pET11a-Hiv-1-Protease病毒基因质粒

基本信息
名称：pET11a-Hiv-1-Protease病毒基因质粒
别称: pET11a-Hiv-1-Protease
启动子：T7
复制子: pBR322
终止子:  T7 ter
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：病毒
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pET11a-Hiv-1-Protease是一个病毒基因大肠杆菌表达质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5977 bp ds-DNA     circular SYN 02-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5977
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        1..19
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     protein_bind    20..44
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     CDS             89..424
                     /codon_start=1
                     /label=HIV-1
                     /translation="MADRQGTVSFSFPQITLWQRPLVTIKIGGQLKEALLDTGADDTVL
                     EEMNLPGRWKPKMIGGIGGFIKVRQYDQILIEICGHKAIGTVLVGPTPVNIIGRNLLTQ
                     IGCTLNF"
     terminator      489..536
                     /label=T7 terminator
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 
                     polymerase"
     promoter        852..956
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             957..1817
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1988..2576
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(3006..3197)
                     /codon_start=1
                     /gene="rop"
                     /product="Rop protein"
                     /label=rop
                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"
     CDS             complement(4509..5591)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                     /label=lacI
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
     promoter        complement(5592..5669)
                     /gene="lacI"
                     /label=lacI promoter
ORIGIN
        1 taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa ttcccctcta gaaataattt
       61 tgtttaactt taagaaggag atatacatat ggccgataga caaggaactg tatcctttag
      121 cttccctcag atcactcttt ggcagcgacc cctcgtcaca ataaagatag gggggcaatt
      181 aaaggaagct ctattagata caggagcaga tgatacagta ttagaagaaa tgaatttgcc
      241 aggaagatgg aaaccaaaaa tgataggggg aattggaggt tttatcaaag taagacagta
      301 tgatcagata ctcatagaaa tctgcggaca taaagctata ggtacagtat tagtaggacc
      361 tacacctgtc aacataattg gaagaaatct gttgactcag attggttgca ctttaaattt
      421 ttagggatcc ggctgctaac aaagcccgaa aggaagctga gttggctgct gccaccgctg
      481 agcaataact agcataaccc cttggggcct ctaaacgggt cttgaggggt tttttgctga
      541 aaggaggaac tatatccgga tatcccgcaa gaggcccggc agtaccggca taaccaagcc
      601 tatgcctaca gcatccaggg tgacggtgcc gaggatgacg atgagcgcat tgttagattt
      661 catacacggt gcctgactgc gttagcaatt taactgtgat aaactaccgc attaaagctt
      721 atcgatgata agctgtcaaa catgagaatt cttgaagacg aaagggcctc gtgatacgcc
      781 tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc
      841 ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc
      901 cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga
      961 gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt
     1021 ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag
     1081 tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag
     1141 aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgtg
     1201 ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg
     1261 agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca
     1321 gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag
     1381 gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc
     1441 gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg
     1501 cagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc
     1561 ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg
     1621 cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg
     1681 gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga
     1741 cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac
     1801 tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa
     1861 aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca
     1921 aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag
     1981 gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac
     2041 cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa
     2101 ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc
     2161 accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag
     2221 tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac
     2281 cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc
     2341 gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc
     2401 ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca
     2461 cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc
     2521 tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg
     2581 ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct
