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- Xybio
- 上海
- P2175
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_001039353.2;NOPP130;NOPP140;P130
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSV40-Nolc1-m(有突变)小鼠基因质粒
别称: NM_001039353.2;NOPP130;NOPP140;P130
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：小鼠
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pSV40-Nolc1-m(有突变)质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0546/pCMV-FLAG-TRAF3人源基因质粒 |
| P0547/pCDEF-FLAG-β-catenin人源基因质粒 |
| P2671/pCDEF-FLAG-β-catenin-S675A人源基因质粒 |
| P0548/pCDEF-FLAG-IRF3人源基因质粒 |
| P0549/pCDNA3-NR3C1人源基因质粒 |
| P0550/C-Myc人源基因质粒 |
| P0551/SOX2人源基因质粒 |
| P0552/HA-p73α-pCDNA3人源基因质粒 |
| P0553/pEGFP-C3-STING人源基因质粒 |
| P0556/pCDNA3.1(+)-hIAPP人源基因质粒 |
| P0557/pCDNA3.1-adiponetin人源基因质粒 |
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自杀性质粒载体：一般用于基因突变。将突变的目的基因克隆到自杀性质粒载体上，通过接合等使其进入宿主，由于在宿主菌中不存在复制基因启始所需的复制蛋白（如Pi蛋白等），其无法复制，在外界选择性压力的作用下,自杀性质粒载体所携带的突变基因就与宿主染色体上的野生型发生基因发生二次同源重组，产生了带有突变的突变株；而质粒载体自身由于自杀性特性连同染色体上原有的野生型基因一起随着细菌的传代从菌体内消失。至于一次重组的突变株，可借助质粒上的某些选择基因（如sacB，sucrose敏感）筛除。整合载体：将目的
1． 临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。 2． 将用氯化铯纯化的 10 μ g 质粒 DNA 加到含 500 μ l 羟胺溶液的微型离心管。 3． 在 37 ℃下培养 20 小时。 4． 加入 10 μ l 的 5mol/L NaCl 、 50 μ g 1mg/ml 的牛血清蛋白（ BSA ）和 1ml 无水乙醇终止反应，置－ 70 ℃沉淀 DNA10 分钟。 5． 离心 10 分钟，小心弃去所有上清液，收集 DNA 。
