHESQLDKMPALPAKGNLN
                         LRDILESDFAFAFA"
         polyA_signal    3734..3958
                         /label=bGH poly(A) signal
                         /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
         rep_origin      4004..4432
                         /direction=RIGHT
                         /label=f1 ori
                         /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                         indicates direction of (+) strand synthesis"
         promoter        4446..4775
                         /label=SV40 promoter
                         /note="SV40 enhancer and early promoter"
         rep_origin      4626..4761
                         /label=SV40 ori
                         /note="SV40 origin of replication"
         CDS             4842..5636
                         /codon_start=1
                         /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                         /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                         /label=Neo
                         /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                         (Geneticin(R))"
                         /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                         VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                         SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                         GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                         LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
         polyA_signal    5810..5931
                         /label=SV40 poly(A) signal
                         /note="SV40 polyadenylation signal"
         rep_origin      complement(6382..6967)
                         /direction=LEFT
                         /label=ori
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
         CDS             complement(7138..7998)
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /label=Amp
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         promoter        complement(7999..8103)
                         /gene="bla"
                         /label=AmpR promoter
    ORIGIN
            1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
           61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
          121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
          181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
          241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
          301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
          361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
          421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
          481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
          541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
          601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
          661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
          721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
          781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
          841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
          901 gtttaaactt aagccaccat ggactacaaa gaccatgacg gtgattataa agatcatgac
          961 atcgactaca aggatgacga tgacaagctt ggtaccgagc tcggatccac tagtccagtg
         1021 tggtggaatt ctatgaacac gattaacatc gctaagaacg acttctctga catcgaactg
         1081 gctgctatcc cgttcaacac tctggctgac cattacggtg agcgtttagc tcgcgaacag
         1141 ttggcccttg agcatgagtc ttacgagatg ggtgaagcac gcttccgcaa gatgtttgag
         1201 cgtcaactta aagctggtga ggttgcggat aacgctgccg ccaagcctct catcactacc
         1261 ctactcccta agatgattgc acgcatcaac gactggtttg aggaagtgaa agctaagcgc
         1321 ggcaagcgcc cgacagcctt ccagttcctg caagaaatca agccggaagc cgtagcgtac
         1381 atcaccatta agaccactct ggcttgccta accagtgctg acaatacaac cgttcaggct
         1441 gtagcaagcg caatcggtcg ggccattgag gacgaggctc gcttcggtcg tatccgtgac
         1501 cttgaagcta agcacttcaa gaaaaacgtt gaggaacaac tcaacaagcg cgtagggcac
         1561 gtctacaaga aagcatttat gcaagttgtc gaggctgaca tgctctctaa gggtctactc
         1621 ggtggcgagg cgtggtcttc gtggcataag gaagactcta ttcatgtagg agtacgctgc
         1681 atcgagatgc tcattgagtc aaccggaatg gttagcttac accgccaaaa tgctggcgta
         1741 gtaggtcaag actctgagac tatcgaactc gcacctgaat acgctgaggc tatcgcaacc
         1801 cgtgcaggtg cgctggctgg catctctccg atgttccaac cttgcgtagt tcctcctaag
         1861 ccgtggactg gcattactgg tggtggctat tgggctaacg gtcgtcgtcc tctggcgctg
         1921 gtgcgtactc acagtaagaa agcactgatg cgctacgaag acgtttacat gcctgaggtg
         1981 tacaaagcga ttaacattgc gcaaaacacc gcatggaaaa tcaacaagaa agtcctagcg
         2041 gtcgccaacg taatcaccaa gtggaagcat tgtccggtcg aggacatccc tgcgattgag
         2101 cgtgaagaac tcccgatgaa accggaagac atcgacatga atcctgaggc tctcaccgcg
         2161 tggaaacgtg ctgccgctgc tgtgtaccgc aaggacaagg ctcgcaagtc tcgccgtatc
         2221 agccttgagt tcatgcttga gcaagccaat aagtttgcta accataaggc catctggttc
         2281 ccttacaaca tggactggcg cggtcgtgtt tacgctgtgt caatgttcaa cccgcaaggt
         2341 aacgatatga ccaaaggact gcttacgctg gcgaaaggta aaccaatcgg taaggaaggt
         2401 tactactggc tgaaaatcca cggtgcaaac tgtgcgggtg tcgataaggt tccgttccct
         2461 gagcgcatca agttcattga ggaaaaccac gagaacatca tggcttgcgc taagtctcca
         2521 ctggagaaca cttggtgggc tgagcaagat tctccgttct gcttccttgc gttctgcttt
         2581 gagtacgctg gggtacagca ccacggcctg agctataact gctcccttcc gctggcgttt
         2641 gacgggtctt gctctggcat ccagcacttc tccgcgatgc tccgagatga ggtaggtggt
         2701 cgcgcggtta acttgcttcc tagtgaaacc gttcaggaca tctacgggat tgttgctaag
         2761 aaagtcaacg agattctaca agcagacgca atcaatggga ccgataacga agtagttacc
         2821 gtgaccgatg agaacactgg tgaaatctct gagaaagtca agctgggcac taaggcactg
         2881 gctggtcaat ggctggctta cggtgttact cgcagtgtga ctaagcgttc agtcatgacg
         2941 ctggcttacg ggtccaaaga gttcggcttc cgtcaacaag tgctggaaga taccattcag
         3001 ccagctattg attccggcaa gggtctgatg ttcactcagc cgaatcaggc tgctggatac
         3061 atggctaagc tgatttggga atctgtgagc gtgacggtgg tagctgcggt tgaagcaatg