     2641 ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata
     2701 ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc
     2761 gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc atatatggtg
     2821 cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc atagttaagc cagtatacac tccgctatcg
     2881 ctacgtgact gggtcatggc tgcgccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga
     2941 cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc
     3001 atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga ggcagctgcg gtaaagctca
     3061 tcagcgtggt cgtgaagcga ttcacagatg tctgcctgtt catccgcgtc cagctcgttg
     3121 agtttctcca gaagcgttaa tgtctggctt ctgataaagc gggccatgtt aagggcggtt
     3181 ttttcctgtt tggtcactga tgcctccgtg taagggggat ttctgttcat gggggtaatg
     3241 ataccgatga aacgagagag gatgctcacg atacgggtta ctgatgatga acatgcccgg
     3301 ttactggaac gttgtgaggg taaacaactg gcggtatgga tgcggcggga ccagagaaaa
     3361 atcactcagg gtcaatgcca gcgcttcgtt aatacagatg taggtgttcc acagggtagc
     3421 cagcagcatc ctgcgatgca gatccggaac ataatggtgc agggcgctga cttccgcgtt
     3481 tccagacttt acgaaacacg gaaaccgaag accattcatg ttgttgctca ggtcgcagac
     3541 gttttgcagc agcagtcgct tcacgttcgc tcgcgtatcg gtgattcatt ctgctaacca
     3601 gtaaggcaac cccgccagcc tagccgggtc ctcaacgaca ggagcacgat catgcgcacc
     3661 cgtggccagg acccaacgct gcccgagatg cgccgcgtgc ggctgctgga gatggcggac
     3721 gcgatggata tgttctgcca agggttggtt tgcgcattca cagttctccg caagaattga
     3781 ttggctccaa ttcttggagt ggtgaatccg ttagcgaggt gccgccggct tccattcagg
     3841 tcgaggtggc ccggctccat gcaccgcgac gcaacgcggg gaggcagaca aggtataggg
     3901 cggcgcctac aatccatgcc aacccgttcc atgtgctcgc cgaggcggca taaatcgccg
     3961 tgacgatcag cggtccagtg atcgaagtta ggctggtaag agccgcgagc gatccttgaa
     4021 gctgtccctg atggtcgtca tctacctgcc tggacagcat ggcctgcaac gcgggcatcc
     4081 cgatgccgcc ggaagcgaga agaatcataa tggggaaggc catccagcct cgcgtcgcga
     4141 acgccagcaa gacgtagccc agcgcgtcgg ccgccatgcc ggcgataatg gcctgcttct
     4201 cgccgaaacg tttggtggcg ggaccagtga cgaaggcttg agcgagggcg tgcaagattc
     4261 cgaataccgc aagcgacagg ccgatcatcg tcgcgctcca gcgaaagcgg tcctcgccga
     4321 aaatgaccca gagcgctgcc ggcacctgtc ctacgagttg catgataaag aagacagtca
     4381 taagtgcggc gacgatagtc atgccccgcg cccaccggaa ggagctgact gggttgaagg
     4441 ctctcaaggg catcggtcga gatcccggtg cctaatgagt gagctaactt acattaattg
     4501 cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa
     4561 tcggccaacg cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc
     4621 accagtgaga cgggcaacag ctgattgccc ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc
     4681 aagcggtcca cgctggtttg ccccagcagg cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc
     4741 gggatataac atgagctgtc ttcggtatcg tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca
     4801 acgcgcagcc cggactcggt aatggcgcgc attgcgccca gcgccatctg atcgttggca
     4861 accagcatcg cagtgggaac gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg
     4921 gacatggcac tccagtcgcc ttcccgttcc gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga
     4981 tatttatgcc agccagccag acgcagacgc gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac
     5041 agcgcgattt gctggtgacc caatgcgacc agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct
     5101 tcatgggaga aaataatact gttgatgggt gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc
     5161 ggaacattag tgcaggcagc ttccacagca atggcatcct ggtcatccag cggatagtta
     5221 atgatcagcc cactgacgcg ttgcgcgaga agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg
     5281 acgccgcttc gttctaccat cgacaccacc acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat
     5341 ttaatcgccg cgacaatttg cgacggcgcg tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca
     5401 atcagcaacg actgtttgcc cgccagttgt tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc
     5461 tccgccatcg ccgcttccac tttttcccgc gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc
     5521 accacgcggg aaacggtctg ataagagaca ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt
     5581 actggtttca cattcaccac cctgaattga ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg
     5641 cgaaaggttt tgcgccattc gatggtgtcc gggatctcga cgctctccct tatgcgactc
     5701 ctgcattagg aagcagccca gtagtaggtt gaggccgttg agcaccgccg ccgcaaggaa
     5761 tggtgcatgc aaggagatgg cgcccaacag tcccccggcc acggggcctg ccaccatacc
     5821 cacgccgaaa caagcgctca tgagcccgaa gtggcgagcc cgatcttccc catcggtgat
     5881 gtcggcgata taggcgccag caaccgcacc tgtggcgccg gtgatgccgg ccacgatgcg
     5941 tccggcgtag aggatcgaga tctcgatccc gcgaaat
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P0571/pEGFP-Rab11b-S25N人源基因质粒 P0573/pCDNA3.1-BMP4人源基因质粒 P0574/pCDNA3.1-FLAG-Ubc13人源基因质粒 P0575/pCS2-EGFP-EB3人源基因质粒 P0576/pEGFP-CagA人源基因质粒 P0581/pEGFP-IL10人源基因质粒 P0590/pCDNA3.1-V5-FLAG-USP22人源基因质粒 P0512/FUW-tetO-hKLF4人源基因质粒 P0513/pMXs-hc-MYC人源基因质粒 P0514/FUW-tetO-hSOX2人源基因质粒 P0515/pMXs-hKLF4人源基因质粒