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- Xybio
- 上海
- P4520
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_009425.2;A330042I21Rik;AI448571;A
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pEGFP-Tnfsf10-m（39-291bp）小鼠基因质粒
别称: NM_009425.2;A330042I21Rik;AI448571;A
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pEGFP-Tnfsf10-m（39-291bp）小鼠基因质粒
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4251/pCMV-SPORT6-TMEM187人源基因质粒 |
| P4252/pCMV-SPORT6-TAF1B人源基因质粒 |
| P4253/pCMV-SPORT6-NDRG2（1点突变）人源基因质粒 |
| P4255/pCMV-SPORT6-AMY2B人源基因质粒 |
| P4256/pCMV-SPORT6-CCAR2人源基因质粒 |
| P4257/pCMV-SPORT6-SCAMP3人源基因质粒 |
| P4258/pCMV-SPORT6-CLU人源基因质粒 |
| P4259/pCMV-SPORT6-MED8（14-906bp）人源基因质粒 |
| P4261/pCMV-SPORT6-ZKSCAN7人源基因质粒 |
| P4262/pCMV-SPORT6-CST3人源基因质粒 |
| P4264/pCMV-SPORT6-C1QTNF6人源基因质粒 |
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文献和实验用ReadyMixTM PCR Reaction Mix进行拟南芥SSLP
mix (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), stabilizers, 0.06 unit/µl Taq DNA Polymerase）。 用CER456772 SSLP Marker, Col 348 bp, Ler 291 bp. All primer stocks: 100 µM. 90 µl H2O + 10 µl primer stocks = 10 µM primer. 32 Samples + 2 Col DNA + 2 Ler DNA + 2 F1
的表达系统会造成质粒的不稳定，细胞生长速度的下降和重组蛋白产量的降低[32，33]。Lanzer和Bujard曾对常用的lac启动子-操纵子系统进行了广泛的研究，证明操纵子放在启动子序列的不同位置会造成70倍差异的抑制。将17bp的操纵子置于-10和-35六聚体区之间所形成的抑制比将其放在-35区的上游或-10区的下游要高50-70倍[34]。 启动子的第三个特性是其简便和廉价的可诱导性。大量生产蛋白质最常用的启动子是热诱导（λPL）和化学诱导(trp)启动子。异丙基硫代-β-D-半乳糖
. 39. Ding, X. D ., S ch n eid er, W. L . , C halu vad i, S. R . , M ian , M. A. R. an d N elso n , R. S. (2 0 0 6 ) C haracterization of a Brome mosaic virus strain and its u se as a vector for gene silen cin g in