         3121 aactggctta agtctgctgc taagctgctg gctgctgagg tcaaagataa gaagactgga
         3181 gagattcttc gcaagcgttg cgctgtgcat tgggtaactc ctgatggttt ccctgtgtgg
         3241 caggaataca agaagcctat tcagacgcgc ttgaacctga tgttcctcgg tcagttccgc
         3301 ttacagccta ccattaacac caacaaagat agcgagattg atgcacacaa acaggagtct
         3361 ggtatcgctc ctaactttgt acacagccaa gacggtagcc accttcgtaa gactgtagtg
         3421 tgggcacacg agaagtacgg aatcgaatct tttgcactga ttcacgactc cttcggtacc
         3481 attccggctg acgctgcgaa cctgttcaaa gcagtgcgcg aaactatggt tgacacatat
         3541 gagtcttgtg atgtactggc tgatttctac gaccagttcg ctgaccagtt gcacgagtct
         3601 caattggaca aaatgccagc acttccggct aaaggtaact tgaacctccg tgacatctta
         3661 gagtcggact tcgcgttcgc gttcgcgtaa ctcgagtcta gagggcccgt ttaaacccgc
         3721 tgatcagcct cgactgtgcc ttctagttgc cagccatctg ttgtttgccc ctcccccgtg
         3781 ccttccttga ccctggaagg tgccactccc actgtccttt cctaataaaa tgaggaaatt
         3841 gcatcgcatt gtctgagtag gtgtcattct attctggggg gtggggtggg gcaggacagc
         3901 aagggggagg attgggaaga caatagcagg catgctgggg atgcggtggg ctctatggct
         3961 tctgaggcgg aaagaaccag ctggggctct agggggtatc cccacgcgcc ctgtagcggc
         4021 gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc
         4081 ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc
         4141 cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc
         4201 gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg
         4261 gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact
         4321 ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt
         4381 tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttaattctgt
         4441 ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc
         4501 aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag
         4561 gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg cccctaactc
         4621 cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat ggctgactaa
         4681 ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctctgcctc tgagctattc cagaagtagt
         4741 gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct cccgggagct tgtatatcca
         4801 ttttcggatc tgatcaagag acaggatgag gatcgtttcg catgattgaa caagatggat
         4861 tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg agaggctatt cggctatgac tgggcacaac
         4921 agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt tccggctgtc agcgcagggg cgcccggttc
         4981 tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc tgaatgaact gcaggacgag gcagcgcggc
         5041 tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag
         5101 cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc
         5161 ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg
         5221 atccggctac ctgcccattc gaccaccaag cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc
         5281 ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg atctggacga agagcatcag gggctcgcgc
         5341 cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcgc gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga
         5401 cccatggcga tgcctgcttg ccgaatatca tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca
         5461 tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc gctatcagga catagcgttg gctacccgtg
         5521 atattgctga agagcttggc ggcgaatggg ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg
         5581 ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct atcgccttct tgacgagttc ttctgagcgg
         5641 gactctgggg ttcgaaatga ccgaccaagc gacgcccaac ctgccatcac gagatttcga
         5701 ttccaccgcc gccttctatg aaaggttggg cttcggaatc gttttccggg acgccggctg
         5761 gatgatcctc cagcgcgggg atctcatgct ggagttcttc gcccacccca acttgtttat
         5821 tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt
         5881 tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt atcatgtctg
         5941 tataccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg tcatagctgt ttcctgtgtg
         6001 aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc ggaagcataa agtgtaaagc
         6061 ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt
         6121 ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg
         6181 cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt
         6241 tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc
         6301 aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa
         6361 aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa
         6421 tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc
         6481 ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc
         6541 cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag
         6601 ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga
         6661 ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc
         6721 gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac
         6781 agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg
         6841 cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca
         6901 aaccaccgct ggtagcggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
         6961 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
         7021 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
         7081 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
         7141 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
         7201 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
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    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片2
    产品细节图片3
    P3918/pCMV-SPORT6-PBLD(1同义突变)人源基因质粒
    P3919/pCMV-SPORT6-SRPRA人源基因质粒
    P3920/pCMV-SPORT6-FAM206A人源基因质粒
    P3921/pCMV-SPORT6-CLDN11人源基因质粒
    P3922/pCMV-SPORT6-CAST(52-2253bp)人源基因质粒
    P3923/pCMV-SPORT6-MFN2人源基因质粒
    P3924/pCMV-SPORT6-G0S2人源基因质粒
    P3925/pCMV-SPORT6-TUBG2人源基因质粒
    P3926/pCMV-SPORT6-UBLCP1人源基因质粒
    P3927/pCMV-SPORT6-TADA3人源基因质粒
    P3928/pCMV-SPORT6-PTS人源基因质粒

     

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    图标文献和实验
    相关实验
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